再生障礙性貧血T淋巴細(xì)胞亞群及其功能研究

1、    再生障礙性貧血T淋巴細(xì)胞亞群及其功能研究        免疫功能紊亂在再生障礙性貧血（再障）病理過(guò)程的發(fā)生和發(fā)展中起著十分重要的作用。我們通過(guò)研究再障患者不同狀態(tài)和不同分化階段的T淋巴細(xì)胞亞群變化和其對(duì)造血的抑制作用，尋找診斷免疫型再障的較準(zhǔn)確的方法，為臨床治療提供依據(jù)。 病例和方法1病例再障22例，其中重型再障(SAA)型5例，型6例，慢性再障(CAA)11例；男19例,女3例;平均年齡31.3歲（2050歲）。除1例CAA外均接受過(guò)治療。14名獻(xiàn)血員為正常對(duì)照組。

2、2單個(gè)核細(xì)胞激活106/ml外周血單個(gè)核細(xì)胞在體積分?jǐn)?shù)為10%的牛血清，5×10-5mol/L 2-巰基乙醇，2mmol/L L-谷氨酰胺，4g/ml PHA-P（購(gòu)自Sigma公司）, IMEM培養(yǎng)液條件下，置體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2，37及飽和濕度下培養(yǎng)96小時(shí)。3T淋巴細(xì)胞集落（CFU-T）培養(yǎng)方法見(jiàn)文獻(xiàn)1，其中牛血清濃度為體積分?jǐn)?shù)15%，PHA-P 4g/ml。50個(gè)細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)為1個(gè)集落。4活化的外周血單個(gè)核細(xì)胞抑制骨髓粒-巨噬細(xì)胞集落(CFU-GM)形成培養(yǎng)體系中含甲基纖維素9g/L，牛血清、AB血清、胎肌浸液體積分?jǐn)?shù)分別為20%、10%、20%，2mmol/L L-谷

3、氨酰胺，105骨髓單個(gè)核細(xì)胞，3×105再障或正常人活化的外周血單個(gè)核細(xì)胞。接種于24孔培養(yǎng)板（購(gòu)自Costar公司），每孔0.5ml，置體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2，37及飽和濕度下培養(yǎng)14天。40個(gè)細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)為1個(gè)集落。5間接免疫熒光測(cè)定方法見(jiàn)文獻(xiàn)2，其中CFU-T觀察整個(gè)集落陽(yáng)性率。6統(tǒng)計(jì)方法采用秩和檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)。結(jié)果1外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化11例SAA和11例CAA及14名正常對(duì)照CD4+細(xì)胞百分率分別為(28.9±13.1)%，(29.1±9.4)%和(29.5±6.7)%，三組比較,差異無(wú)顯著性。CD8+ 細(xì)胞CAA為(37.8±

4、8.9)%，SAA為(24.2±11.0)%，正常對(duì)照為(21.5±8.7)%，CAA組與SAA和正常對(duì)照比,差異有顯著性(P<0.01),SAA組與正常對(duì)照比,差異無(wú)顯著性。CD4+/CD8+4+/CD8+1在SAA和CAA，分別占27.3%和63.6%，在正常對(duì)照組僅1例（7.0%）。2活化后的外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化8例SAA和10例CAA T淋巴細(xì)胞激活后CD4+細(xì)胞分別占(35.8±15.9)%和(29.2±11.3)%，正常對(duì)照組為(36.8±8.4)%,三組比較,差異無(wú)顯著性。SAA和CAA CD8+細(xì)胞分別占(35.6&#

5、177;8.6)%和(41.4±8.4)%，正常對(duì)照組為(27.2±8.4)%,SAA、CAA與正常對(duì)照比,CD8+4+/CD8+4+/CD8+1，正常對(duì)照組無(wú)倒置者。3CFU-T亞群變化8例SAA和10例CAA其CD4+/CD8+4+/CD8+1。正常對(duì)照組僅有1例CD4+/CD8+倒置。4CFU-T形成能力11例SAA和11例CAA CFU-T數(shù)為（46.0±25.8)/5×104單個(gè)核細(xì)胞和(40.6±18.2)/5×104單個(gè)核細(xì)胞，正常對(duì)照組為(67.1±16.6)/5×104單個(gè)核細(xì)胞。SAA,CAA與

6、正常對(duì)照組比,P值分別0.05和0.01。5激活后的T淋巴細(xì)胞對(duì)CFU-GM生長(zhǎng)的影響研究的4例CD4+/CD8+<1的CAA活化的T細(xì)胞抑制正常骨髓CFU-GM生長(zhǎng)，抑制率達(dá)(92.1±5.5)%。3名正常對(duì)照活化的T細(xì)胞對(duì)CFU-GM抑制率為(30.2±29.8)%，兩者比較,差異有顯著性(P0.01)。討論18.2%的SAA和18.2%的CAA患者外周血CD4+細(xì)胞絕對(duì)減少，18.2%的CAA患者外周血CD8+細(xì)胞絕對(duì)增加，27.3%的SAA和63.6%的CAA患者CD4+/CD8+1,且CAA患者CD8+細(xì)胞增加及CD4+/CD8+比值顯著減少。再障患者T細(xì)胞

7、活化后CD4+細(xì)胞增殖弱于正常對(duì)照組，而CD8+細(xì)胞增殖顯著高于正常對(duì)照組，揭示部分再障患者TS前體細(xì)胞處于超敏狀態(tài),因此激活后T細(xì)胞亞群的變化更能反映出再障患者免疫功能的異常。再障患者CD4+或CD8+CFU-T亞群與激活的T細(xì)胞亞群行為相同。提示免疫型再障在T淋巴細(xì)胞分化階段就出現(xiàn)異常，優(yōu)勢(shì)促進(jìn)CD8+細(xì)胞的分化和增殖，并抑制CD4+細(xì)胞的分化和增殖。因而TS細(xì)胞直接和間接抑制造血。45.4%的SAA和63.6%的CAA CFU-T數(shù)低于正常對(duì)照組下限，其中2例SAA和5例CAA CD4+/CD8+1，屬免疫型再障，尤其是CAA，TS細(xì)胞抑制了CFU-T增殖和分化。另外4例SAA，2例CA

8、A，其中包括2例無(wú)CFU-T的患者CD4+/CD8+1，屬造血細(xì)胞異常型再障。正常人激活T細(xì)胞對(duì)骨髓CFU-GM生長(zhǎng)的抑制率為21%59%3。本組3名正常人激活T細(xì)胞對(duì)骨髓CFU-GM生長(zhǎng)的抑制率為(30.2±29.8)%，4例CD4+/CD8+1的CAA激活T細(xì)胞對(duì)骨髓CFU-GM生長(zhǎng)的抑制率高達(dá)(92.1±5.5)%，證明CD4+/CD8+1的再障患者其TS細(xì)胞抑制髓系祖細(xì)胞增殖和分化。本研究結(jié)果提示,再障患者外周血T細(xì)胞激活后測(cè)定CD4+和CD8+亞群可提高免疫型再障的診斷率，并為其治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。作者單位:胡國(guó)柱、張進(jìn)、聶榮慶330077南昌,江西省中醫(yī)藥研究所陳璋中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)血液學(xué)研究所文珠江西省醫(yī)