牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制備

1、20082009學年第二學期實訓一 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制備（6學時）一、目的和要求1、掌握鹽析法的原理和操作；2、掌握等電點沉淀法的原理和基本操作。二、實驗原理牛奶中主要的蛋白質是酪蛋白，乳蛋白素是一種廣泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白質。酪蛋白在pH4.8左右會沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才會沉淀。利用此一性質，可先將pH降至4.8，或是在加熱至40的牛奶中加硫酸鈉，將酪蛋白沉淀出來。酪蛋白不溶于乙醇，這個性質被利用來從酪蛋白粗制劑中除去脂類雜質。將去除掉酪蛋白的濾液的pH調至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分雜質即可隨澄清液除去。再經(jīng)過一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素

2、。三、實驗材料1、材料脫脂牛乳或低脂牛乳（50ml）、蒸餾水2、器材100ml量筒、100ml燒杯（2個）、250ml燒杯、水浴鍋、玻璃棒、布氏漏斗、濾紙、抽濾瓶、真空泵、pH計、pH試紙、離心機、離心管、磁力攪拌器3、試劑無水硫酸鈉、無水乙醇、濃HCl、NaOH0.1mol/L HCl溶液配制：用潔凈的量杯（或量筒）量取9mL濃鹽酸，注入盛有1000mL水的試劑瓶中，蓋上玻璃塞，搖勻。（一般來講最濃的濃鹽酸質量分數(shù)是37.5%，量濃度約是12mol/L，密度1.183g/cm³左右。）0.1mol/L NaOH溶液配制：稱取4克氫氧化鈉固體，用少量蒸餾水溶解，將溶液轉移到1L的容量

3、瓶中，定容，搖勻。四、實驗步驟1、鹽析沉淀法制備酪氨酸（1）將50ml牛乳倒入100ml燒杯中，于40水浴中加熱并攪拌。（2）向上述燒杯中緩緩加入（約10min內分次加入）10g無水硫酸鈉，再繼續(xù)攪拌10min。（或者是書中所講述的部分-）（3）將溶液用布氏漏斗過濾，分別收集沉淀和濾液。沉淀懸浮于30ml乙醇中，傾于布氏漏斗中過濾除去乙醇溶液，抽干。將沉淀從布氏漏斗中移出，在表面皿上攤開以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。準確稱重。2、等電點沉淀法制備乳蛋白素（1）將制備酪蛋白操作步驟（3）所得濾液置于100ml燒杯中，一邊攪拌，一邊利用pH計以濃鹽酸調整pH至3±0.1。（2）將溶液

4、倒入離心管中，6000r/min離心15min，倒掉上層液。（3）在離心管內加入10ml去離子水，振蕩，使管內下層物重新懸浮，并以0.1mol/L氫氧化鈉溶液調整pH至8.59.0，此時大部分蛋白質均會溶解。（4）將上述溶液以6000r/min離心10min，上層液倒入50ml燒杯中。（5）將燒杯置于磁攪拌加熱板上，一邊攪拌，一邊利用pH計以0.1mol/L鹽酸調整pH至3±0.1。（6）將溶液倒入離心管中，6000r/min離心10min，倒掉上層液。取出沉淀干燥，并稱重。五、注意事項離心機的使用安全：1、使用前，離心管和離心物一定要對稱平衡；2、離心開始時，設置好了轉速和時間，一定要等到轉速穩(wěn)定了后，人才能離開；3、離心結束，只有儀器報警了，且轉速完全為零后，才能打開離心機蓋。六、結果與討論1、計算出每100ml牛乳所