急性低氧合油酸性大鼠肺損傷模型的復(fù)制及已酮可可堿的治療作用

1、    急性低氧合油酸性大鼠肺損傷模型的復(fù)制 及已酮可可堿的治療作用*        急性低氧狀態(tài)下的急性肺損傷發(fā)病率高，病情嚴重，其機理尚不清楚。本研究旨在建立急性低氧狀態(tài)下急性肺損傷動物模型，籍以探討急性低氧條件下，急性肺損傷的病理生理特征及其機理。 方法分別參照周照年和朱運奎等方法并加以改進復(fù)制急性低氧動物模型，在此基礎(chǔ)上按Dickey的方法略加改動，復(fù)制大鼠油酸急性肺損傷模型。實驗用雄性Wistar大鼠，體重250±30g。步驟：每次34只大鼠放入

2、小動物低壓倉內(nèi)，自由飲水、勻速減壓至模型海拔6000m高度(PB 47.3 kPa)，減壓12h。然后用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，行氣管切開、插管、頸總動脈和頸外靜脈插管。術(shù)畢大鼠吸入9.78% O2混合氣體，使其低氧條件與減壓倉內(nèi)相同。30min后開始實驗。抽對照血氣后，立即從上腔靜脈注入油酸，劑量為1015L/100 g體重，15min注完。對照組注入等量的生理鹽水。實驗分為(1)對照組：10只。實驗條件和手術(shù)過程同上，上腔靜脈注入生理鹽水，劑量為1015L/100 g。(2)油酸組(oleic acid, OA)：40只，上腔靜脈注入油酸1015L/100g，觀察時間為1h、2h、3h

3、、4h.每一時相點處死10只動物。留樣品備測。(3)油酸+己酮可可堿(OA+PTX)組：40只，動物注入油酸后，立即給予己酮可可堿(上海十六制藥廠，含量98.77%)，首劑為2mg/100g，維持劑量為1 mg·100 g-1·h-1，觀察時間和樣品的留取同油酸組。血氣分析：大鼠麻醉后，妥善固定，吸入9.78% O2混合氣體30min后，在隔絕空氣條件下抽取肝素抗凝血，以IL 1303(美國產(chǎn))血氣分析儀測定PaO2。肺組織取材和病理檢查：在設(shè)計的時點放血活殺動物，每組取6只大鼠，固定取右下肺膈葉，質(zhì)量分數(shù)為10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡檢查其病

4、理變化。肺組織濕/干重比測定：將雙肺取下，除去脂肪、肺外大血管和氣管后，用濾紙吸干肺表面血跡，稱濕重，90 72h烤干后立即稱干重并計算濕/干重比。采用本校統(tǒng)計學(xué)教研室Scheffe程序包，對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析。結(jié)果由上腔靜脈注入油酸10L/100g后，立即出現(xiàn)呼吸加快，頻率達130次min，呼吸窘迫，口唇發(fā)紺，與注油酸前比，呼吸頻率增加非常顯著(P<0.01)。Groupn0h1h2h3h4hOA406.56±1.155.49±0.55*5.42±0.5*5.38±0.67*5.66±0.51*OA+PTX406.25±0.

5、515.06±0.34*5.14±0.14*5.18±0.11*5.43±0.77*Contorl106.56±0.946.63±0.866.59±0.246.71±0.766.63±0.18*P<0.05,vs control group;OA:oleic acid;PTX:pentoxifyline 表2三組大鼠肺濕干比值變化Tab 2 The changes of wet /dry ratio of lung in oleic acid induced lung injury in rats(

6、+s)Groupn0h1h2h3h4hOA152.36±0.222.89±0.212.93±0.244.16±0.23*5.48±0.30*OA+PTX152.40±0.192.55±0.203.67±0.203.77±0.22*4.50±0.28*Contorl62.82±0.232.33±0.212.40±0.182.38±0.222.42±0.16*P<0.05，*P<0.01, vs control group 肺水含量(溫/

7、干比)油酸組、油酸+已酮可可堿組肺水含量增加顯著大于對照組，隨時間的處長而加重(P<0.01)(表2)。油酸+已酮可可堿組肺水含量顯著低于油酸組(P<0.05)。說明已酮可可堿可減輕急性低氧油酸肺損傷的肺水腫。血氣分析結(jié)果表明，油酸組傷后各時點PaO2與傷前比均顯著降低(P<0.05),3h達最低值,此后稍有回升,但始終未恢復(fù)到對照水平.油酸+已酮可可堿組PaO2無明顯改善,與傷前比仍顯著降低,并低于對照組(P<0.05)。各組PaO2傷前和傷后以及組間比較均無顯著性差異,(P<0.05)。病理檢查結(jié)果青蛙,大體充血、水腫，肺表面見較多滲出，散在較多暗紅色斑片，伴

8、有多量點片血。肺剖面見較多粉紅色泡沫狀液體，鏡檢可見，注入油酸后14肺泡腔含有大量水腫液，肺泡隔增寬，血管周圍水腫套形成，中性白細胞浸潤。油酸+已酮可可堿組病理變化較油酸組輕。討論結(jié)果提示把小動物入入減丈夫倉進行減壓，能反映高海拔急生低氧狀況。在此基礎(chǔ)上，從插管的上腔靜脈直接注入油酸，達到劑量準確，反應(yīng)迅速，又防止了油酸注射中的外漏，使模型復(fù)制成功率達100%。從血氣分析、病理改變、肺水含量等結(jié)果表明，急性低氧油酸急生肺損傷模型病情嚴重，病理改變明顯，肺水含量增加，接近于臨床急性肺損傷的改變。盡管用油酸復(fù)制急性肺損傷模型并非十分理想，但油酸所致的肺部病理生理改變，及其損傷后的急生反應(yīng)過程與臨床

9、頗為相似。因高原急性肺損傷特點之一是低氧所致的肺損傷呈現(xiàn)為高壓力和高通透性非心源性肺水腫，這正是本實驗的目的所在。油酸急性肺損傷模型復(fù)制的關(guān)鍵是，準確注入一定量的油酸，因綦主入量很小，不易準確挖掘注入量。為此，國內(nèi)外一些研究者采用鹽水、白蛋白、已酮等使油酸乳化或分次給予。但這些措施影響了油酸急性肺損傷模型的病變程度。故我們通過頸外靜脈插管的辦法，準確注入油酸。結(jié)果青蛙，大鼠注入油酸后，呼吸加快非常顯著，窘迫，口唇發(fā)紺，嚴重者口鼻有粉紅色泡沫液體溢出。血氣示PaO2顯著降低，最低達4.32kPa。病理檢查所見與文獻報道的實驗急性肺損傷模型基本相符。采用已酮可可堿對急性低氧油酸肺損傷進行治療，減輕血管外肺含水