丹參酮ⅡA對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制

1、丹參酮A對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制         09-09-07 11:15:00     編輯：studa20                  作者：李浩，劉開(kāi)祥，俸軍林，曾愛(ài)源，唐永剛【摘要】  目的探討丹參酮A（Tan A）對(duì)缺血再灌注損傷大鼠保護(hù)作用及對(duì)額頂部皮質(zhì)中性粒細(xì)胞

2、浸潤(rùn)、自由基含量、能量代謝的影響。方法將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、Tan A低劑量治療組和Tan A高劑量治療組，線栓法建立局灶性腦缺血再灌注模型。Tan A高、低劑量治療組于術(shù)前連續(xù)灌胃給藥3 d，1次/d。用生化法觀察缺血90 min再灌注24 h大鼠額頂部皮質(zhì)髓過(guò)氧化物酶（MPO）活性、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）含量、三磷酸腺苷（ATP）含量及腦含水量變化，并進(jìn)行2，3，5三苯基氯化四氮唑（TTC）染色檢測(cè)腦梗塞體積。結(jié)果Tan A治療組腦梗塞體積較缺血再灌注組減小，高、低劑量組之間差異亦具有顯著性（P<0.05）；與缺血再灌注組比較，Tan A治療組顯著

3、降低MPO活性、MDA含量，增加SOD 、ATP含量，降低腦組織含水量，高、低劑量組之間差異亦具有顯著性（P<0.05）。結(jié)論Tan A對(duì)缺血再灌注腦損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減輕缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)，減輕氧化性損傷和改善能量代謝有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  缺血再灌注； 髓過(guò)氧化物酶； 自由基； 三磷酸腺苷； 丹參酮Abstract：ObjectiveTo study the effect of Tanshinone A (Tan A)  on neutrophils infiltration and the contents of free radical and

4、ATP in ischemic frontal and parietal cortex of cerebral ischemia reperfusion（I/R） rats.MethodsIn this experiment, rats were randomly divided into 4 groups, namely sham operated group, I/R group,low dose Tan A treated group and high  dose Tan A treated group. The focal middle cerebral artery occ

5、lusion(MCAO) model was made by suture-occluded method.Rats were pretreated with Tan A ig for 3d,respectively. After 90min MCAO following 24h of reperfusion, the MPO activity, the contents of SOD and MDA in ischemic frontal and parietal cortex were investigated. TTC staining was used to calculate the

6、 cerebral infarct volume.ResultsCompared with I/R group,cerebral infarction volume in low dose Tan A treated group and high  dose Tan A treated group decreased in a dose-dependent manner (all P<0.05). Compared with I/R group, low and high dose Tan A treated groups dose-dependently reduced MP

7、O activity,the content of MDA and brain water content, increased the activity of SOD and the content of ATP. ConclusionTan A may  aueviate cerebral ischemia-reperfusion injury by decreasing the inflammation reaction , free radicals and the disbanlance of energy metabolism.Key words：Ischemia-rep

8、erfusion; Myeloperoxidase; Free radical; ATP；Tanshinone A    丹參Salvia miltorrhiza Bge為唇形科多年生草本植物，是我國(guó)傳統(tǒng)具有活血化淤作用的中藥，已被廣泛用于心腦血管疾病的治療，但其作用機(jī)制尚不十分清楚。丹參酮( Tanshinone)是丹參的有效活性組分，其中丹參酮A（Tanshinone A，Tan A） 為丹參酮中含量最高的活性成分。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，研究丹參酮A對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷缺血區(qū)額頂部皮質(zhì)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、自由基含量、能量代謝、腦組織含水量及梗塞體

9、積變化的影響，探討其對(duì)腦再灌注損傷保護(hù)作用機(jī)制。1  材料與方法1.1  藥品與試劑 Tan A由提供上海第一生化藥業(yè)有限公司提供，純度85。髓過(guò)氧化物酶（MPO），丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。TTC購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。1.2  動(dòng)物分組及給藥方法健康Wistar大鼠，雄性，清潔級(jí)，共100只，質(zhì)量（250±30）g（廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）。按隨機(jī)分組原則分成假手術(shù)組（25只）、缺血再灌注組（25只）、Tan A低劑量治療組（25只）及Tan A高劑量治療組（25只）。Ta

10、n低劑量治療組（15 mg/kg）和高劑量治療組（30 mg/kg）均于術(shù)前連續(xù)灌胃給藥3 d，1次/d，假手術(shù)組和缺血再灌注組給予等量的生理鹽水灌胃。第3天給藥后1 h建立缺血90 min再灌注24h動(dòng)物模型。1.3  動(dòng)物模型的建立參照Longa等1的方法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。采用頸外動(dòng)脈插入線栓法，各組均進(jìn)行左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞。線栓采用石蠟線栓。線栓直徑約0.27 mm，插入深度約18 mm，此時(shí)線栓頭位于大腦中動(dòng)脈起始部。缺血90 min時(shí)，抽提線栓實(shí)現(xiàn)再灌注。神經(jīng)功能缺陷評(píng)分：按照 Longa等1評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，各組分別在再灌注24 h進(jìn)行評(píng)分。0分：正常，無(wú)神經(jīng)學(xué)征象

11、；1分：動(dòng)物不能完全神展右前肢；2分：動(dòng)物右側(cè)肢體癱瘓，行走時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，出現(xiàn)追尾現(xiàn)象；3分：動(dòng)物行走向右側(cè)跌倒，或動(dòng)物不能站立或動(dòng)物打滾；4分：無(wú)自發(fā)活動(dòng)，有意識(shí)障礙。神經(jīng)功能缺陷評(píng)分在13分為模型成功。1.4 MPO活性的測(cè)定 再灌注24h，將大鼠開(kāi)顱取腦，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左側(cè)距離嗅球尖端711 mm之間的額頂部皮質(zhì)，以試劑盒提供的勻漿介質(zhì)制成腦組織勻漿。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟要求操作，計(jì)算出MPO活力單位。1.5 MDA和SOD的測(cè)定再灌注24h，將大鼠開(kāi)顱取腦，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左側(cè)距離嗅球尖端711 mm之間的額頂部皮質(zhì)，以試劑盒提供的勻漿介質(zhì)

12、制成腦組織勻漿（步驟和方法同上）。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟要求操作，計(jì)算出MDA和SOD含量。1.6  三磷酸腺苷（ATP）含量測(cè)定再灌注24 h，將大鼠開(kāi)顱取腦，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左側(cè)距離嗅球尖端711 mm之間的額頂部皮質(zhì)，迅速加入乙腈，混勻，冰浴離心脫蛋白，離心后取上清液水系濾膜過(guò)濾后，-86保存。用高效液相測(cè)定ATP含量。1.7  腦含水量檢測(cè)再灌注24 h，各組隨機(jī)取5只大鼠，斷頭取腦后，快速稱取左右大腦半球濕重，置110115烤箱內(nèi)烤至恒重，再分別稱其干重，用(濕重- 干重) /濕重的百分比，作為衡量腦含水量指標(biāo)。1.8 TTC染色再灌注24h，將各組另外5只大鼠深麻后開(kāi)顱取腦。將鼠腦置于4冰箱20min后，將其切