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1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上挑選葡萄沖洗:用清水沖洗葡萄12遍除去污物，注意不要反復(fù)多次沖洗，以免洗掉菌種。先沖洗后去枝梗,以免微生物污染果肉。酒精發(fā)酵果酒榨汁：對(duì)發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁的器皿等實(shí)驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水反復(fù)沖洗幾次,再用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精擦拭消毒，晾干待用醋酸發(fā)酵果醋原理:酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖:C6H12O6+6O26CO2+6H20在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵，C6H12O62C2H5OH+2C02發(fā)酵條件:18一25。在缺氧，呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到

2、抑制。發(fā)酵裝置發(fā)酵時(shí)間10 12d發(fā)酵檢驗(yàn)：可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)行酵母菌的鏡檢等工作。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色進(jìn)氣口：先通入氧氣，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖；再密封，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置裝瓶體積為2/3出氣口：及時(shí)排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置，如瓶子，每天要擰松瓶蓋24次，進(jìn)行排氣。安裝裝水彎曲玻璃管，可防止雜菌和氧氣進(jìn)入。出料口：取樣檢測(cè)原理：醋酸菌是-種好氧性細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。變酸的酒的表面觀察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。實(shí)驗(yàn)表明，醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通

3、人氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸,當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿酑2H5OH+02CH3COOH+H20發(fā)酵條件溫度： 3035 空氣：充足的氧發(fā)酵裝置發(fā)酵時(shí)間：78d左右發(fā)酵檢驗(yàn)進(jìn)氣口：連接氣泵，輸入氧氣（無(wú)菌空氣）出氣口：排氣出料口：取樣檢測(cè)制作流程制作原理: 多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵如青霉、酵母、曲霉、毛霉等。其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一種絲狀真菌，具有發(fā)達(dá)的白色菌絲。新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。讓豆腐長(zhǎng)出毛霉:

4、將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的溫度控制在1518。傳統(tǒng)腐乳的生產(chǎn)中，豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉來(lái)自空氣中的毛霉孢子，而現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在無(wú)菌條件下，將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣可以避免其他菌種的污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量加鹽腌制：分層加鹽，并隨層加高而增加鹽量，在瓶口表面鋪鹽厚些。加鹽腌制的時(shí)間約為8天左右。加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過(guò)程中不會(huì)過(guò)早酥爛。同時(shí)，鹽能抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。加鹵湯裝瓶：將黃酒、米酒和各種香辛料，按口味不同而配制成鹵湯。酒精含量控制在12左右。加酒可以抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，也具有防腐

5、殺菌的作用。密封腌制制作原理：乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，在無(wú)氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見(jiàn)的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。制作流程選擇原料（新鮮？）修整洗滌晾曬切分稱取食鹽配置鹽水（比例4：1）泡菜鹽水（煮沸消毒）加調(diào)味料裝壇（注意）發(fā)酵：將壇口水封，防止外界空氣進(jìn)入，進(jìn)行乳酸發(fā)酵。白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。成品測(cè)定亞硝酸鹽含量實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)鹽的濃度過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高會(huì)影響腐乳的口味。鹵湯中酒的含量應(yīng)控制在12%左右。酒精含量過(guò)高，腐乳成熟的時(shí)間將會(huì)延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。用來(lái)腌制腐乳的

6、玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，瓶口通過(guò)酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水。當(dāng)人體攝入的亞硝酸鹽總量達(dá)到0.30.5g時(shí)，會(huì)引起中毒，達(dá)3g時(shí)會(huì)引起死亡。比色法：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，再與N-1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合生成玫瑰紅色染料。將經(jīng)過(guò)反應(yīng)顯色后的待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)液比色，即可估算出樣品中的亞硝酸鹽含量。專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用物理狀態(tài): 液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)；固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂）微生物分離純化菌落觀察計(jì)數(shù)功 能：鑒別培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基微生物篩選分離純

7、化過(guò)程專題2微生物培養(yǎng)與應(yīng)用培養(yǎng)基分類組成成分：培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、碳源（牛肉膏）、氮源（蛋白胨、牛肉膏）和無(wú)機(jī)鹽。還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì) pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧的要求制備培養(yǎng)基計(jì)算稱量溶化：連同稱量紙一起放入燒杯。加瓊脂后攪拌防糊底燒杯破裂。調(diào)pH：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。分裝滅菌：高壓蒸汽滅菌法，100kPa、121維持1530min，將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天。倒平板：平板倒置的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴落到平板上造成污染；避免水分蒸發(fā)，以利微生物生長(zhǎng)滅菌，消毒：蛋白質(zhì)凝固變性滅菌：滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽

8、孢和孢子。灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法(培養(yǎng)基等物體的滅菌)。消毒：消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。煮沸消毒法、化學(xué)藥物消毒法、紫外線消毒法接種準(zhǔn)備平板劃線法：第一次劃線（殺死接種環(huán)上原有的微生物，避免污染培養(yǎng)物）及每次劃線（殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少）之前和劃線結(jié)束（避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者）都需要灼燒接種環(huán)滅菌。平板劃線法為什么要把第一次以后的每一次劃線的起點(diǎn)放在上一次劃線的末端：目的是使每一次劃線后菌體數(shù)目減少，培養(yǎng)之后形成的菌落是由單

9、個(gè)菌體繁殖而成。 灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。接種稀釋涂布平板法（無(wú)菌技術(shù)）使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。菌落形態(tài)：形狀、大小、隆起程度和顏色。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)菌種保藏（1）對(duì)于頻繁使用的菌種臨時(shí)保藏的方法：固體斜面培養(yǎng)基上4的冰箱中保藏。缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與1mL滅菌甘油充分混勻后，放在20的冷

10、凍箱中保存。結(jié)果尿素分解菌分離的原理：配制選擇培養(yǎng)基，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)，其他微生物則不能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成NH3，使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，酚紅指示劑變紅。原理土壤取樣：距地表3-8cm樣品稀釋實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)接種培養(yǎng)：稀釋涂布平板法挑選菌落鑒定剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理:剛果紅纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)

11、以纖維素分解菌為中心的透。明圈。這樣，我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。原理土壤取樣富含纖維素的環(huán)境選擇培養(yǎng)用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌數(shù)量實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)樣品稀釋接種培養(yǎng)將樣品涂布于鑒別培養(yǎng)基上挑選菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 發(fā)酵產(chǎn)酶實(shí)驗(yàn)無(wú)菌技術(shù)：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，要注意以下幾個(gè)方面： 對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。 將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。 為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。菌落計(jì)數(shù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基

12、表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。為使結(jié)果接近真實(shí)值，要設(shè)置重復(fù)組，取其平均值?？蓪⑼幌♂尪鹊臉悠方臃N到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。設(shè)置對(duì)照可排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題1 菊花的組織培養(yǎng) 原理(全能性)：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。

13、脫分化：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱為脫分化，又叫去分化。 再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽的過(guò)程。愈傷組織：愈傷組織是通過(guò)細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，高度液泡化呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。 外植體 愈傷組織 長(zhǎng)出叢芽 生根 移栽成活外植體：植物的種類、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。營(yíng)養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl

14、、Ni、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。MS培養(yǎng)基中還需添加植物激素。影響因素激素：生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。二者濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果其他條件環(huán)境條件： PH，溫度，光照。過(guò)程配制培養(yǎng)基：1.配置各種母液（大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，維生素等有機(jī)物和激素按1mg/mL單獨(dú)配置），2.配置培養(yǎng)基，3.滅菌（連同其他器械高壓蒸汽滅菌）外植體消毒：流水沖洗后，放入裝有清水的培養(yǎng)皿中，加入少許洗衣粉，用毛筆輕輕刷洗，后用流水沖洗20min，無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入70%的酒精中，輕輕搖動(dòng)2-3次，持

15、續(xù)6-7s，用無(wú)菌水漂洗干凈。無(wú)菌吸水紙將外植體表面水分吸干，然后放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的HgCl2溶液中浸泡1-2min，取出，用無(wú)菌水漂洗至少3次，漂凈消毒液。無(wú)菌操作:用70的酒精消毒工作臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈。注意所有接種工作都必須在酒精燈旁進(jìn)行，器械使用前后都要用火焰灼燒滅菌。方向:接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上接種注意事項(xiàng)培養(yǎng)：菊花組培所需PH為5.8，溫度為18-22，光照條件為每日用日光燈照射12小時(shí)。在無(wú)菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒移栽、栽培課題2月季花藥培養(yǎng)一、原理 花粉發(fā)育被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 小孢子四分體時(shí)期，單核期和雙核期等階段。 在正常情況下，一個(gè)小孢子

16、母細(xì)胞可以產(chǎn)生8個(gè)精子；在一枚花藥中可以產(chǎn)生若干個(gè)花粉 單倍體植株產(chǎn)生途徑(取決于激素的種類和配比)花粉花粉胚狀體愈傷組織從芽從芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)二、影響因素影響花粉植株成功與否和成功率的主要因素：材料選擇和培養(yǎng)基組成材料選擇 ：親本植株的生理狀況 和生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理及接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率有影響。從花藥來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇初花期的花藥；從花粉來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇單核期的花粉。；從花蕾來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇完全未開(kāi)放的花蕾。 培養(yǎng)基組成：（水）大量元素，微量元素，有機(jī)物，植物激素。三、過(guò)程材料選取：選擇花藥時(shí)一般通過(guò)鏡檢確定花粉發(fā)育時(shí)期，此時(shí)需要對(duì)花粉細(xì)胞核進(jìn)行染色，最常

17、用的方法是醋酸洋紅。不易著色需采用焙華青鉻礬法。外植體消毒：花蕾用V/V為70%的酒精浸泡30秒，無(wú)菌水清洗，無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）無(wú)菌水沖洗35次。 接種（1）剝?nèi)』ㄋ帲合竞蟮幕ɡ?，要在無(wú)菌條件下除去花萼、花瓣。在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥，否則接種后易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織；還要徹底除去花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（2）接種花藥：剝?nèi)〉幕ㄋ幰⒖探臃N到 培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種710個(gè)花藥。 培養(yǎng)：（1）花藥培養(yǎng)利用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基中添加2,

18、4D、KT、IAA的培養(yǎng)基，pH為 5.8  ，溫度為25 ，幼苗形成之前不需要光照（2）培養(yǎng)2030d后，花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。前者還要轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)成再生植株；后者要盡快幼小植株分開(kāi)并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。篩選鑒定：通過(guò)愈傷組織形成的植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體組的數(shù)目的變化，因而需要鑒定和篩選。專題六 植物有效成分的提取天然香料的植物、動(dòng)物。不同植物的根、莖、葉、花、果實(shí)、種子都可以提取芳香油。芳香油的提取方法：蒸餾（揮發(fā)性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的芳香油）水中蒸餾、水上蒸餾、水汽蒸餾。壓榨：原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊

19、，有效成分容易水解。萃?。悍枷阌鸵兹苡谟袡C(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油品質(zhì)。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以萜類化合物及其衍生物為主。(一) 玫瑰精油的提取玫瑰油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾。蒸餾時(shí)間不能過(guò)短，溫度不能過(guò)高。鮮玫瑰花+清水（1:4）水蒸氣蒸餾：蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過(guò)度沸騰冷凝：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離，減少玫瑰油揮發(fā)油水混合物加入NaCl：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離分離油層分液漏斗分液除水加入無(wú)水Na2SO4：吸收油層中的水分，然后過(guò)濾玫瑰油(二)橘皮精油的提取石灰水浸泡：破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),分解果膠。防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過(guò)濾不堵塞篩眼柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解，通常用壓榨法漂洗壓榨：小蘇打、硫酸鈉：促進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.25和5）過(guò)濾：用布袋過(guò)濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。靜置：將橘皮油在510冰箱中靜置57d，分離出上層澄清橘皮油，除去果蠟和水分再次過(guò)濾：將下層橘皮油用濾紙過(guò)濾，濾液與上層橘皮油合并橘皮油 (三) 胡蘿卜素的提取、萃取劑的選擇水溶性的：乙醇、丙酮；水不溶性的：石