茯苓合劑對(duì)凍融蟾蜍血液理化特性的影響

1、    茯苓合劑對(duì)凍融蟾蜍血液理化特性的影響 李凱霞,秦飛,秦世武,王杰作者單位：佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007;陜西省西安交通大學(xué)理學(xué)院，陜西 西安 710049【摘要】目的：本實(shí)驗(yàn)旨在探討血液、細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子、離子通道等不同水平的凍融損傷和低溫保護(hù)物理化學(xué)機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)采用Spectrumlab22PC分光光度計(jì)分別觀察-2237復(fù)溫情況下凍融蟾蜍血液氧自由基與茯苓合劑保護(hù)作用。結(jié)果：茯苓合劑具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化(LPO)，保護(hù)GSHPX酶活力功能，減少M(fèi)DA生成。結(jié)論：茯苓合劑對(duì)凍融血液有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】 血液 物理化學(xué)

2、 GSHPxase LPO MDA 分光光度計(jì)22PC近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外低溫生物物理學(xué)者對(duì)低溫?fù)p傷的機(jī)理進(jìn)行了大量的研究。由于生物物理技術(shù)發(fā)展迅速，對(duì)于人的血液、干細(xì)胞、粒細(xì)胞及心、腎、肝臟、角膜、精子、卵子、皮膚深低溫保存和移植均取得可喜的成果112。溫度由-20、-40、-80發(fā)展到液氮保存-196，保存期也由原來(lái)的42天延至10年，最長(zhǎng)者甚至18年。而復(fù)溫后的細(xì)胞仍保持其有效活性和功能，為此，對(duì)于獲取何種生物樣品的技術(shù)、環(huán)境、條件要求更加嚴(yán)格。本實(shí)驗(yàn)觀察在降溫和復(fù)溫凍融蟾蜍血液抗氧自由基和保護(hù)劑整體血液流體學(xué)變化513。首先發(fā)生的是物理和化學(xué)變化。結(jié)冰、融冰、胞內(nèi)外溶液、溶質(zhì)濃度、離子通道變

3、化Na+、K+、CL-、Ca2+、酶的變化。水通過(guò)胞膜向胞內(nèi)或胞滲透等現(xiàn)象。在一個(gè)封閉的體系中是有液相變?yōu)楣滔嗟南嘧冞^(guò)程。體系是隨著臨界壓力和臨界溫度變化而變化19，而凍融血液體系和時(shí)間、溫度關(guān)系非常密切的，我們工作如下。1 材料和方法實(shí)驗(yàn)用冬眠狀態(tài)下中華大蟾蜍，體溫1215，體重3050g，性別不限，隨機(jī)分三組，每組20只，分為藥物復(fù)溫組，RS(任氏液)正常冬眠對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)蟾蜍整體置于-20冰箱內(nèi)冷凍130min，在蟾蜍凍僵硬休克狀態(tài)下，將其從冰箱中取出，速將蟾蜍分別置于RS和500mL的茯苓合劑中3740復(fù)溫。復(fù)溫溶液主要成份：茯苓20g、雞血藤20g、三七15g、甘油10mL、5%的G

4、lucose250mL水煎制劑。凍融蟾蜍在復(fù)溫溶液中110min復(fù)活，肢體活動(dòng)自由，視覺(jué)反射正常。速將其開(kāi)胸心臟穿刺取血，加0.1%肝素抗凝，取抗凝血測(cè)定：(1)用改良的硫代巴比妥酸(TRA)和22PC分光光度計(jì)測(cè)量血漿LPO和細(xì)胞膜MDA含量。(2)用改良Hfemen法測(cè)定全血GSHPX活力，以新單位(8mL全血在37反應(yīng)5min，扣除酶反應(yīng)后，使GSHPX濃度降低1nmol為一個(gè)酶活力單位)。2 結(jié)果見(jiàn)表1。表1 三組LPO和MDA含量GSHPXase活力變化(略)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：藥物復(fù)溫組血漿LPO含量MDA明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，全血GSHPXase活力顯著高于對(duì)照組(P&

5、lt;0.01)。3 討論在低溫凍融蟾蜍情況下，茯苓合劑對(duì)冷休克狀態(tài)下蟾蜍復(fù)活是有保護(hù)作用的。細(xì)胞、組織、器官在凍融過(guò)程中是一系列復(fù)雜的物理化學(xué)變化，無(wú)論是細(xì)胞內(nèi)外液各種帶電粒子(Na+、K+、CL-、Ca2+、Mg2+、P3+、Fe3+等變化，或是細(xì)胞膜、脂質(zhì)、抗原、抗體、ATP、CAMP、AKP酶的變化和H2O每種離子都應(yīng)在漂移擴(kuò)散中達(dá)到平衡態(tài)。結(jié)果將在不同濃度區(qū)域累積電荷產(chǎn)生電場(chǎng)19)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，分子在液體中的擴(kuò)散系數(shù)與液體的溫度T，分子半徑r，以及液體的粘性系數(shù)有關(guān)即：D=KT/r此式稱為愛(ài)因斯坦斯托克斯關(guān)系式，由此可知，溫度越高，分子半徑越小，液體的粘性系數(shù)越小，擴(kuò)散就進(jìn)行得越快

6、612。選擇最佳凍結(jié)溫度-224，最佳復(fù)溫保護(hù)液的溫度是0437，最佳凍融時(shí)間對(duì)細(xì)胞、組織、器官存活都是非常重要的。根據(jù)熱力學(xué)原理導(dǎo)出組織臨界溫度過(guò)冷公式：T=2MTi/Hr, T為組織臨界溫度，為表面張力，M為摩爾質(zhì)量，Ti為熔點(diǎn)，為密度，H為熔解熱，r為冰胚半徑，該公式可知組織臨界溫度與表面張力成正比，與冰胚半徑成反比，組織溫度在冰點(diǎn)以下是不凍結(jié)狀態(tài)稱為組織臨界溫度1013。一般認(rèn)為，冷和熱的耐受特性是自然界生物生存的本能。如有些植物、蟲(chóng)、蛹、蟲(chóng)卵、微生物等，在冬季就是處于冬眠狀態(tài)存活。由于春夏溫度回升加之空氣水分營(yíng)養(yǎng)自身新陳代謝，逐漸復(fù)活19。在一個(gè)封閉的體系中無(wú)論其初態(tài)還是終態(tài)其過(guò)程是

7、一個(gè)相變過(guò)程，即由液相轉(zhuǎn)變?yōu)楣滔?，再由冰晶體的固相隨溫度、保護(hù)液而轉(zhuǎn)變液相。這一物理化學(xué)變化過(guò)程中，其體系是隨著臨界壓力和臨界溫度變化而變化，而凍融的時(shí)間、溫度和其體系能量熱力學(xué)原理是一致，同時(shí)取決其存在與消失的結(jié)果69。茯苓合劑對(duì)血液中氧自由基、羥自由基OH、過(guò)氧化氫H2O2、單線氧O2有清除作用。增強(qiáng)GSH-Pxase和Na+、K+、ATP酶的活性。這對(duì)紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板、干細(xì)胞的保存至關(guān)重要，為臨床醫(yī)學(xué)和藥物的開(kāi)發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)和廣泛的物質(zhì)資源113?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1R，L，levin and EG，Cravalho.A membrane model Describing the

8、effect of Temperature on the Water conductivity of erythrocyte membranes at subzero TemperaturesJ.Cryobiology，1976，13：415I4202Roberth，Miller，and Peter mazur.Survial of frozn-thawed human red cells as a function of cooling and warming velocitiesJ.Cryobiology，1976，13：4044143Sunao Kubota，Edmund.The eff

9、ect of freeze rate duration of phase transition and warming rate on survival of frozen canine kidneysJ.Cryobiology，1976，13：4554624Ralph.Fcosx and John Gbaust.Variations in myocardial CPK and Na+-K+-ATPase following long-term freezingJ.Cryobiology，1978，15：5305365M，J，Taylor and D，E.Pegg. The Effect lc

10、e Formation on the function of smooth muscle tissue stored at -21 or -60 J.Cryobiology 1983，20：36406Garyj Schwartz and Kenneth R Diller.Osmotic response of individual cells during freezing J.Cryobiology，1983，20 ：61777FW.luscinskas f，j Lionetti. Long term cryopreservation of dog granulocytesJ.Cryobio

11、logy，1983，20：168Jfrim RA，Snydor L，E，Mcgann.Growfh kinetics of cell following freezing in liguid nitrogen J.Cryobiology，1978，15 ：5025169Jens,OM, karlisson.A theoretical model of intracellular devitrification J.Cryobiology，2001，42：15416910TeTsuol.Thermal analysis of cryoptective solutions for red bloo

12、d cell J.Cryobiology 1998，36: 16517311Yujianping，Liu jinhan，Pu lq,et al.Freeze-dying of human red blood cells influence of carbohydrates and their concentration J.Cell Preseration Technology，2004，2(4):27027512Kra J cawan and Kenneth B.Freezing thawing effects on storey metabolic enzymes in wood frog

13、 organsJ.Cryobiology，2001，43：324513DEPegg.Viability assays for preserved. Cell, tissues，and organsJ. Cryobiology，1989,26(3):212225                    考試寶典-高分練兵場(chǎng)                揭秘論文“低價(jià)”根源