高效液相色譜法測定辣椒中維生素C的含量

1、收稿日期:2008206201修改日期:2008209201基金項目:南京曉莊學(xué)院院級科研項目(2006NXY18作者簡介:胡應(yīng)杰,男,南京曉莊學(xué)院化學(xué)系教師,碩士.2008年11月第6期南京曉莊學(xué)院學(xué)報JOURNAL OF NANJ I N G X I A OZ HUANG UN I V ERSI TY Nov .2008No .6高效液相色譜法測定辣椒中維生素C 的含量胡應(yīng)杰1,潘康標(biāo)2,陳昌云1,柳閩生1(1.南京曉莊學(xué)院化學(xué)系,江蘇南京210017;2.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心,江蘇南京210036關(guān)鍵詞:辣椒;高效液相色譜;維生素C中圖分類號:O642文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1

2、00927902(200806200302030引言辣椒營養(yǎng)價值很高,堪稱“蔬菜之冠”,其富含維生素B 、維生素C 、蛋白質(zhì)、胡蘿卜素、鐵、磷、鈣,以及糖等成分,尤其是維生素C 的含量特別豐富,居蔬菜中的前列.每百克辣椒中所含維生素C 比茄子多35倍,比西紅柿多9倍,比大白菜多3倍.維生素C 又名抗壞血酸,是一類水溶性的活性物質(zhì),有較強(qiáng)的還原作用,及重要的生理功能.維生素C 它廣泛存在于新鮮的水果、蔬菜中122,人體本身不能合成,必須依靠膳食供給,因此研究水果蔬菜中維生素C 的含量測定方法具有重要意義.維生素C 測定的方法一般有化學(xué)法、比色法、紫外分光光度法、熒光法等,這些方法所需試劑較多、操

3、作繁瑣324.高效液相色譜法具有高效、快速、穩(wěn)定、可靠等特點5.在所測樣品較多的情況下,借助儀器的分析方法能更快更準(zhǔn)確的進(jìn)1行含量的測定,且準(zhǔn)確性較高.近年來用高效液相色譜法測定維生素C 含量已有一些報道628,但用此方法測定幾種辣椒中的維生素C 含量尚未見報道.本文選擇五種常見辣椒,通過液相色譜分離條件優(yōu)化,建立了一種簡便、快速、穩(wěn)定的辣椒中各種維生素C 含量測定方法.該方法同樣適合于其它水果和蔬菜中維生素C 的含量測定.1實驗部分1.1儀器與試劑HP1100高效液相色譜儀配有二極管陣列檢測器(美國惠普公司;色譜柱Hypersil 2C 18(5m ,150mm ×416mm (中

4、國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所;K Q5200B 型超聲波清洗器;AE 系列電子天平(梅特勒2托利多儀器上海有限公司;組織搗碎機(jī),布氏漏斗,燒杯,25m l 棕色容量瓶.維生素C 標(biāo)準(zhǔn)對照品(維生素C 含量99.17%,中國醫(yī)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司;2次蒸餾水;甲醇(色譜純,美國Fisher 公司;草酸、鹽酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀均為分析純;市售青椒、虎皮尖椒、甜椒、杭椒、小紅尖椒.1.2樣品處理及實驗條件樣品處理采用國標(biāo)9的方法:將辣椒洗凈,切開,放置于勻漿機(jī)中,加0.1%的草酸為提取劑,勻漿,然后用布氏漏斗過濾.稱取5g 樣品濾液于50mL 容量瓶中,用011%草酸溶液定容,分析前用0145m

5、濾膜過濾.高效液相色譜的條件:A:pH =6,0.05mol/L 磷酸二氫鉀,B:甲醇(A:B =955v/v 為流動相,流速為1.0m l/m in,檢測波長254n m ,進(jìn)樣量10l,柱溫20維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:準(zhǔn)確稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品50mg 于小燒杯中,用0.1%的草酸溶解,攪03拌,轉(zhuǎn)移至50m l棕色容量瓶中,加水定容,得到維生素C含量為1000g/m l的標(biāo)準(zhǔn)溶液.2結(jié)果與討論2.1維生素C提取劑的選擇維生素C溶液熱穩(wěn)定性較差,在中性或堿性水溶液中易被氧化,但在酸性溶液中卻很穩(wěn)定.提取維生素C的方法很多3,9,10,為防止樣品及標(biāo)樣中維生素C被氧化分解8,用0.1%草酸溶液

6、作溶劑來溶解樣品及標(biāo)樣.2.2流動相的選擇考慮到維生素C在酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定,選擇調(diào)節(jié)流動相的pH值為酸性.經(jīng)過采用不同值的實驗證明,pH值在5.06.5之間,維生素C的吸收比較大,靈敏度比較高,因此本文選擇磷酸二氫鉀為流動相,調(diào)節(jié)pH值為6.011.本文選擇了配比分別為9010,955,8515,8020的流動相,發(fā)現(xiàn)出峰快了,雜質(zhì)干擾較大,峰不易分開,出峰慢了,實驗時間變長,最后確定955的配比.另外流動相必須現(xiàn)配現(xiàn)用,放久易產(chǎn)生多磷酸鹽,且一般在低溫下保存.2.3檢測器波長的選擇維生素C在254nm有最大吸收,故選擇254 n m作為檢測波長.2.4標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制:用0.1%草酸溶液

7、分別配制20、40、60、80、100mgL-1維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,定容至50m l,溶液用0.45m濾膜過濾,用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣10L,依次測出峰面積.然后以維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(mg/L作自變量,相對應(yīng)的峰面積作因變量,繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,如圖1所示.標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2=0.9953,說明曲線的線性關(guān)系良好 .圖1維生素C的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線2.5維生素C含量測定及精密度考察五種辣椒樣品都在同一實驗條件下平行測定7次,維生素C含量的測定結(jié)果見表1,維生素C標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見圖2,甜椒樣品色譜圖見圖3.由表1可知,精密度實驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%,說明該方法重復(fù)性和再現(xiàn)性都是比較高的.從樣品色譜圖

8、中可以看到,維生素C的出峰時間在2m in左右,具有靈敏,快速的特點.由表1可知,五種辣椒中維生素C含量大小順序為:小紅尖椒>青椒>甜椒>虎皮尖椒>杭椒.表1維生素C含量測定結(jié)果及精密度考察(n=7樣品Vc測定結(jié)果(mg/100mL平均值(mg/100mL標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%2.6回收率實驗表2回收率實驗結(jié)果序號樣品中維生素C量/mg加入維生素C標(biāo)樣量/mg測得的維生素C量/mg回收率3結(jié)論由以上分析可知,本文采用的分析方法是可靠的,該方法同樣也適用于于其它水果、蔬菜中維生素C含量的測定.由于維生素C對光不穩(wěn)定,遇氧易分13 圖2Vc 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖圖3甜椒樣品的色

9、譜圖解,故本實驗應(yīng)避光操作,整個實驗均用棕色容量瓶定容12213;流動相均需色譜純度,水用高純度水,脫氣后的流動相要小心盡量不引起氣泡;所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾;壓力不能太大,最好不要超過15MPa .采用該方法對五種辣椒進(jìn)行維生素C 含量進(jìn)行測定,結(jié)果表明,五種辣椒維生素C 含量大小依次為:小紅尖椒>青椒>甜椒>虎皮尖椒>杭椒.參考文獻(xiàn):1陸道禮,李國文,陳庶來,等.草莓汁加工貯藏過程中維生素C 穩(wěn)定性的研究J .食品研究與開發(fā),2004,25(6:1212123.2姜波,范圣第,劉長建.菠蘿中維生素C 的高效液相色譜分析J .大連民族學(xué)院學(xué)報,2003,5(1

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11、維生素C 的含量J .大連民族學(xué)院學(xué)報,2006,27(2:21227.9G B /T5009.86蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸測定(熒光法和2,4一二硝基苯法S.2003.10王雪梅,等.HP LC 法測定新鮮草莓中水溶性維生素J .食品科學(xué),1995,5:52253.11蔣曄,劉紅菊,郝曉花.反相高效液相色譜法同時測定9種水溶性維生素J .藥物分析雜志,2005,25(3:3392342.12高志杰,李靜濤,饒小思.高效液相色譜2二極管陣列檢測器法測定飲料中維生素C 的研究J .中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(4:4462447.13GI Kvesitadze,AG Kalandiya

12、,S O Papunidze1,et al .I 2dentificati on and quantificati on of ascorbic acid in ki w i fruit by high perf or mance liquid chr omat ographyJ .App l B i o 2che mMocr o2bile,2001,37(2:2432246.(責(zé)任編輯:陳昌云Determ i n ati on of Vc i n Hot Pepper by Hi gh Performance L i qui d Chro matographyHU Ying 2jie 1,P

13、 AN Kang 2biao 2,CHEN Chang 2yun 1,L I U M ing 2sheng1(1.Depart m ent of Chem istry ,Nanjing Xiaozhuang University,Nanjing 210017,China;2.Agricultural Pr oducts Quality Safety Center of J iangsu Pr ovince,Nanjing 210036,China Abstract:A p ractical method of detecting the content of V ita m in C in different kinds of hot Pepper by u