組織工程重點(diǎn)

1、組織工程的三要素及其功能1. 支架：誘導(dǎo)立體定向生長(zhǎng)、誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)、供給營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子，處理代謝廢物，模擬細(xì)胞外基質(zhì)的微環(huán)境。2. 種子細(xì)胞：可來(lái)源于自體細(xì)胞、同種異體細(xì)胞、異體細(xì)胞、干細(xì)胞；可通過(guò)單層貼壁生長(zhǎng)、懸浮生長(zhǎng)、三維立體生長(zhǎng)等方式來(lái)培養(yǎng)。3. 生長(zhǎng)因子：可刺激種子細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，調(diào)節(jié)種子細(xì)胞的活性。組織工程的操作過(guò)程 選擇合適的支架材料對(duì)支架進(jìn)行塑形在支架上種植活細(xì)胞添加合適的生長(zhǎng)因子種子細(xì)胞沿支架材料多向生長(zhǎng)，形成三維立體組織（在生物反應(yīng)器中）移植到人體內(nèi)重建該組織功能新生組織中血管生成支架材料溶解新生組織最終與人體內(nèi)環(huán)境融合支架材料的選擇標(biāo)準(zhǔn)1 具有生物相溶性及功能2 表面

2、理化性質(zhì)易于細(xì)胞的粘附和增殖3 可控的生物降解和生物吸收性質(zhì)4 有很好的機(jī)械強(qiáng)度，可承受壓力，例如骨組織支架材料5 三維支架材料具有多孔性，使各個(gè)微小的結(jié)構(gòu)可以相互連通6 沒(méi)有免疫原性7 不會(huì)引起感染8 性質(zhì)穩(wěn)定干細(xì)胞是一類(lèi)幼稚型細(xì)胞，具有增殖和分化的潛能以及自我更新的能力，可以分化形成各種成熟的體細(xì)胞類(lèi)型。根據(jù)其分化潛能大小可分為全能干細(xì)胞、萬(wàn)能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、專(zhuān)能干細(xì)胞。干細(xì)胞的分類(lèi)Totipotent:受精卵，可分化形成所有體細(xì)胞類(lèi)型Pluripotent：胚胎干細(xì)胞，分化形成三個(gè)胚層來(lái)源的細(xì)胞Mutipotent：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞等，分化形成單一胚層來(lái)源的細(xì)胞Unipotent：各

3、組織內(nèi)干細(xì)胞，只能分化形成該組織細(xì)胞干細(xì)胞來(lái)源胚胎來(lái)源：胚胎干細(xì)胞：ES細(xì)胞 胚胎性腺軸細(xì)胞：EG細(xì)胞 （生殖嵴干） 畸胎瘤細(xì)胞：EC細(xì)胞胎兒來(lái)源：臍帶、胎盤(pán)、羊水成體來(lái)源：骨髓：造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞 組織：神經(jīng)、骨骼肌等組織內(nèi)專(zhuān)能干細(xì)胞ES細(xì)胞來(lái)源于5-7天未植入囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，具有自我更新的能力（每一次分裂形成兩個(gè)細(xì)胞，其中一個(gè)繼續(xù)分化，另一個(gè)保留下來(lái)，仍是ES細(xì)胞），是萬(wàn)能干細(xì)胞，可分化形成三個(gè)胚層來(lái)源的細(xì)胞。成體干細(xì)胞是一類(lèi)存在于分化成熟組織中的未分化的細(xì)胞，具有自我更新的能力，可分化形成該組織各類(lèi)型細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞的對(duì)比ES胚胎干細(xì)胞成體肝細(xì)胞細(xì)胞類(lèi)型Pluripote

4、nt萬(wàn)能Multipotent多能增殖能力增殖旺盛增殖限制來(lái)源不是自體的自體的倫理問(wèn)題倫理方面的擔(dān)憂(yōu)很少爭(zhēng)議致癌性致癌的不致癌的成體干細(xì)胞類(lèi)型（主要） 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC） 造血干細(xì)胞（HSC） 神經(jīng)干細(xì)胞（NSC） 肝干細(xì)胞MSC提取取骨髓離心取低密度層細(xì)胞培養(yǎng)成體干細(xì)胞可塑性 成體干細(xì)胞是一種多能干細(xì)胞，正常情況下只能分化形成改胚層來(lái)源的細(xì)胞，但成體干細(xì)胞仍具有可以分化形成其他胚層分化來(lái)源細(xì)胞的能力，即跨胚層分化。造血干細(xì)胞定位轉(zhuǎn)移 成人：HSC存在于脊髓和淋巴組織中 胎兒：HSC存在于卵黃囊、肝、脾中（髓外造血）造血干細(xì)胞HSC 多能干細(xì)胞，可通過(guò)增殖和分化形成紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及其

5、他血細(xì)胞，補(bǔ)充衰老和死亡的血細(xì)胞，重建整個(gè)造血系統(tǒng)。常常被用于白血病以及其他血液病的治療。含量極低，僅占骨髓細(xì)胞的1/50000。具有自我更新的能力，產(chǎn)生新的HSC細(xì)胞以及分化形成各血細(xì)胞類(lèi)型。造血干細(xì)胞特性及來(lái)源 特性：具有很強(qiáng)的自我更新以及增殖和分化的能力 CD34是HSC的表面標(biāo)記 多能干細(xì)胞，可分化形成髓系各祖細(xì)胞類(lèi)型，產(chǎn)生所有的血液細(xì)胞 產(chǎn)生特異性的生長(zhǎng)因子受體 來(lái)源：骨髓、外周血、臍帶血、胚胎干細(xì)胞造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞的區(qū)別1. 造血干細(xì)胞在一定因素的調(diào)節(jié)之下可以分化為各類(lèi)血細(xì)胞的祖細(xì)胞2. 祖細(xì)胞也是一種相當(dāng)原始的具有增殖能力的細(xì)胞，但已失去多向分化的能力，只向一個(gè)成幾個(gè)血細(xì)胞方向

6、定向增殖分化。3. 造血干細(xì)胞分化形成不同的祖細(xì)胞，祖細(xì)胞進(jìn)而分化形成各幼稚型的血液細(xì)胞。4. 祖細(xì)胞依靠HSC的增殖分化來(lái)補(bǔ)充。生物材料發(fā)展過(guò)程 組織工程促進(jìn)生物材料的發(fā)展：A 上個(gè)世紀(jì)，生物材料被用于生成永久性植入物來(lái)替代組織器官，例如假肢。B 本世紀(jì)，生物材料主要被用于生產(chǎn)支架，用于組織工程。C 未來(lái)生物才來(lái)的發(fā)展方向是用于生產(chǎn)組織工程支架，并且可為種子細(xì)胞生長(zhǎng)提供所需微環(huán)境，以及用于基因治療。支架的作用1. 支架為種子細(xì)胞的粘附、遷移、增殖分化以及分泌細(xì)胞外基質(zhì)提供框架。2. 種子細(xì)胞在支架材料上生長(zhǎng)形成完整的組織后，支架材料通過(guò)生物降解而被吸收。3. 支架還可作為一種屏障保護(hù)新生組織

7、，防止周?chē)M織向新生組織滲透，從而有利于新生組織的再生。天然材料天然：膠原、纖維、透明質(zhì)酸、瓊脂等合成：PLA、PGA混合材料：天然與合成材料的相混合陶瓷：羥基磷灰石等天然與合成材料的對(duì)比優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)天然A 存在細(xì)胞識(shí)別，種子細(xì)胞與支架材料通過(guò)配體和受體間相互識(shí)別以利于種子細(xì)胞的粘附B 可自然講解A 可引起免疫排斥反應(yīng)B 批次間存在差異，因?yàn)椴牧蟻?lái)源于天然而非人工生產(chǎn)合成A 批次之間差異小，具有統(tǒng)一性B 可根據(jù)需要進(jìn)行人工塑形A 生物相溶性尚未被認(rèn)可B 可降解性尚未被認(rèn)可生物材料形成 膜狀或管狀：神經(jīng)組織、血管 凝膠狀：種子細(xì)胞可均勻散布其中，軟骨組織 多孔狀：三維立體支架、骨、軟骨、真皮支架的作

8、用A 干細(xì)胞種植在支架上，支架移植入體內(nèi)正確的位置B 支架上攜帶的各種細(xì)胞因子刺激種子細(xì)胞分裂增殖C 支架為種子細(xì)胞的增殖分化提供營(yíng)養(yǎng)及框架D 當(dāng)種子細(xì)胞不斷分裂增殖形成的結(jié)構(gòu)足以自我支撐時(shí)，支架開(kāi)始生物降解外周神經(jīng)與中樞神經(jīng)再生修復(fù)不同的原因 外周神經(jīng)受損后可再生，中樞神經(jīng)再生受抑制。中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境中存在抑制軸突生長(zhǎng)的因子。例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的膠質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生各種抑制因子，而髓鞘細(xì)胞僅在中樞中存在，也可產(chǎn)生各種抑制因子。所以中樞神經(jīng)系統(tǒng)的再生受到微環(huán)境抑制。Ips細(xì)胞：借助基因?qū)爰夹g(shù)將某些特定因子導(dǎo)入動(dòng)物或人的體細(xì)胞，同時(shí)選擇性地在培養(yǎng)液中加入特定的小分子物質(zhì)，即可將體細(xì)胞重編程為多潛能

9、干細(xì)胞此類(lèi)細(xì)胞在克隆形態(tài)、生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志物、基因表達(dá)模式、表觀遺傳學(xué)特征、擬胚體形成、畸胎瘤形成和嵌合體形成（針對(duì)小鼠）等方面與ES細(xì)胞非常相似。誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（ips）是通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將某些轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入動(dòng)物或人體細(xì)胞，使體細(xì)胞直接重構(gòu)成為胚胎干細(xì)胞細(xì)胞樣的多潛能細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs 或 Tumor stem cells ，TSCs）：腫瘤組織中這些致瘤能力強(qiáng)、有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞來(lái)源的假說(shuō)主要有兩種：第一種認(rèn)為正常干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生的源泉，致癌性突變使正常干細(xì)胞內(nèi)在的自我更新和無(wú)限增殖能力得到加強(qiáng)，從而轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤干細(xì)胞。第二種

10、認(rèn)為分化較為成熟的細(xì)胞（如定向分化的祖細(xì)胞）收到外界突變劑、誘導(dǎo)劑等的作用而活化了某些干細(xì)胞相關(guān)途徑，去分化而獲得干細(xì)胞特性，形成腫瘤干細(xì)胞?；蚬こ?將植物或動(dòng)物的基因用載體導(dǎo)入活細(xì)胞內(nèi)，與生物體基因相整合，從而改變生物原有的特性，通過(guò)基因工程的方法可以使外源基因替代體內(nèi)有缺陷的基因從而恢復(fù)該基因的功能。肌腱組織工程 肌腱和韌帶有束狀致密結(jié)締組織組成，能接到正常的關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)及維持關(guān)節(jié)的穩(wěn)定。種子細(xì)胞成熟機(jī)體細(xì)胞：肌腱細(xì)胞：自體，取材創(chuàng)傷大，數(shù)量難以滿(mǎn)足要求 皮膚成纖維細(xì)胞：自體，取材廣泛，數(shù)量多，易培養(yǎng)脊髓間充質(zhì)干細(xì)胞：自體，免疫原性低，增殖能力強(qiáng)，分化的多能性-不確定 肌腱細(xì)胞合成膠原的能力

11、優(yōu)于間充質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，是較好的肌腱組織工程的種子細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞因子EGF-1:促進(jìn)肌腱細(xì)胞的分裂增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生TGF-1、BMP-12：加速肌腱的愈合BMP-2、BMP-12：促進(jìn)肌腱附著于骨的連接處纖維軟骨區(qū)的新城BMP-2、BMP-12：誘導(dǎo)MSCs生成韌帶樣組織EGF:促進(jìn)細(xì)胞增殖支架材料 必須具有一定的機(jī)械強(qiáng)度、孔隙度及吸水率，可降解，適合種子細(xì)胞吸附及增加細(xì)胞增殖，并對(duì)種子細(xì)胞的目的的功能不產(chǎn)生負(fù)面的影響，具有良好的生物相溶性等特性。 天然材料：I型膠原、糖胺多糖、羊膜、凍干肌腱等 ，缺點(diǎn)：抗原性強(qiáng) 人工合成材料：碳纖維、尼農(nóng)、滌綸、聚羥基乙酸（PGA），聚乳酸（PLA）

12、、聚乳酸聚羥基乙酸共聚物（PLGA）。缺點(diǎn)：滑動(dòng)性差，易與周?chē)M織粘連親水性差，細(xì)胞粘著力弱。 復(fù)合材料：PLGA與膠原的復(fù)合，人發(fā)與膠原的復(fù)合 人發(fā)角蛋白：HHK組織工程化肌腱的構(gòu)建目的：獲得人工活性肌腱-種子細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的裝配構(gòu)建要求： 體外：支架材料必需有足夠的空隙來(lái)附著種子細(xì)胞 體內(nèi)：必須盡可能少地對(duì)細(xì)胞及周?chē)M織產(chǎn)生毒性反應(yīng)。 基質(zhì)支架必須允許細(xì)胞滯留并可以傳遞有活性的細(xì)胞到達(dá)修復(fù)部位。旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)（RCCS）優(yōu)點(diǎn)：在微重力條件下：低剪切力 大小不同的顆粒共同培養(yǎng) 有助于三維組織的形成 有助于細(xì)胞的分化骨組織工程骨組織細(xì)胞：骨祖細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞軟骨的發(fā)生：間

13、充質(zhì)細(xì)胞骨祖細(xì)胞成軟骨細(xì)胞軟骨細(xì)胞基質(zhì)+纖維軟骨組織周?chē)g充質(zhì)軟骨膜種子細(xì)胞成骨細(xì)胞是骨組織工程的種子細(xì)胞。目前種子細(xì)胞的來(lái)源主要有骨外膜、骨髓、骨、骨外組織。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)骨外膜含有骨原細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞。骨原細(xì)胞保持著分化潛能，可被激活增殖分化為成骨細(xì)胞。取骨外膜培養(yǎng)可分離出成骨細(xì)胞。具有很強(qiáng)的繁殖和分化為成骨細(xì)胞的能力，易存活供區(qū)組織的損傷骨髓成骨能力來(lái)自骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的纖維細(xì)胞集落形成單位，它具有多向分化的潛能，可分化為成骨系細(xì)胞、成纖維系細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞。在誘導(dǎo)因子作用下，可使其向成骨細(xì)胞系分化的數(shù)量大大增加，表明骨髓基質(zhì)具有很強(qiáng)的成骨潛能。取材容易，損傷較小，傳

14、代能力強(qiáng)因基質(zhì)細(xì)胞具有多種分化潛能，應(yīng)選擇適當(dāng)培養(yǎng)條件，保證其向成骨細(xì)胞分化。骨胚胎與新生動(dòng)物骨及人胚胎骨經(jīng)培養(yǎng)得到成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，適當(dāng)條件可進(jìn)一步分化為成骨細(xì)胞易定向分化為成骨細(xì)胞供區(qū)損傷及來(lái)源的局限性骨外組織起源于胚胎時(shí)期間充質(zhì)的骨外部位的骨祖細(xì)胞，在誘導(dǎo)因子的持續(xù)作用下可維持其成骨的功能。如周皮細(xì)胞、C212成肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。家兔皮膚的成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)，不僅能產(chǎn)生粘多糖和膠原等基質(zhì)成分，還有鈣鹽沉積，有新生骨組織形成，證明皮膚成纖維細(xì)胞在體外有成骨的潛能取材容易、創(chuàng)傷小，傳代繁殖快適應(yīng)受區(qū)環(huán)境的能力較差支架材料1. 良好的生物相溶性、生物可降解性2. 良好的骨誘導(dǎo)性和骨傳導(dǎo)性

15、3. 具有負(fù)荷最大量細(xì)胞的高滲透性4. 支持骨細(xì)胞生長(zhǎng)和功能分化的表面化學(xué)性質(zhì)與微結(jié)構(gòu)5. 可與其它活性分子如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）、轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-（TGF-）負(fù)荷共同誘導(dǎo)骨發(fā)生6. 易消毒性人工合成聚合物 -聚乳酸（PLA）和聚羥基乙酸（PGA）-聚乳酸與聚羥基乙酸共聚物（PLGA）-多聚羥基酸、聚酣、聚亞胺、聚偶磷氮、膠原-具生物活性的玻璃陶瓷（BGC）、羥基磷灰石（HA）、鈣磷陶瓷即羥基磷灰石和磷酸三鈣（HA/TCP）珊瑚天然無(wú)機(jī)骨：除去其有機(jī)成分，保留無(wú)機(jī)成分生物性和非生物性材料符合：適合的支架材料與BMP、GF的復(fù)合生長(zhǎng)因子成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-(TGF-)胰島

16、素樣生長(zhǎng)因子(IGF)血小板衍化生長(zhǎng)因子(PDGF)骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)構(gòu)建方式：支架材料+成骨細(xì)胞 支架材料+生長(zhǎng)因子 支架材料+成骨細(xì)胞+生長(zhǎng)因子神經(jīng)組織工程神經(jīng)組織由神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成。構(gòu)成腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)細(xì)胞本體受傷或近本體的突起受傷，神經(jīng)元會(huì)死亡。遠(yuǎn)離神經(jīng)元的突起受傷，包體腫脹，尼氏體破碎，傷口處髓鞘和軸索破碎，由巨噬細(xì)胞吞噬，只有神經(jīng)膜細(xì)胞繁殖，形成實(shí)心的細(xì)胞索，在斷裂處連接起來(lái)，引導(dǎo)新生軸索往遠(yuǎn)端生長(zhǎng)。若遠(yuǎn)端徹底消失，神經(jīng)元就不能恢復(fù)原來(lái)功能。若受傷的混合神經(jīng)纖維，再生的神經(jīng)纖維長(zhǎng)到另一個(gè)神經(jīng)纖維的神經(jīng)膜中，仍不能回復(fù)功能。種子細(xì)胞雪旺細(xì)胞（Schwann ce

17、ll）經(jīng)培養(yǎng)和純化后的雪旺細(xì)胞在支架內(nèi)有序分布，并且分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，支持引導(dǎo)軸突的再生，是提供啊修復(fù)神經(jīng)缺損效果的關(guān)鍵。構(gòu)筑組織工程化人工神經(jīng)，首先需要大量雪旺細(xì)胞。但在培養(yǎng)條件下，雪旺細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，而且容易為成纖維細(xì)胞污染。應(yīng)用神經(jīng)體內(nèi)變形發(fā)，可獲得大量純度較高的激活態(tài)雪旺細(xì)胞。支架材料聚羥基乙酸（PGA）乙丙交酯(Polyglactin)聚乳酸(PLA)殼聚糖(Chitosan)優(yōu)點(diǎn)：具有良好的生物相溶性，不引起明顯的炎癥反應(yīng)，再生有髓神經(jīng)纖維能沿生物纖維縱向生長(zhǎng)。在神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)植入生物纖維網(wǎng)架或?qū)⑸窠?jīng)導(dǎo)管制成具有類(lèi)似神經(jīng)束狀結(jié)構(gòu)，可引導(dǎo)、促進(jìn)神經(jīng)軸突的再生。生長(zhǎng)因子：用生物降解高分子

18、對(duì)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子進(jìn)行基體包埋或制成微包囊，然后與科生物降解的神經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行復(fù)合，從而可使神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子控制性地釋放到神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)，醋精神經(jīng)軸突生長(zhǎng)。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）和睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（CNTF）神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）人工神經(jīng)的構(gòu)建-血管化神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)的血管的長(zhǎng)入，可為種植的雪旺細(xì)胞和再生神經(jīng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)，從而加快神經(jīng)再生，延長(zhǎng)神經(jīng)的再生距離。管內(nèi)植入血管或加入血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可望促進(jìn)神經(jīng)導(dǎo)管的血管化。人工神經(jīng)的構(gòu)建-生物反應(yīng)器的應(yīng)用利用轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器所產(chǎn)生的模擬微重力，使細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)過(guò)程中均勻地分布于在經(jīng)過(guò)Laminin涂層的PGA材料的表面。實(shí)驗(yàn)表明，應(yīng)用低密度（103/ml）的

19、雪旺細(xì)胞，即能使旺細(xì)胞均勻貼附在生物支架表面。脊髓損傷不但取決于即刻的機(jī)械損傷，還取決于損傷后形成的細(xì)胞微環(huán)境。繼發(fā)的缺血、缺氧、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，自由基生成，內(nèi)在的可以克服抑制因子的成熟神經(jīng)元大量丟失，體內(nèi)的髓鞘相關(guān)抑制因子可抑制與功能恢復(fù)密切相關(guān)的軸突的再生，膠質(zhì)細(xì)胞增生形成的瘢痕均在脊髓的繼發(fā)損傷中起著重要的作用。種子細(xì)胞Neural Stem Cells , NSCsOlfactory ensheathing cells , OECsSchwan cell , SC生物材料：大體分為五類(lèi)1. 天然聚合物：藻酸鹽水凝膠、I型膠原2. 合成生物可降解材料如：聚乳酸、聚乙烯乙二醇3. 合成生物非

20、降解聚合物如：聚甲基丙稀酸羥乙酯4. 可降解材料復(fù)合物如：聚-聚羥基丁酸鹽（PBH）與藻酸鹽水凝膠復(fù)合物5. 非降解材料復(fù)合物導(dǎo)管如：丙烯酸聚合物或聚丙烯腈/聚氯乙烯（PNA/PVC）的共聚物攜帶因子或者轉(zhuǎn)基因細(xì)胞：釋放神經(jīng)生長(zhǎng)因子，神經(jīng)再生抑制因子拮抗劑等兩種類(lèi)型的材料設(shè)計(jì)：定向孔-引導(dǎo)神經(jīng)纖維再生，可注射性，防粘連生長(zhǎng)因子神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子：NT、BDNF、EGF生長(zhǎng)因子被整合到支架材料商后，通過(guò)材料講解或者濃度差異以一定的速率釋放出來(lái)，其結(jié)果可以改善受損神經(jīng)周?chē)h(huán)境和促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，還可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化成為神經(jīng)細(xì)胞。腦組織工程修復(fù)材料：明膠和透明質(zhì)酸微球 （透明質(zhì)酸基水凝膠框架材料）

21、待解決的問(wèn)題 細(xì)胞再材料中的高密度復(fù)合 材料可注射性，減少手術(shù)導(dǎo)致的二次損傷角膜組織工程組織結(jié)構(gòu)上皮層：5-6層上皮細(xì)胞，可再生前彈力層：均質(zhì)透明膜，不可再生實(shí)質(zhì)層：由約200層膠原纖維薄板組成，不可再生后彈力層：賤人的透明均質(zhì)膜，可再生內(nèi)皮細(xì)胞層：為一層六角形扁平細(xì)胞構(gòu)成，不可再生生理特性屈光度：占眼球屈光力的70%透明性：無(wú)角化層，無(wú)血管，無(wú)色素，始終保持半脫水狀態(tài)無(wú)血管：營(yíng)養(yǎng)來(lái)自角膜緣血管網(wǎng)，房水及淚腺感覺(jué)神經(jīng)豐富：來(lái)自三叉神經(jīng)眼之。保護(hù)作用種子細(xì)胞 可來(lái)源于眼的正常角膜，以胎兒眼角膜為佳，供體年齡越小，細(xì)胞分裂增殖越快 角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)常用植塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞培養(yǎng)法 角膜基質(zhì)細(xì)胞可從角

22、膜實(shí)質(zhì)層獲得 角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)：眼角膜緣環(huán)形剪下角膜，將角膜內(nèi)皮和后彈力層撕下，分離細(xì)胞培養(yǎng)法來(lái)源：角膜緣干細(xì)胞 胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化 成體干細(xì)胞誘導(dǎo)分化、（皮膚干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、口腔粘膜上皮細(xì)胞）細(xì)胞因子 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）：可促進(jìn)角膜細(xì)胞增殖角膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）:可藉此角膜細(xì)胞產(chǎn)生多型膠原轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-1）:可使角膜細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)蛋白合成表皮生長(zhǎng)因子(EGF):促進(jìn)細(xì)胞增殖支架材料良好的生物相溶性，自身及其降解產(chǎn)物對(duì)機(jī)體無(wú)毒性，不引起排斥反應(yīng)和炎性反應(yīng)，不致畸變。材料攜帶具有生物誘導(dǎo)性的多種角膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可誘導(dǎo)自體多種角膜細(xì)胞沿材料支架生長(zhǎng)繁殖。支架材料的降解速率與植入角膜細(xì)胞形成組織器官的速率想匹配，在支架完成為角膜組織提供模板功能后，可被完全降解吸收，或成為與新生組織相互融合的組成部分?？砂唇悄そM織的特點(diǎn)和缺損情況進(jìn)行塑形，形成一