再生障礙性貧血與丙型和戊型肝炎病毒相關(guān)性的研究

1、    再生障礙性貧血與丙型和戊型肝炎病毒相關(guān)性的研究        摘要目的和方法：采用RTPCR和定量酶標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化的測定方法，檢測了先患(丙型或戊型)肝炎后患再生障礙性貧血和先患再生障礙性貧血后患丙型(或戊型)肝炎的陽性率，并與對照組比較。結(jié)果：血清組中HCVRNA的陽性率分別是57.9%和28.9%，二者差異顯著(P0.05)；HEVRNA陽性率分別是24%和25.9%，二者差異不顯著(P0.05)。在單個(gè)核細(xì)胞組中HCVRNA陽性率分別為11.8%和10.5%；HEVR

2、NA的陽性率分別為0%和3.7%；HEVRNA在糞便中的陽性率32%和37%，均無顯著差異。結(jié)論：丙型和戊型肝炎病毒不直接影響造血細(xì)胞的基因表達(dá)，僅使造血微環(huán)境有一定改變，引起患者自身免疫反應(yīng)，對造血有一定的影響。主題詞肝炎病毒，戊型；肝炎病毒，丙型；貧血，再生障礙性 The study on the relativity between hepatitis virus C orE(HCV,HEV) and the occurrance by applying RT/PCR technology to aplastic anemiaGUO Xiu-Zhi,FAN HongTao,LIANG S

3、hi,TAN Guang-Xiao,YANG LiJianDept.of Hematology,Medical College of Jinan University,Guangzhou(510632)Abstract AIM and METHOD:Virus infection may be one of the causes of aplastic anemia(AA).We adopt the RT/PCR technology to examine the positive rate of HCVRNA(or HEVRNA）for the purpose to reveal the r

4、elativity associated with the occurrance of AA.RESULTS:In two serum groups,the positive rates of HCVRNA，those followed by AA(called irrelevant AA),those and AA followed by the hepatitis virus C(called relevant AA),are 57.9% and 28.9% respectively,the difference appears significant(P0.05)，the positiv

5、e rate of HEV-RNA is 24% and 25%,while the difference is not stricking(P0.05).However,in mononuclear cell,the positive rate of HCV-RNA is 11.8% and 10.5%,HEV-RNA is 0% and 3.7% respectively,meanwhile,in stool,HEV-RNA is 32% and 37%,all are not stricking(P0.05).CONCLUSION：The occurrance of AA is not

6、related to virus C and E directly,but virus may activate autoimmune response,which makes influence on micro circulation and interferes with hematopoietic function.MeSHHepatitis E virus;Hepatitis C virus;Anemia,aplastic國內(nèi)丙型和戊型肝炎病毒的感染率較高，尤其是輸血后患丙型肝炎的發(fā)病率有增高的趨勢。本文用RTPCR國際標(biāo)準(zhǔn)化酶標(biāo)的方法檢測再生障礙性貧血(簡稱再障)患者血清和單個(gè)核細(xì)

7、胞提取物中的HCVRNA(hepatitis C virus-RNA)和HEVRNA(hepatitis E virus-RNA)的陽性率，并對丙型(或戊型)肝炎有關(guān)再障和無關(guān)再障及正常人進(jìn)行比較。材料與方法一、病例的選擇：19911997年間臨床已確診1為再生障礙性貧血的患者，分成兩組：(A)組為先患丙肝(或戊肝)后患再障，共34例(或25例)，其中男22例(戊肝18例)；女12例(戊肝7例)；年齡1442歲，平均年齡29.2歲(戊肝28.1歲)。(B)組為先患再障后患丙肝(或戊肝)38例(戊肝27例)，其中男18例，女20例(戊肝男13例，女14例)。正常對照組為25名獻(xiàn)血員，男15例，女

8、10例，平均年齡24.1歲(1930歲)。先患肝炎后患再障，一般為再障發(fā)病前3個(gè)月以上患典型的肝炎癥狀，符合1990年全國病毒性肝炎學(xué)術(shù)會議修訂的標(biāo)準(zhǔn)診斷。二、試劑與儀器：PCR擴(kuò)增儀是美國PE公司生產(chǎn)的CTI型。HCVPCR試劑和酶標(biāo)試劑均由黃道培先生(美國CLL公司)惠贈；HEVPCR試劑盒由華美公司購入。HCVPCR引物F1：5CGACACTCCACCATAGATCAC3。R1：5ATGGAGCACGGTCTACGAGAG3。F2：5TGTGAGGAACTACTGTCTTCA3。R2：5CCTATCAGGCAGTACCACAAG3。HEVPCR引物P1：5GCTATTATGGAGGAGT

9、GTGG3。R1：5CAGGGCCCCAATTCTTCTC3。P2：5GCGTGGATCTTGCAGGCC3。R2：5TTCAACTTCAAGCCACAGCC3。三、樣品處理：取靜脈血3 mL，2 mL加肝素抗凝，用淋巴細(xì)胞分層液按常規(guī)分離單個(gè)核細(xì)胞，取1×105450nm讀OD值，結(jié)果計(jì)算：樣品陰性對照(本底)A4500.25;樣品陽性對照為A4500.41.0；樣品測定值為A450A450本底值0.4以上為陽性。結(jié)果一、血清：1.先患丙肝后患再障的有關(guān)再障組患者酶標(biāo)測定A450平均值0.67(0.450.85)，電泳結(jié)果陽性(HCVPCR陽性)18例，占1834為52.9%；先患

10、再障后患丙肝的無關(guān)再障患者酶標(biāo)A450值平均0.62(0.420.85)，電泳陽性的11例，占1138為28.9%，二者比較差異顯著(P0.01)。2.先患戊肝后患再障的患者中HEVPCR酶標(biāo)測定A450在0.40以上只有6例，平均值0.65(0.450.78)，電泳陽性6例，占625為24%，先患再障后患戊肝的無關(guān)再障患者中HEVPCR酶標(biāo)測定A450為0.4以上7例，平均值0.62（0.440.72)，電泳陽性7例，占727為25.9%，二者比較差異不顯著(P0.05)。二、單個(gè)核細(xì)胞：1.丙肝有關(guān)再障患者酶標(biāo)測定A450平均值0.65（0.410.82)，電泳結(jié)果陽性4例占11.8%；無

11、關(guān)“再障”酶標(biāo)測定A450為0.65(0.410.79)，電泳陽性4例，占10.5%，二者相比較差異不顯著(P0.5)。2.戊肝“有關(guān)”再障患者酶標(biāo)測定A450值平均0.38(0.250.40)，電泳27例均為陰性，即0%。戊肝無關(guān)再障患者酶標(biāo)測定A450平均值為0.47(0.20.57)，電泳陽性僅1例，占3.7%。二者比較差異不顯著。    Fig 1RTPCR electrophoresis result of HCVRNALane 1：Positive control of MNC HCVRNALane 2：Positive control of

12、 serum HCVRNALane 3,7,8：Positive samples of MNC HCVRNALane 4，5，6：Positive samples of serum HCVRNALane 9,10：Negative control of MNC HCVRNALane 11,12：Negative control of serum HCVRNA1丙型肝炎病毒RTPCR電泳結(jié)果    Fig 2RTPCR electrophoresis result of HEVRNALane 1：Positive control of MNC HEVRNA

13、Lane 2：Positive control of serum HEV-RNALane 3，8：Positive samples of MNC HEVRNALane 4，5，6：Positive samples of serum HEVRNALane 9,10：Negative control of MCN HEVRNALane 11：Negative control of serum HEVRNA表1RTPCR檢測結(jié)果Tab 1RTPCR detection resultGroupnSerumMNCPositivecasesPostiverate(%)PositivecasesPostiv

14、erate(%)AA relatedto hepatitis B341852.9411.8AA unrelatedto hepatitis B381128.9410.5AA relatedto hepatitis E25624.000AA unrelatedto hepatitis E27725.913.7     AA：aplastic anemia 3.糞便中檢查結(jié)果：戊肝有關(guān)再障和無關(guān)再障的陽性率(HEVPCR）分別為32%和37%。二者無顯著差異(P0.5)。討論再生障礙性貧血(簡稱再障)的病因已研究多年，至今尚不十分清楚。葉子青等研究登革熱病毒

15、對骨髓造血有一定的抑制作用2。郭秀枝等用丙型肝炎患者的血清加入正常人的細(xì)胞培養(yǎng)中，觀察到對正常淋巴細(xì)胞生長有一定抑制作用。不僅集落數(shù)量少，且集落小3。說明病毒感染對造血細(xì)胞生長有一定的影響。用PCR的方法檢測“乙型肝炎病毒與再障的相關(guān)性”結(jié)果說明：乙型肝炎病毒對造血有直接影響作用，其病毒DNA可整合在單個(gè)核細(xì)胞DNA上，抑制造血細(xì)胞生長。用RTPCR的方法檢測丙肝和戊肝有關(guān)再障和無關(guān)再障，在血清中丙肝有關(guān)再障陽性率52.9%，無關(guān)再障28.9%，二者差異顯著(P0.01)。而戊肝有關(guān)和無關(guān)再障二者間差異不顯著。在單個(gè)核細(xì)胞中，無論是丙肝或是戊肝的有關(guān)再障和無關(guān)再障之間均無顯著差異。顧長海等與Read等認(rèn)為丙型肝炎病毒致病作用是細(xì)胞免疫和抗體依賴性細(xì)胞毒(ADCC)性損害，這種免疫損害反應(yīng)不僅能損害造血組織，且抑制造血功能4，5。由于病毒的感染，會使單核巨噬細(xì)胞功能紊亂和成熟障礙。白細(xì)胞介素I(ILI）來源于激活的巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等，引起ILI功能失調(diào)，導(dǎo)致成纖