常用大腸桿菌感受態(tài)JM109_DH5a_BL21等的區(qū)別

1、【引用】常用大腸桿菌感受態(tài)JM109,DH5a,BL21等的區(qū)別生命科學(xué)2011-03-31 14:48:42 閱讀80 評(píng)論0 字號(hào):大中小訂閱本文引用自xxrrzq常用大腸桿菌感受態(tài)JM109,DH5a,BL21等的區(qū)別1:DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍.coli DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí),可與載體編碼的-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)-互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株?；蛐?F-,80dlacZM15,(lacZYA-argFU169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-, mk+,phoA,supE44,-,thi-1,gyrA96,rel

2、A12:BL21(DE3 菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白?；蛐?F-,ompT,hsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE33:BL21(DE3 pLysS菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株該菌

3、株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZM15進(jìn)行-互補(bǔ),從而顯示-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑒別重組體菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,(lac-proAB /FtraD36,proAB+,lacIq,lacZM155:TOP10菌株該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳?；蛐?F- ,mcrA(mrr-hsd RMS-mcrBC,80 ,lacZM15,lac74,recA1 , ara139(ar

4、a-leu7697,galU ,galK ,rps,(Strr endA1,nupG6:HB101菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定,使用方便,適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-,recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2, rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.部分限制性內(nèi)切酶對(duì)甲基

5、化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割,而有些會(huì)影響,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC,該XbaI位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:(1選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與MboI相同;但不受甲基化影響;(2利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備,如E.coli JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶,從這些細(xì)胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。8:E.coli

6、 JM110要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒,則不會(huì)被甲基化.各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別用途特征Xl1-Blue菌株基因型:endA1 gyrA96(nalR thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 FTn10 proAB+ lacIq (lacZM15 hsdR17(rK- mK+。特點(diǎn):具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途:分子克隆和質(zhì)粒提取。BL21(DE3菌株基因型:F ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- (DE3 lacI lacU

7、V5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5。特點(diǎn):該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子,該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。用途:蛋白質(zhì)表達(dá)。BL21(DE3ply菌株基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- (DE3 pLysS(cmR。特點(diǎn):該菌株帶有pLysS,具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。用途:

8、蛋白質(zhì)表達(dá)DH5菌株基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG 80dlacZM15 (lacZYA-argFU169, hsdR17(rK-, 特點(diǎn):一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。其80dlacZM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。用途:分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (lac-proAB e14-

9、FtraD36 proAB+ lacIq lacZM15hsdR17(rK-mK+。特點(diǎn):部分抗性缺陷,適合重復(fù)基因表達(dá), 可用于M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩選。用途:分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。DH10B菌株基因型:F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC 80dlacZM15 lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu7697 araD139 galU galK nupG rpsL -The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -

10、complementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues,useful for plasmid rescue procedures。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS說(shuō)明:DH10B細(xì)胞是高轉(zhuǎn)化效率的E. coli,可以完美應(yīng)用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。DH10B基因型具有以下特點(diǎn):? lacZM15 用于重組克隆的藍(lán)/白斑篩選? 消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系統(tǒng),允許構(gòu)建更多具有代表性的基因組文庫(kù)(1,2? endA1突變,可以增加質(zhì)粒產(chǎn)量和數(shù)量? 高效率轉(zhuǎn)化大小為150 kb的質(zhì)粒,用于產(chǎn)生cDNA或基因組文庫(kù)DH10B?可以表達(dá)tonA的基因型,tonA能夠提供對(duì)T1和T5噬菌體感染的抗性(DH10B? T1R。DH10B?的基因型:F ·mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu76