UV,CAD和MS同時(shí)測量藥物活性成分和反離子

1、UV，CAD和MS同時(shí)測量藥物活性成分和反離子摘要：藥物活性成分（API）是藥物中的有效成分，用藥時(shí)起重要作用。鑒別和測定API是藥廠研發(fā)和生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵步驟，本文利用新型通用檢測器電噴霧式檢測器（Corona CAD）與紫外、質(zhì)譜檢測器相連，進(jìn)行了多種復(fù)雜API的分析，方法可靠，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，且提高了檢測效率，擴(kuò)展了應(yīng)用范圍，值得在藥廠中大力推廣。 關(guān)鍵詞：API，Corona CAD，UV，MS，ICS-5000 1前言 API：活性醫(yī)藥物成分（Active pharmaceutical ingredient）指的是藥物活性成分，也就是我們通常所說的原料藥。目前，同時(shí)定量分析和成分鑒別藥物活

2、性成分（API）和它的無機(jī)反離子比較成熟的方法是使用幾種不同的分析技術(shù)，但卻是一個(gè)耗時(shí)又費(fèi)力的過程。本應(yīng)用注解描述了以一個(gè)離子色譜ICS-5000為平臺同時(shí)使連用三個(gè)檢測器正交分析的檢測方法從而提高了檢測效率增強(qiáng)了數(shù)據(jù)的可靠性。電噴霧式檢測器（CAD）與紫外/可見檢測器和質(zhì)譜的聯(lián)用，不僅可以同時(shí)分析API和反離子，還可以測定有機(jī)物中無機(jī)雜質(zhì)的含量。 圖1該儀器為進(jìn)行分析時(shí)的安裝示意圖。一個(gè)可調(diào)流量分配器（1）可準(zhǔn)確分配80L/min流量到質(zhì)譜和0.42 mL/min流量到Corona CAD，當(dāng)運(yùn)行方法的總流量為0.5 mL/min時(shí)。 2材料與方法 樣品制備 下列標(biāo)準(zhǔn)品均溶解在去離子水中。然

3、后，稀釋成50L加950L乙腈/水（80:20）的注射濃度，具體如下： 鹽酸維拉帕米：120g/mL 溴新斯的明：11g/mL 5,7-二羥基睪酮肌酐硫酸鹽：200g/mL 方法參數(shù) 儀器：離子色譜ICS-5000 色譜柱：Sequant ZIC. - pHILIC; 4.6 x 150毫米，5m的 柱溫：30 進(jìn)樣體積：10微升 流速：0.5毫升/分鐘 流動相A：100 mM的醋酸銨（pH值4.6），甲醇，異丙醇，乙腈（15:5:20:60，v/v/v/v） 流動相B：30 mM醋酸銨（pH值4.6），甲醇，異丙醇，乙腈（50:5:20:25，v/v/v/v） 梯度：見表1 Corona：1

4、00pA范圍，無過濾器 紫外檢測器： 254nm LC - MS：接口：ESI 采集模式：掃描 極性：正 運(yùn)行時(shí)間：1.00秒 工作電壓：1.5kV 開始m / z = 100;結(jié)束m / z = 500 掃描速度：500 樣本瓶：聚丙烯或認(rèn)證的硼硅酸鹽材質(zhì) 表1梯度參數(shù)表 3結(jié)果與討論 選擇3種不同反離子鹽原料藥，以同樣的色譜方法分析。梯度分析，考慮到保留API和其反離子的特異性，流動相B從20到70。圖2-4被分為四個(gè)部分，每一部分都是從A到D，數(shù)據(jù)是在每個(gè)樣本單獨(dú)運(yùn)行時(shí)采集的。紫外線信號下的保留時(shí)間比Corona CAD提前.10秒左右，質(zhì)譜信號比Corona CAD滯后.12秒左右，由

5、于涉及到離子化和管路延遲。該系統(tǒng)設(shè)置能夠定量和質(zhì)量鑒別API中的每個(gè)組成成份。 使用Corona CAD還有很多優(yōu)勢，與其說類似于紫外/可見這類通用檢測器，倒不如說是液相色譜/質(zhì)譜的有力補(bǔ)充。Corona CAD可以檢測質(zhì)量相同的多種化合物。不同于紫外/可見光譜，Corona CAD并不需要調(diào)整波長，也不關(guān)依賴于生色基團(tuán)。Corona CAD對不同結(jié)構(gòu)的化合物有著相似的響應(yīng)因子。因此，與此相關(guān)的優(yōu)勢是Corona CAD可根據(jù)峰面積百分含量對不同分析物的質(zhì)量百分含量半定量，而紫外檢測器無法實(shí)現(xiàn)。MS也沒有這種能力，因?yàn)榉治鲆蕾囉诒粶y物的電離程度。 紫外/可見波長設(shè)置為254nm，因?yàn)槊總€(gè)感興趣

6、的化合物都含有一個(gè)共軛的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。確切的說每個(gè)分析物的紫外最大吸收值尚未確定。比較圖A到圖B顯示了API中的每個(gè)化合物在紫外和CAD中的圖譜。反離子在紫外圖譜中看不到，但清晰顯現(xiàn)在每個(gè)CAD圖譜中。在5,7-二羥基睪酮肌酐硫酸鹽圖譜中，見圖4，同時(shí)包含了API中的有機(jī)鹽和無機(jī)鹽。應(yīng)用ZIC-pHILIC色譜柱可同時(shí)分析三種成分且都可被Corona CAD檢測。 Corona CAD可以作為一個(gè)獨(dú)立檢測器來測定大量的有機(jī)化合物和鹽離子。它也可以與其他檢測器一起運(yùn)行，提供正交技術(shù)可獲得更多在單獨(dú)使用一個(gè)檢測器時(shí)可能丟失的信息。從這些實(shí)驗(yàn)收集的數(shù)據(jù)表明Corona CAD可與ICS-5000 / M

7、S系統(tǒng)并用，提供重要信息，并協(xié)助進(jìn)行方法開發(fā)。 Corona CAD與MS聯(lián)用提供了一個(gè)機(jī)會，來獲得可能在紫外/可見中丟失的個(gè)別化合物的質(zhì)量鑒定。一旦待測物的組份被確定，進(jìn)一步的量化工作可以通過獨(dú)特的Corona CAD來完成，而ICS-5000/CAD-MS系統(tǒng)則被釋放出來用于另外的項(xiàng)目。 圖2A：鹽酸維拉帕米上柱.1.2g Corona CAD檢測器100 pA全量程。B：鹽酸維拉帕米上柱.1.2g紫外/可見檢測波長為254nm。C：鹽酸維拉帕米上柱.1.2gTIC質(zhì)譜掃描從100-500 amu陽離子模式。D：鹽酸維拉帕米上柱.1.2g質(zhì)譜維拉帕米（MW = 455.6）保留時(shí)間（3.6分鐘）。掃描從100到500amu陽離子模式。 圖3A：新斯的明上柱.1.1g Corona CAD檢測器100 pA全量程。B：在新斯的明上柱.1.2g紫外/可見檢測波長254nm。C：新斯的明氫溴酸鹽上柱.1.2gTIC質(zhì)譜掃描從100到500amu陽離子模式。D：新斯的明氫溴酸鹽上柱.1.1g。質(zhì)譜新斯的明（MW= 2.233）保留時(shí)間5.7分鐘。 圖4A：5,7-二羥基睪酮（DHT）肌酐硫酸鹽（上柱.2g）Corona CAD檢測器100 pA全量程。B：DHT肌酐硫酸鹽上柱.2g紫外/可見檢測波長254 nm。C