RP-HPLC法測定蓯蓉通便口服液中大黃素的含量

1、RP-HPLC法測定蓯蓉通便口服液中大黃素的含量摘要：目的 建立一種可測定蓯蓉通便口服液中大黃素含量的RP-HPLC方法。方法采用Hypersil-BDS C18(200mmX4.6mm，5m)為色譜柱；流動相為甲醇-0.1 磷酸溶液(85：15，vv)；檢測波長為254nm；流速為1.0mL/min；峰面積外標(biāo)法定量。結(jié)果 走黃素在6.92311g/mL呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)；平均回收率為99.5%；RSD 1.23。結(jié)論 方法簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為該制劑的質(zhì)控方法。關(guān)鍵詞：蓯蓉通便口服液；大黃素；高效液相色譜法；含量測定Determination of emodin

2、in Congrongtongbian oral liquid by RP-HPLCZhou Jing-an，Xu Ling-xlaoABSTRCT：OBJECTIVE To establish an RF HPLC method for determining the content of emodin in Congrongtong-bian oral liquidMETHODS Hypersil BDS C18(200 mmX4.6 mm，5m)was used，methanol-0.1% phosphric acid(85：15，vv)was used as mobile phaseT

3、he detection wavelength was 254nm and the flow rate was 1.0 mL/min External standard method was usedRESULTS Emodin concentration presented a good linear range of 6.92 311g/mL (r=0.9999)，and the average recovery was 99.5%，RSD=1.23%CONCLUSIONS The method is simple，rapid and accurate for the quality co

4、ntrol of the preparationKEY WORDS：Congrongtongbian oral liquid；emodin；RP-HPLC；content determination蓯蓉通便口服液是由肉蓯蓉、何首烏、枳實、蜂蜜組方經(jīng)提取制成的中藥制劑，具有滋陰補腎、潤腸通便的功效，臨床上常用于中、老年人，病后、產(chǎn)后等虛性便秘及習(xí)慣性便秘。收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第12冊中。原標(biāo)準(zhǔn)中采用紫外分光光度法測定含量。該方法需要經(jīng)過多次回流提取，操作煩瑣、費時，且重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性差。本文采用高效液相色譜法測定蓯蓉通便口服液何首烏中大黃素的含量 ，結(jié)果準(zhǔn)確、操作方便，可用于該制劑的質(zhì)

5、量控制。經(jīng)方法學(xué)研究，證明方法可行?，F(xiàn)報道如下。1 儀器與試藥日本島津LC-2O1O AHT高效液相色譜儀；自動進樣系統(tǒng)；CLASS-VP ver61色譜數(shù)據(jù)工作站；BOLONGM-SC-3O2超聲波清洗器(上海波龍電子設(shè)備有限公司)； 日本島津MV-245O型紫外分光光度計。甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為重蒸水；大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0753-9910，經(jīng)HPLC面積歸一化法測定純度為99.27%)；蓯蓉通便口服液(市售甘肅天水制藥廠生產(chǎn)，批號030401、031105、040205，規(guī)格：10mL/瓶)。2 色譜條件色譜柱：Hypersil-BDS C18(200

6、mm×4.6 mm，5m)；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(85：15，vv)；檢測波長為254nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：常溫；進樣量：10L；面積外標(biāo)法定量。3 方法與結(jié)果31 供試品溶液的制備311 樣品溶液的制備精密吸取蓯蓉通便口服液1OmL，置分液漏斗內(nèi)，加入乙醚振搖提取3次，每次30mL，合并乙醚提取液，置蒸發(fā)皿內(nèi)蒸干，加甲醇溶解，然后轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并用甲醇定容至刻度，用0.45m微孔濾膜濾過。312 陰性空白對照溶液的制備按其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的處方比例，制備缺味(何首烏)中藥的陰性空白樣品對照液，照上述“樣品溶液的制備”項下方法制成陰性空白對照溶液。313

7、 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品20.0mg，置5O mL量瓶中，加入甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5mL置1OmL量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每毫升含大黃素0.2 mg的對照品溶液。32 系統(tǒng)適用性試驗取大黃素對照品溶液、陰性空白對照溶液和樣品溶液，按上述色譜條件項下進樣1OL，得HPLC圖譜?？芍?，陰性空白對照溶液在大黃素對照品出峰處域沒有干擾峰出現(xiàn)，故樣品中的其他組分對大黃素測定無干擾作用。理論塔板數(shù)按大黃素峰計算不應(yīng)低于3000。分離度>1.5，大黃素對稱因子為0.951.O5。33 線性關(guān)系的考察精密稱取大黃素對照品約17.29 mg，置5O mL量

8、瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為大黃素對照品儲備液。精密吸取儲備液0.2、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL分別置1O mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，分別進樣1OL，記錄峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、大黃素濃度(X)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程：Y=2.962×1000000X-4.958×1000，r=0.9999。結(jié)果表明大黃素溶液在6.923l1g/mL 呈良好的線性關(guān)系。34 精密度試驗取同一批供試品溶液，進樣1OL，重復(fù)進樣5次，測得大黃素峰面積的RSD為0.10%。再取大黃素對照品溶液，重復(fù)進樣5次，結(jié)果大黃素峰面積

9、的RSD為0.07 。35 重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品5份(批號：040205)，按“311”項下方法制備供試液，平行測定，結(jié)果大黃素的含量為5.56mg/支，RSD為1.49%(n=5)。說明本方法重現(xiàn)性良好。36 穩(wěn)定性試驗取同一批號樣品溶液(批號：030401 01，每毫升含大黃素0.383mg)，在常溫下放置12h，每隔2h測定1次，連續(xù)共測定6次，結(jié)果大黃素峰面積RSD為0.56%。表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。37 回收率試驗采用加樣回收試驗方法，精密吸取已知大黃素含量的樣品5.0 mL 9份，分別精密加入大黃素對照品儲備液4.0、5.0、6.0 mL各3份，相當(dāng)于樣品標(biāo)示含量的

10、8O%120%的大黃素，置分液漏斗內(nèi)，加入乙醚振搖提取3次，每次3OmL，合并乙醚提取液，置蒸發(fā)皿內(nèi)蒸干，加甲醇溶解移入25mL量瓶中。再用甲醇溶液稀釋定容至刻度，混勻。分別進樣測定，大黃素RSD為1.23。38 樣品含量測定精密量取樣品1OmL，按“311”項下方法制備供試樣品溶液。另精密稱取大黃素對照品適量，同“313”項下制備對照品溶液，按上述色譜條件進樣1OL，記錄大黃素峰面積，按外標(biāo)法計算含量。為有效控制蓯蓉通便口服液的質(zhì)量，根據(jù)生產(chǎn)的實際情況和樣品含量測定的結(jié)果，暫定每毫升蓯蓉通便口服液中含大黃素不得少于3.2 mg。4 討論41 檢測波長的選擇取上述大黃素對照品溶液，在紫外分光光

11、度計上于波長200400nm處掃描，結(jié)果在254nm波長處有最大吸收。故以254nm為檢測波長。42 提取方法的選擇本實驗通過分別采用以下方法進行比較： 乙醚萃取法；通過D108型大孔樹脂柱吸附法； 甲醇沉淀雜質(zhì)法，對同一批號的蓯蓉通便口服液進行提取、分離，并按含量測定方法測定供試品溶液中大黃素的含量。結(jié)果3種方法測定結(jié)果相差不大，而以乙醚提取法峰形較好，雜質(zhì)干擾少，且基線平穩(wěn)。雖然將樣品采用通過D108型大孔樹脂柱吸附法測定大黃素的含量結(jié)果與乙醚提取法相似，但該方法樣品提取操作方法煩瑣、費時。用甲醇沉淀雜質(zhì)法，雖然方法簡單，但雜質(zhì)沉淀不完全，圖譜中雜質(zhì)峰響應(yīng)值過大。故采用乙醚萃取法，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。43 何首烏在方中為主藥，含羥基蒽醌衍生物，主要為大黃酚、大黃素、大黃酸等，但是我