保健食品中皂苷類化合物檢驗(yàn)

1、保健食品中皂苷類化合物檢驗(yàn) (一)主要來(lái)源 皂苷(saponin)廣泛存在于植物中，在百合科、薯蕷科、玄參科、豆科、遠(yuǎn)志科、五加科等植物中含量較高。許多中草藥和其他植物中都含有皂苷，如人參、柴胡、遠(yuǎn)志、大豆等。皂苷結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且彼此差異較大。按皂苷元的化學(xué)結(jié)構(gòu)皂苷可分為兩大類：一類為甾體皂苷，多由27個(gè)碳原子所組成，主要來(lái)源于百合科、薯蕷科和玄參科；另一類為三萜皂苷，多由30個(gè)碳原子組成，主要來(lái)源于五加科、遠(yuǎn)志科、葫蘆科和豆科。 人參皂苷(ginsenoside )屬于三萜類皂苷，是人參、西洋參和三七中的主要有效成分。主要有人參皂苷 ra1、ra2、rb1、rb2、rc、rd、re、rf、rg1

2、、rg2、rh1、rh2、rh3等。黃芪皂苷(astragaloside)主要來(lái)源于豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，主要有黃芪皂苷i，其中黃芪皂苷又稱黃芪甲苷(astragaloside )。 (二)理化性質(zhì) 皂苷多為白色或乳白色無(wú)定形粉末，少數(shù)為晶體，大多數(shù)皂苷分子大、不易結(jié)晶，易吸潮，具有苦味或辛辣味。皂苷分子極性較大，易溶于熱水、熱、中，且在中有較大的溶解度，難溶于、等有機(jī)溶劑。皂苷能和某些試劑，如濃硫酸、等產(chǎn)生色彩反應(yīng)。 (三)保健功能 皂苷對(duì)人體的新陳代謝起著重要的生理作用。它可以抑制血清中脂類氧化，防止過(guò)氧化脂質(zhì)對(duì)肝的損傷和動(dòng)脈硬化，具有抗年輕的作用。某些皂苷還具有解熱、冷靜、

3、抗腫瘤等活性。個(gè)別皂苷有特別的生理活性，如人參皂苷能增進(jìn)dna和蛋白質(zhì)的合成，提高機(jī)體的免疫力；三七皂苷具有擴(kuò)張冠狀血管，降低心肌耗氧，庇護(hù)心臟的功效；遠(yuǎn)志、桔梗皂苷等有祛痰止咳的作用；柴胡皂苷有抗菌活性；大豆皂苷具有降低、抗血栓功效等。 (四)分析辦法 頻繁的有分光光度法、薄層掃描法、氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)使用等。分光光度法常用于總皂昔的測(cè)定；高效液相色譜法是目前檢測(cè)皂苷類成分最常用的辦法，檢測(cè)器主要有紫外檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器和示差檢測(cè)器。目前我國(guó)“保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范”推舉辦法有“保健食品中總皂苷的分光光度法”和“保健食品中的人參皂苷的高效液相色

4、譜法”。 二、保健食品中總皂苷檢驗(yàn) 1原理保健食品中的總皂苷用水經(jīng)超聲波提取，amberlite-xad-2大孔樹(shù)脂預(yù)柱分別凈化，在酸性條件下，提取物中總皂苷與香草醛生成有色化合物，以人參皂苷re為標(biāo)準(zhǔn)，于560nm波特長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 2.分析步驟 (1)樣品處理：對(duì)于固體試樣，稱取一定量的樣品，加入一定量的水，超聲波提取，水定容，搖勻。 對(duì)于含有乙醇的液體樣品，在水浴上揮干，用水溶解殘?jiān)?，舉行柱層析。非類的液體試樣，可按照其濃度凹凸，稀釋后取一定量舉行柱層析。 用內(nèi)裝amberlite-xad-2大孔樹(shù)脂和少量中性氧化鋁的10m1注射器作層析管。依次用70乙醇和水洗柱，棄

5、洗脫液。加入已處理好的樣液，用水洗柱，棄洗脫液，再用70洗脫人參皂苷，收集洗脫液，置于60水浴上揮干。 (2)測(cè)定：吸取一定量人參皂苷re標(biāo)準(zhǔn)溶液，低于60揮干溶劑后，與上述處理過(guò)的樣品同時(shí)精確加入香草醛冰乙酸溶液和，60水浴上加熱15分鐘，冰浴冷卻后，精確加入，搖勻，于560nm波特長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。 3.辦法解釋顯色時(shí)光和溫度對(duì)結(jié)果均有影響，故在試驗(yàn)中應(yīng)注重精確控制；因具有揮發(fā)性，加入后應(yīng)立刻測(cè)定。大孔樹(shù)脂是一種具有吸附速度快、挑選性好、易解吸附的高分子吸附劑。本辦法選用amberlite-xad-2或d101大孔樹(shù)脂做固相分別、凈化能達(dá)到良好的效果。 三、保健食品中人參皂苷檢驗(yàn) 1原理保健

6、食品中的人參皂苷經(jīng)提取、凈化處理后，采納梯度洗脫，反相c18柱色譜分別，紫外檢測(cè)器檢測(cè)。按照色譜峰的保留時(shí)光定性，峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，可用于保健食品中人參皂苷re、rg1、rb1、rc、rb2、rd的同時(shí)定量分析。 2，分析步驟 (1)樣品處理：對(duì)于固體試樣，取片劑或膠囊內(nèi)容物研成粉末，并過(guò)20目篩；精確稱取一定量樣品加水超聲波提取，精確取出一定量樣液，通過(guò)d-101大孔吸附樹(shù)脂凈化柱(大孔吸附樹(shù)脂用法前先經(jīng)甲醇浸泡，水洗)。先用水洗去雜質(zhì)，棄去水洗脫液，然后用70洗脫皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ荨㈦x心、過(guò)濾后，舉行色譜分析。 對(duì)于液體試樣，取一定量的試樣于水浴上蒸干

7、，殘?jiān)铀贸暡ㄌ崛。嘞虏襟E同固體試樣處理。 (2)測(cè)定：色譜條件為反相c18柱(250mm×4.6mm, 5 um)；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流淌相：a液為乙腈,b液為水；梯度洗脫：020分鐘，16%a+84%b18%a+82%b; 2055分鐘，18%a+82%b40%a+60%b;5575分鐘，40%a+60%b100%a ; 7580分鐘，100%a16%a+84%b；柱溫：35；流速：1ml/min。 3辦法解釋 (1)經(jīng)紫外掃描，人參皂苷在190200nm有最大汲取，考慮到檢測(cè)波長(zhǎng)在200nm以下多數(shù)有機(jī)物都有很強(qiáng)的紫外汲取，對(duì)測(cè)定干擾大，本試驗(yàn)選用203nm為檢測(cè)波長(zhǎng)

8、。 (2)本辦法對(duì)六種人參皂苷的最低檢出濃度為10mg/g。適用于人參含片、人參沖劑、人參茶、人參膠囊等以人參為主要原料的保健食品中人參皂苷的含量的測(cè)定。 四、保健食品中黃芪甲苷檢驗(yàn) 1原理保健食品中的黃芪甲苷經(jīng)提取、濃縮等前處理后，反相c18柱色譜分別，以乙腈-水為流淌相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。按照色譜峰的保留時(shí)光定性，峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 2分析步驟 (1)樣品處理：對(duì)于固體試樣，取片劑或膠囊內(nèi)容物研成粉末，混勻，精確稱取一定量樣品置于索氏提取器中，加甲醇冷浸過(guò)夜，加熱回流4小時(shí)，提取液回收甲醇至干，殘?jiān)铀?，微熱使溶解，以乙醚輕搖洗滌兩次，水溶液再用水飽和的正丁醇振搖提取6次，合并正丁醇提取液，用氨水洗滌3次，正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ?、過(guò)濾后，舉行色譜分析。 對(duì)于液體試樣，取一定量的試樣減壓濃縮至近干，殘?jiān)铀芙?，余下步驟同固體試樣處理。 (2)測(cè)定：色譜條件為反相c18柱(250mm×4.6mm, 5um);柱溫：35；檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，溫度100,氮?dú)饬魉?.