藥物中陰離子的定量分析

1、藥物中陰離子的定量分析摘要：本文采用兩種陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測法來分析藥物中的常見陰離子。選擇兩種口服藥物作為代表：一種咳嗽藥，一種感冒藥。其組分包含糖醇、乙二醇和糖類，可以用IonPac. ICE-AS1, CarboPac. MA1，和CarboPac PA10色譜柱用電化學(xué)檢測器分析。比較了IonPac AS14 和AS11色譜柱對藥物中陰離子的選擇性。AS14填料采用高度交聯(lián)的基核，表面有陰離子交換層。 關(guān)鍵詞：陰離子交換柱；抑制電導(dǎo)檢測法；口服藥；AS14填料 美國食品藥品安全局（FDA）和其他國家的法規(guī)制定機(jī)構(gòu)都要求對藥物組分進(jìn)行檢測，以檢驗其均一性、藥效、質(zhì)量及純度等，并且越

2、來越注意其活性和非活性成分。既能夠檢測生色成分又能夠檢測非生色成分的分析技術(shù)是非常有價值的。其中，非生色成分中有很多是離子型的，不能用吸光度法檢測，但可以用抑制電導(dǎo)法檢測。抑制電導(dǎo)是一種有效的檢測技術(shù)，線性范圍寬，檢測限低。抑制器可以降低淋洗液的背景電導(dǎo)，并有效提高分析物的檢測電導(dǎo)。 本文使用兩種陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測法來分析藥物中的常見陰離子。選擇兩種口服藥物作為代表：一種咳嗽藥，一種感冒藥。其組分包含糖醇、乙二醇和糖類，可以用IonPac. ICE-AS1, CarboPac. MA1，和CarboPac PA10色譜柱用電化學(xué)檢測器分析。本文比較了IonPac AS14 和AS11色

3、譜柱對藥物中陰離子的選擇性。AS14填料采用高度交聯(lián)的基核，表面有陰離子交換層。陰離子交換層可以與烷基季胺鹽結(jié)合，對憎水基團(tuán)具有選擇性。而AS11填料是在聚乙基苯乙烯表面結(jié)合烷基季胺鹽。另外一個不同點是AS14色譜柱適用于等度淋洗條件，而AS11可以用氫氧化物梯度淋洗。兩種色譜柱都可以使用有機(jī)溶劑淋洗液，以減少某些有機(jī)陰離子與固定相的二級反應(yīng)。AS11色譜柱的檢測限、線性、選擇性、準(zhǔn)確度以及精密度已有報道。 1 實驗部分 1.1 儀器 Dionex DX-500系統(tǒng)，包括GP40 梯度泵（含排氣）；CD20 電導(dǎo)檢測器或ED40電化學(xué)檢測器；LC30 或LC25 恒溫箱或LC20；AS3500

4、 自動進(jìn)樣器；PeakNet 色譜工作站； 碳酸鈉，Sodium carbonate, 0.5 M (Dionex P/N 37162) 碳酸氫鈉，0.5 M (Dionex P/N 37163) 氫氧化鈉， 50% (w/w) (Fisher Scientific,P/N SS254-500) 去離子水，18 M-cm或者以上（建議事先檢測） 糖精（鄰磺酰苯甲酰亞胺），（Sodium salt; Sigma Chemical Co.，P/N S-1002） 1.2色譜條件 體系1： 色譜柱：IonPac AS14 分析柱（P/N 46124）， IonPac AG14 保護(hù)柱（P/N 461

5、34） 淋洗液：3.5 mM碳酸鈉+0.8 mM 碳酸氫鈉 流速：1.2 mL/min 進(jìn)樣體積：10 L 檢測模式：抑制電導(dǎo)ASRS.， 期望背景值：15 S 期望操作反壓：12.4 MPa (1800 psi) 體系2： 色譜柱：IonPac AS11分析柱（P/N 44076），IonPac AG11保護(hù)柱（P/N 44078），ATC-1 Anion 捕獲柱（P/N 37151）淋洗液：氫氧化鈉梯度淋洗 時間min ： 02.5 2.56 618 1825 濃度mM： 0.5 0.55 538 0.5 流速：2ml/min 進(jìn)樣量：10l 檢測模式：抑制電導(dǎo)ASRS，自循環(huán)模式 期望背

6、景值：0.5 S 期望操作反壓：12.4 MPa (1800 psi) 1.3樣品制備 將粘稠的樣品用水稀釋10倍（w/w），多效感冒藥稀釋100倍。表中的黑體成份可以用陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測，其余的可以用CarboPac柱分離并電化學(xué)檢測。 需要測試稀釋用的水中痕量陰離子的含量；需要測試樣品容器中的殘留陰離子。一般塑料制品比玻璃制品殘留陰離子低。用純水清洗可以減少殘留。 圖 1 陰離子的分離圖 2 分離有機(jī)物和無機(jī)離子2結(jié)論與討論 圖1是氟離子、醋酸根、氯離子、硝酸根、磷酸根、硫酸根的分離色譜圖，使用IonPac AS14柱，3.5mM碳酸鈉0.8mM碳酸氫鹽淋洗。這種等度淋洗條件不需要

7、平衡柱子，因而縮短了運行時間并提高了工作量，可以在14分鐘內(nèi)分析完。檸檬酸鹽、苯甲酸鹽和鄰磺酰苯甲酰亞胺不用這種方法淋洗。 使用IonPac AS11柱，氫氧化鈉梯度淋洗，分離無機(jī)離子、醋酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽和鄰磺酰苯甲酰亞胺（見圖2），盡管梯度淋洗增加了時間，但是有機(jī)物和無機(jī)陰離子的分離度很好；如果調(diào)節(jié)淋洗液強(qiáng)度，即使縮短了分離時間，但是犧牲了氟離子和醋酸根之間的分離度。 鄰磺酰苯甲酰亞胺一次進(jìn)樣超過1000ng時會大大縮短保留時間，從而產(chǎn)生與檸檬酸鹽的共淋洗，此時，二者的濃度在10L進(jìn)樣時都要調(diào)至100mg/L以下。鄰磺酰苯甲酰亞胺峰會拖尾，可以在淋洗液中加入有機(jī)溶劑（例如，10乙腈）。加入乙腈會改變柱子的選擇性，降低峰面積，增大噪音。 已經(jīng)使用IonPac AS14和AS11柱和抑制電導(dǎo)分析了很多的藥物（包括固體和液體樣品）如鼻子和口腔的抑制劑，收斂劑，抗酸劑，灌腸劑，安眠藥，鎮(zhèn)痛藥，清潔洗劑，抗組胺劑，過敏糖漿等。其中的已知陰離子互相沒有干擾。 3 結(jié)論 使用IonPac AS11柱，抑制電導(dǎo)可以分析藥品中的有機(jī)物和無機(jī)陰離子，例如氟離子、氯離子、溴離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根，以及苯甲酸根、山梨酸酯、檸檬酸鹽、和鄰磺酰苯甲酰亞胺等。而IonPac AS14柱適用于分離一般的陰離子，不適合分離有機(jī)物（醋酸鹽除外）。IonPac AS14柱使用等度淋