嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)規(guī)程完整

1、嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、 目的為了規(guī)親和柱凈化樣本中嘔吐毒素的操作流程,特制訂本操作規(guī)程2、 圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于糧食、飼料、食品中嘔吐毒素的檢測(cè).3、 檢出限和定量限工程島津安捷倫樣本檢出限a g/kg樣本定量限a g/kg樣本檢出限a g/kg樣本定量限a g/kg DON12.9636.721515034、 責(zé)任部門名稱部門責(zé)任1、負(fù)責(zé)本制度的實(shí)施.質(zhì)量治理部2、負(fù)責(zé)本制度的監(jiān)視執(zhí)行.5、 程序5.1 原理測(cè)定的根底是抗原、抗體反響,抗體連接在柱體,樣品經(jīng)過提取、過濾后,緩慢的 通過嘔吐毒素免疫親和柱,在免疫親和柱毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒 有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì).用甲醇洗脫嘔吐

2、毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè).4、 2 溶液配制5、 3樣品前處理-將樣品粉碎,稱取25g樣品,參加5g聚乙二醇,參加125mL蒸儲(chǔ)水；-高速均質(zhì) C > 10,000r/min1min或用搖床 200r/min 300r/min 劇烈振蕩 20min；-用快速定性濾紙過濾,收集濾液；-濾液再用微纖維濾紙過濾,并收集濾液作為上樣液；-取2.5mL上樣液過免疫親和柱凈化稀釋倍數(shù)：2-稱取10g樣品,參加100mL蒸儲(chǔ)水；-高速均質(zhì) C > 10,000r/min1min或用搖床 200r/min 300r/min 劇烈振蕩 20min；-用快速定性濾紙過濾,收集濾液；-濾液再用

3、微纖維濾紙過濾,并收集濾液作為上樣液；-取5mL上樣液過免疫親和柱凈化.稀釋倍數(shù)：2-取脫氣的酒類樣品含二氧化碳的酒類樣品,使用前先攪拌或超聲脫氣或不含二 氧化碳的酒類樣品25g,用PBSS沖液定容至100mL- -高速均質(zhì) C > 10,000r/min1min或用搖床 200r/min 300r/min 劇烈振蕩 20min；- -用快速定性濾紙過濾,收集濾液；- -濾液再用微纖維濾紙過濾,并收集濾液作為上樣液；- -取2mL上樣液過免疫親和柱凈化.稀釋倍數(shù)：2- -取樣品25g,用PBSS沖液定容至100mL- -高速均質(zhì) C > 10,000r/min1min或用搖床 20

4、0r/min 300r/min 劇烈振蕩 20min；- -用快速定性濾紙過濾,收集濾液；- -濾液再用微纖維濾紙過濾,并收集濾液作為上樣液；- -取2mL上樣液過免疫親和柱凈化.稀釋倍數(shù)：25.4 凈化- -取出免疫親和柱,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和3mL的免疫親和柱去掉上方 塞子,安裝上轉(zhuǎn)接頭,將轉(zhuǎn)接頭另一端與注射器固定后使用-將柱子與氣控操作架上的注射器連接固定,取適量處理后的溶液上樣；- -去掉親和柱下方堵頭,調(diào)節(jié)開關(guān),使液體以12滴/秒的速度流出；- -待液體排干后,方法中的樣品用蒸儲(chǔ)水或去離子水洗滌2次,每次10mL其余樣品首先用0.1%Tween-20水溶液洗滌10mL再用

5、蒸儲(chǔ)水或去離子水洗滌10mL流速2 3滴/秒;-待液體排干后,上樣1mL甲醇,流速1滴/秒,收集洗脫液并在5060c加熱條件 下N氣吹干,然后用1mL流動(dòng)相20%?醇復(fù)溶；- -復(fù)溶液用0.22 pm微孔濾器過濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶中用于 HPLS析.- 每次上樣前都要將上次液體完全排干.5.5 液相測(cè)定C18 柱：250mm長(zhǎng)x 4.6mm直徑,填料粒徑5pm流動(dòng)相：20%?醇流速：1.0 mL/min ；柱溫：40C;進(jìn)樣體積：50 n L紫外檢測(cè)器：218nm分別取一樣體積樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀,在上述色譜條件下測(cè)定試樣的響應(yīng)值峰高或峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)

6、準(zhǔn)曲線, 將未知樣本中嘔吐毒素的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到試樣中嘔吐毒素的濃度,標(biāo)準(zhǔn)品色 譜圖參考以下列圖：數(shù)據(jù)文件名：DON-500ppb.lcd0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.0 min附圖：DON-500ppbB準(zhǔn)品液相圖譜樣品名：DON-500ppb mV 2.0 1.5 1.0 0.5 0.05.6 本卷須知-使用前,免疫親和柱需回至室溫2225C.3 / 4- -親和柱28 c儲(chǔ)存,不得凍存.- -不要使用過了有效日期的免疫親和柱.- -取樣量：根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量,注意提取液量要相應(yīng)改變.- -柱容量：2000ng,當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時(shí),需要適當(dāng) 降低上樣液的體積,重新檢測(cè).- -pH :親和柱的上樣溶液pH需在68之間,假設(shè)偏離此圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pK- -由于樣本中嘔吐毒素的含量普遍較高,如果計(jì)算后樣本含量大于4mg/kg時(shí),表示已經(jīng)超過親和柱柱容量,需要適當(dāng)降低上樣液的體積,重新檢測(cè).- -上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑與流動(dòng)相保持一致可以消除溶劑效應(yīng)的影響.- -嘔吐毒素可致癌,應(yīng)戴手套操作.- -使用過的容器與標(biāo)準(zhǔn)品溶液最好用次氯酸鈉溶液5%V/V浸泡過夜.6、 相關(guān)文件?免疫親和柱檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)?免疫親和柱檢驗(yàn)操作規(guī)程?島