HIF-1α、2α和Survivin蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義(1)

1、HIF-1、2和Survivin蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義(1)【摘要】 目的 探討缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1、HIF-2）和生存素蛋白（survivin）在食管正常粘膜、食管炎、食管鱗癌（ESCC）組織中的表達(dá)，并測(cè)定食管正常粘膜、食管炎、食管鱗癌組織中的微血管密度，初步分析它們與食管鱗癌生物學(xué)行為之間的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)(SP)方法分別檢測(cè)65例食管正常粘膜、食管炎、食管鱗癌組織中HIF-1、HIF-2和survivin的表達(dá)，同時(shí)測(cè)定微血管密度(MVD)計(jì)數(shù)。結(jié)果 (1) HIF-1、HIF-2和survivin在食管正常粘膜組織中不表達(dá)，食管炎組織中低表達(dá)，食管鱗癌中高表

2、達(dá)，在食管不同組織分型中三者的表達(dá)比較具有顯著性差異(P0.01)。隨正常粘膜-炎癥-癌的次序MVD計(jì)數(shù)呈逐漸升高趨勢(shì)。(2)Survivin在食管鱗癌組織中表達(dá)越強(qiáng)，組織分化程度越低(P0.01)、TNM分期越晚(P0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高(P0.01)；HIF-1和HIF-2在食管鱗癌組織中表達(dá)越強(qiáng)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高(P0.01)，組織分化程度越低(P0.05)，兩者與組織分化程度、TNM分期呈負(fù)相關(guān)。(3)食管鱗癌中HIF-1、HIF-2表達(dá)與survivin表達(dá)呈正相關(guān)(P0.01), 三者表達(dá)與MVD呈正相關(guān)(P0.01)。結(jié)論 (1) HIF-1、HIF-2和survivin表

3、達(dá)對(duì)食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展起正性協(xié)同作用；(2)檢測(cè)食管鱗癌組織中survivin的表達(dá)對(duì)判斷腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要意義。survivin可望成為診斷和治療食管鱗癌的新靶點(diǎn)。 【關(guān)鍵詞】 食管鱗癌 缺氧誘導(dǎo)因子 生存素蛋白 免疫組織化學(xué) Abstract Objective To identify MVD and illustrate the significance of expression of HIF-1、HIF-2 and survivin in normal mucosa of esophagitis and esophageal squamous cell cancer, and

4、 its relationship to the biological behavior of esophageal squamous cell cancer. Methods HIF-1、HIF-2 and survivin in 65 specimens resection from patients with normal mucosa、esophagitis and esophageal squamous cell cancer were investigated by IHC S-P staining method and identify the MVD as well. Resu

5、lts (1)The expression of HIF-1、HIF-2 and survivin in normal mucosa was non-expression, low in esophagitis ,high in esophageal squamous cell cancer , the expression of esophageal squamous cell cancer was significantly higher than its expression in normal mucosa and esophagitis(P0.01). MVD was more hi

6、gher as the progression of normal mucosa, esophagitis and esophageal squamous cell cancer. (2)Expression of survivin in esophageal squamous cell cancer was inversely correlated with the histological differentiation of tumor, lymph node metastasis and TNM stage(P0.01). Expression of HIF-1、HIF-2 was p

7、ositively related with lymph node metastasis(P0.01) and histological differentiation of tumor(P0.05),inversely correlated with TNM stage(P0.01). (3)Expression of HIF-1、HIF-2 and survivin were positively related with each other(P0.01) and the MVD(P0.05)。 1.2 主要試劑 兔抗人多克隆survivin即用型工作液、HIF-1和HIF-2鼠抗人單克

8、隆抗體濃縮型工作液、即用型ElivisionTM plus試劑盒（鼠/兔）、DAB顯色試劑盒，均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 1.3 免疫組化檢測(cè)方法 石蠟切片脫蠟水化后均先行高溫高壓抗原修復(fù)，其余步驟按ElivisionTM plus試劑盒說(shuō)明書操作。以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的組織作陽(yáng)性對(duì)照。 1.4 結(jié)果判斷方法 HIF-1、HIF-2表達(dá)于細(xì)胞核，出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒者為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分組：每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野(400)，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%者為強(qiáng)陽(yáng)性，弱陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)視為陽(yáng)性表達(dá)。Survivin表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，

9、出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒者為陽(yáng)性，按染色深淺分組：陰性(-)：無(wú)染色；弱陽(yáng)性(+)：淺染色；陽(yáng)性 (+)：中度染色；強(qiáng)陽(yáng)性(+)：強(qiáng)染色。分組在病理科醫(yī)生不了解病例臨床預(yù)后情況下進(jìn)行。 MVD計(jì)數(shù)：參照Weidner等報(bào)道的方法, 每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野(400)，記錄5個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù), 取其平均值作為該病例的MVD值。 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表達(dá)，顯著性檢驗(yàn)采用2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以(xS)表達(dá)，顯著性檢驗(yàn)采用方差分析、t檢驗(yàn)；做秩相關(guān)分析。 2 結(jié)果 2.1 食管不同組織分型中HIF-1、HIF-2和survivin的表達(dá)情

10、況 HIF-1、HIF-2和survivin在食管正常粘膜組織中不表達(dá)，在食管炎組織中低表達(dá)，在食管鱗癌中高表達(dá)。MVD計(jì)數(shù)隨著正常粘膜-炎癥- 癌次序呈逐漸升高趨勢(shì)，見表1。表1食管不同組織分型的比 注：*與正常粘膜比較P0.01；與食管炎比較P0.01. 2.2 食管鱗癌中HIF-1、HIF-2和survivin的表達(dá)情況 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組HIF-1、HIF-2和Survivin陽(yáng)性率分別為92.31%、100%和92.31%，與淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組比較有顯著性差異 (P0.05或P0.01)，MVD計(jì)數(shù)（30.362.78）與淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組比較有顯著性差異(P0.01)；組織分化程度低組HIF-1

11、、HIF-2和Survivin陽(yáng)性率分別為95.24%、100%和100%，三者與組織分化程度高、中組比較有顯著性差異 (P0.05或P0.01)，MVD計(jì)數(shù)(30.522.89)與組織分化程度高、中組比較有顯著性差異 (P0.01)；TNM分期B、組HIF-1、HIF-2和Survivin陽(yáng)性率分別為90.48%、95.24%和90.48%，其中survivin與TNM分期、A組比較有顯著性差異(P0.05），MVD計(jì)數(shù)(30.582.67)與TNM分期、A組比較有顯著性差異(P0.01)，見表2。表2 65例食管癌各因素比較 注： *與淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移比較，P0.05；*，P0.01；與分化程

12、度高、中比較P0.05，與分化程度高、中比較 P0.01；，與TNM分期、A比較，P0.05，P0.01.2.3 食管鱗癌中HIF-1、HIF-2和survivin表達(dá)間的相關(guān)性 HIF-1、HIF-2與survivin表達(dá)均呈正相關(guān)(P0.01)，隨著HIF-1、HIF-2和survivin表達(dá)強(qiáng)度的升高，MVD呈升高趨勢(shì)，三者與MVD計(jì)數(shù)均呈正相關(guān)關(guān)系(P0.01)，見表3。 表3 食管癌中HIF-1、HIF-2和Survivin表達(dá)的相關(guān)性 3 討論 3.1 HIF-1、HIF-2對(duì)食管鱗癌生物學(xué)行為的影響 HIF是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中介導(dǎo)低氧適應(yīng)的一種異源二聚體核轉(zhuǎn)錄因

13、子，HIF-1含有亞基(HIF-1)和亞基(HIF- 1)。HIF-2與HIF-1在結(jié)構(gòu)上極其相似，也是由誘導(dǎo)表達(dá)的亞單位和持續(xù)表達(dá)的亞單位組成異源二聚體結(jié)構(gòu)。兩者的生物活性由亞基決定，表達(dá)嚴(yán)格地受細(xì)胞氧濃度的調(diào)節(jié)。在缺氧狀態(tài)下，HIF-1和HIF-2通過(guò)啟動(dòng)下游靶基因（如紅細(xì)胞生成素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、葡萄糖載體-1、糖酵解酶等）的表達(dá)對(duì)腫瘤的血管生成、能量代謝、激素代謝等方面產(chǎn)生重要作用3,6，促使惡性腫瘤增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。腫瘤適應(yīng)缺氧的重要途徑之一是新生血管的形成7, 而腫瘤新生血管形成與實(shí)體瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并影響大部分惡性腫瘤的預(yù)后。許多研究已表明，HIF-1和HIF-2是VEGF關(guān)鍵的激活因子8,11。最近有研