江蘇省新沂市棋盤中學(xué)高二生物選修一《1.1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)》教案一

1、II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼高二年級第二學(xué)期生物學(xué)科總第 2 課時(shí)教案課題：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)使用時(shí)間：主備人：教學(xué)目標(biāo)：1、知識與技能：了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線 法等基本操作技術(shù)2、過程與方法：分析實(shí)驗(yàn)思路的確定和形成的原因，分析實(shí)驗(yàn)流程，對比前面的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)， 歸納共性，分析差異，增加印象3、情感態(tài)度價(jià)值觀：形成勇于實(shí)踐、嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度和科學(xué)精神教學(xué)重點(diǎn)無菌技術(shù)的操作教學(xué)難點(diǎn)無菌技術(shù)的操作教學(xué)方法啟發(fā)式教學(xué)教具使用多媒體課件，高壓蒸汽滅菌鍋及有關(guān)設(shè)備共案部分個(gè)案部分教學(xué) 過程教師主導(dǎo)活動(dòng)學(xué)生主體活動(dòng)課刖：咼壓烝汽

2、火菌鍋及有關(guān)設(shè)備的 準(zhǔn)備，布置學(xué)生預(yù)習(xí)。及時(shí)了解學(xué)生的預(yù)習(xí)情況，認(rèn) 真準(zhǔn)備課堂教學(xué)內(nèi)容。完成預(yù)習(xí)任務(wù)。精誠凝聚=A_A=成就夢想課中：引入：在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 中，都利用了微生物的發(fā)酵作 用，其中的微生物來自于制作 過程中的自然感染。而在工業(yè) 化生產(chǎn)中，為了提高發(fā)酵的質(zhì) 量，需要獲得優(yōu)良菌種，并保 持發(fā)酵菌種的純度。這就要涉 及到微生物的培養(yǎng)、分離、鑒 別等基本技術(shù)?，F(xiàn)在我們開始 學(xué)習(xí)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用。根據(jù)學(xué)生預(yù)習(xí)情況引導(dǎo)學(xué)生合 作探究，成果展示。重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)咼壓蒸汽火菌鍋使用 的注意事項(xiàng)及安全問題。教師進(jìn)行實(shí)驗(yàn)演示，并指導(dǎo)學(xué) 生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3結(jié)果分析與評價(jià)3.1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基 的作用是對照，

3、若有菌落形成， 說明培養(yǎng)基火菌不徹底。3.2在肉湯培養(yǎng)基上， 大腸桿菌菌落呈白色，為圓形， 光滑有光澤，邊緣整齊。3.3培養(yǎng)12h和24h后 的菌落大小不同（相同、不同）；學(xué)生展示：1.1培養(yǎng)基的種類 培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用：1.2培養(yǎng)基的化學(xué)成分從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來 看，培養(yǎng)基中為什么都含有哪些 營養(yǎng)成分？1.3培養(yǎng)基應(yīng)滿足微生物生 長要求。牛肉膏和蛋白胨主要為微生 物提供哪些營養(yǎng)物質(zhì)?；顒?dòng)2:閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列冋題：1.4獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵 是什么？。1.5無菌技術(shù)包括哪些？1.6消毒和火菌區(qū)別？1.7常用的消毒和滅菌方法 分別有哪些？咼壓蒸汽火菌鍋使用注意事 項(xiàng)有哪些？培養(yǎng)

4、基的配制原則有哪些？II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼菌落分布位置相同（相同、不 同）。原因是時(shí)間越長， 菌落中 細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大； 菌洛的位置不動(dòng)，但菌洛數(shù)增 多。思考1在某培養(yǎng)基上出 現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原 因有培養(yǎng)基火菌不徹底或雜菌 感染等。思考2頻繁使用的菌種 利用臨時(shí)保藏法保存，長期保 存菌種的方法是甘油管藏法。 前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng) 后，保存在4 C冰箱中，每36個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保 存時(shí)間較短，容易發(fā)生污染和 變異；后者將菌種與無菌體積 等量混合后保存在一20C冷凍 箱中。安排學(xué)生進(jìn)行課堂檢測并進(jìn)行 講評和總結(jié)。完成課堂檢測。

5、（見學(xué)案）課后：布置課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提 綱。 （見導(dǎo)學(xué)案）學(xué)生元成課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù) 習(xí)。板書 設(shè)計(jì)微一培養(yǎng)基 生-物的一實(shí)無菌技術(shù)配制培養(yǎng)基的原則培養(yǎng)基的配制卜*計(jì)算T稱量T溶化T調(diào)pHT分裝T加棉塞T火菌T倒平板1配制培養(yǎng)基的方法驗(yàn)室平板劃線法培純化大腸桿菌養(yǎng)1稀釋涂布法系列稀釋 平板涂布教學(xué)札記三、其他補(bǔ)充教學(xué)資料（各位教師根據(jù)各班教學(xué)特點(diǎn)選擇補(bǔ)充資料，可另附紙）1.基礎(chǔ)知識1.1培養(yǎng)基的種類包括固 培養(yǎng)基和液體 培思考1瓊脂是從紅藻中提取的多糖，在配制培養(yǎng)基中用作為凝固劑【補(bǔ)充】培的類型及其應(yīng)用：標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用J物理性|質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離，鑒定,計(jì)數(shù)孑

6、i體培養(yǎng)基亮心燈/（AVA）加入瓊脂較少生 一 1 i i菌種保存液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定精誠凝聚=A_A=成就夢想天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生，產(chǎn)降低成本II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼1. 2培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水、無機(jī)鹽、碳源、氮源四類營養(yǎng)成分。思考2從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？C、H、0、N、P、S是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的97%以上。【補(bǔ)充】碳源：如CO?、糖類、脂肪酸等有機(jī)物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和

7、分泌物，并提 供能量。氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代 謝物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。1.3培養(yǎng)基除滿足微生物生長的 皿、特殊營養(yǎng)物質(zhì) 和氧氣等要求。 【補(bǔ)充】生長因子：某些微生物正常生長代謝過程中必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機(jī)小 分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等。思考3牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供 理、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。 思考4培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要添加 維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為 酸 性，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將pH調(diào)節(jié)為 中性或微堿性?；顒?dòng)2:閱讀無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：1.4

8、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵 。1.5無菌技術(shù)包括：(1)對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒;(2)將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；(3)為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行;(4)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品 相接觸。1.6比較消毒和滅菌(填表)比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能火菌強(qiáng)烈全部微生物能1思考5無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是防止感染實(shí)驗(yàn)操作者1.7消毒方法：生活經(jīng)常用到的是煮沸 消毒法；(2)對一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法(作簡要介紹

9、);(3)對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑 石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果， 然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒。(4) 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用酒 進(jìn)行消毒；(5) 飲水水源用 氯氣 進(jìn)行消毒。1.8滅菌方法：(1) 接種環(huán)、接種針、試管口等使用 灼燒滅菌法;(2)玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱;(3)培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽 滅菌法，所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 。(4)表面滅菌和空氣滅菌等使用 紫外線 滅菌法，所用器械是 紫外燈。思考6對接種環(huán)滅菌時(shí)要用酒精燈的充分燃燒層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位。思考7利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時(shí)物品不能擺得太擠，

10、目的是避免妨礙熱空氣流通。思考8物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 有利于鍋內(nèi)溫度升高;隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至100k Pa，溫度為121 C，并維持1530 min;最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至二時(shí)打開鍋蓋，其目的是防止 容器中的液體暴沸?！狙a(bǔ)充】培養(yǎng)1目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼2營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比4：1時(shí)，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3:1時(shí)，菌體繁殖

11、受抑制而谷氨酸合成量大增。3pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼高二年級第二學(xué)期生物學(xué)科總第二課時(shí)導(dǎo)學(xué)案課題：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)使用時(shí)間：編制：一、學(xué)習(xí)目標(biāo)：通過本節(jié)課學(xué)習(xí)了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃 線法等基本操作技術(shù)，分析實(shí)驗(yàn)思路的確定和形成的原因，分析實(shí)驗(yàn)流程，對比前面的實(shí)驗(yàn) 設(shè)計(jì)，歸納共性，分析差異，增加印象。二、知識構(gòu)成：1.基礎(chǔ)知識1.1培養(yǎng)基的種類包括 培養(yǎng)基和 _ 培養(yǎng)基等。思考1瓊脂是從紅藻中提取的 _ ，在配制培養(yǎng)基中用作為 _。1.2培養(yǎng)基的化學(xué)成分包

12、括、_ 四類營養(yǎng)成分。思考2從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？1 . 3培養(yǎng)基除滿足微生物生長的 _、_和_ 等要求。思考3牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供 _、_和_ 等營養(yǎng)物質(zhì)。思考4培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要添加 _ ，培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為_，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將pH調(diào)節(jié)為 _。活動(dòng)2:閱讀無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：1.4獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 _。1.5無菌技術(shù)包括：(1)對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 _;(2)將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行；(3)為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 _ 旁進(jìn)行；(4)避免已滅菌處理的材料用具與 _ 相接觸。

13、1.6比較消毒和滅菌(填表)比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒火菌思考5無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是 _1.7消毒方法：生活經(jīng)常用到的是 _消毒法；(2)對一些不耐高溫的液體，則使用 _消毒法；(3)_ 對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑等溶液以增強(qiáng)消毒效果， 然后使用_ 進(jìn)行物理消毒。(4)_實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用進(jìn)行消毒；(5) 飲水水源用 _進(jìn)行消毒。1.8滅菌方法：(1)_ 接種環(huán)、接種針、試管口等使用 滅菌法；(2)_玻璃器皿、 金屬用具等使用 干熱滅菌法，所用器械是_；(3) 培養(yǎng)基、無菌水等使用 高壓蒸汽 _,所用器械是 _。(4)

14、_ 表面滅菌和空氣滅菌等使用 _滅菌法， 所用器械是 _。思考6對接種環(huán)滅菌時(shí)要用酒精燈的 _層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位。思考7利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時(shí)物品不能擺得太擠，目的是_ 。思考8物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是_;隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 _ ，溫度為 _ ，并精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼維持_min;最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 _時(shí)打開鍋蓋，其目的是防止_三、學(xué)法和自檢：1要將從土壤中提取的自生固氮菌與其他的細(xì)菌分離出來，應(yīng)將它們接種在A.加入氮源和殺菌劑的培養(yǎng)

15、基上B不加入氮源和不加殺菌劑的培養(yǎng)基上C.加入氮源，不加殺菌劑的培養(yǎng)基上D不含氮源和殺菌劑的培養(yǎng)基上II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼課題_四、達(dá)標(biāo)檢測1不可能作為異養(yǎng)微生物碳源的是A.牛肉膏B含碳有機(jī)物C石油D含碳無機(jī)物2根瘤菌能利用的營養(yǎng)物質(zhì)的組別是4自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是C.酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌D.硝化細(xì)菌、根瘤菌五、學(xué)習(xí)小結(jié)和課外作業(yè)：1、學(xué)習(xí)小結(jié)：2、上本作業(yè)：簡述培養(yǎng)基的主要成分、生理功能和類型。3、課本或資料選題：1、 收集生活中與微生物有關(guān)的實(shí)例，并通過所學(xué)知識對其進(jìn)行解釋。2、 我們打針輸液時(shí)，首先要用酒精擦拭針刺處，為什

16、么？4、補(bǔ)充練習(xí):A.甲、乙、丙是二種微生物，下表I、n、川是用來培養(yǎng)微生物的二種培養(yǎng)基。甲、 乙、丙都能在川種正常生長繁殖；甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在n中 正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（）粉狀硫1CgK2HPO4gFeSOC.5g蔗糖10g(NH)2SO0.4gH2O100mlMgSO9.25gCaCl20.5gI+-+n+-+生物硝化細(xì)菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒狀桿菌能源氧化NH3N2的固定分解糖類等有機(jī)物光能碳源CC2糖類糖類糖類氮源NH3N2NH+、NO-尿素代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需羊 J 型異養(yǎng)兼性厭氧型自養(yǎng)需氧型C.無機(jī)鹽D特殊營養(yǎng)物質(zhì)5下表是有關(guān)4

17、種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的概述。其中正確的是（）A根瘤菌、谷氨酸棒狀桿菌B硝化細(xì)菌、酵母菌A.NH3, (CHO),NaCI BN2, (CHO),CaCl2C.銨鹽，CO,NaCI3.配制培養(yǎng)基的敘述中正確的是A制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂C.培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源D. NO,CO,CaCl2B加入青霉素可得到放線菌D發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基A.碳源B.氮源II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼出+A、 甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B、 甲、乙、丙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物c、甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物D、甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、

18、丙是自養(yǎng)微生物B.微生物（除病毒外）需要從外界吸收營養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。F列有關(guān)微生物營養(yǎng)的說法正確的是A.乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼B.微生物生長中不可缺少的一些微量的無機(jī)物稱為生長因子C.培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對微生物的增殖越有利D.生長因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長因子的能力往往不足。高二年級第二學(xué)期生物學(xué)科總第三課時(shí)教案課題_使用時(shí)間：主備人：教學(xué)目標(biāo)：1、知識與技能：鞏固微生物的培養(yǎng)操作 平板劃線法等基本操作技術(shù)2、過程與方法：通過練習(xí)微生物的接種方法掌握微生物的

19、實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)3、情感態(tài)度價(jià)值觀：培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手能力和熱愛生物科學(xué)。教學(xué)重點(diǎn)：微生物的接種方法平板劃線法等基本操作技術(shù)教學(xué)難點(diǎn)平板劃線法等基本操作技術(shù)教學(xué)方法實(shí)驗(yàn)法、自學(xué)指導(dǎo)。教具使用接種材料等實(shí)驗(yàn)儀器。共案部分個(gè)案部分教學(xué) 過程教師主導(dǎo)活動(dòng)學(xué)生主體活動(dòng)課刖：接種材料及有關(guān)設(shè)備的準(zhǔn)備，布置學(xué)生預(yù)習(xí)。及時(shí)了解學(xué)生的預(yù)習(xí)情況，認(rèn) 真準(zhǔn)備課堂教學(xué)內(nèi)容。完成預(yù)習(xí)任務(wù)。II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼課中： 活動(dòng)一：思考熟悉。1什么叫接種？接種的方法有 哪些？常用的接種工具有哪些？2.接種過程中，酒精燈有哪些 用途？接種時(shí)應(yīng)注意哪些問題？提示：接種前后兩次用來灼 燒試管口，防止

20、空氣中的微生 物污染管口并浸入試管；接 種前后兩次用來灼燒接種環(huán)；為接種操作提供一個(gè)無菌區(qū) 域，避免雜菌污染。3微生物培養(yǎng)的操作過程中， 為防雜菌，應(yīng)采取哪些措施？提示：培養(yǎng)基要咼壓咼溫火 菌；接種環(huán)要用火焰灼燒來 滅菌；雙手應(yīng)用75%酒精消 毒； 整個(gè)接種過程要在火焰旁邊的無菌區(qū)進(jìn)行。4.接種操作為什么一定要在火 焰旁邊進(jìn)行？提示：空氣中存在大量的微生物，而接種燈 的火焰旁能形成一個(gè)無菌區(qū)學(xué)生根據(jù)導(dǎo)學(xué)案展示：實(shí)驗(yàn)操作的過程包括哪幾 步？1微生物接種的最常用方法 有哪些？2平板劃線法的操作步驟哪 些？3稀釋涂布平板法的過程 及系列稀釋操作步驟包括哪些？學(xué)生活動(dòng)安排：熟悉基本實(shí)驗(yàn)過程。動(dòng)手進(jìn)行試

21、驗(yàn)操作。課堂檢測：見學(xué)案精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼域，在這里操作，可以避免雜 菌污染。疑難解析1.接種時(shí)注意事項(xiàng)：(1)對接種所用的器具及用品要 徹底消毒火菌，在腦子里要建 立起“有菌”的觀念。(2)接種始終都要在無菌條件下 進(jìn)行(酒精燈火焰附近構(gòu)成無 菌區(qū))。不能隨意說話、談笑。(3)接種畫線時(shí)要注意：畫線的方向應(yīng)該從里往外。線條要細(xì)且密。不要重復(fù)畫線。2.無菌技術(shù)：(1)概念：(2)消毒與火菌:接種與培養(yǎng)大腸桿菌在第 一個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用學(xué)生配 制好的培養(yǎng)基進(jìn)行接種實(shí)驗(yàn)。教師可用課件配合本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)的演示， 幫助學(xué)生理解接 種的無菌操作過程，也可以

22、請 學(xué)生演示，大家討論操作的規(guī) 范性。尤其要注意接種過程的 無菌操作。課后：布置課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提 綱。完成課外作業(yè)及下一節(jié)預(yù)習(xí)提 綱。板書 設(shè)計(jì)教學(xué) 札記三、其他補(bǔ)充教學(xué)資料(各位教師根據(jù)各班教學(xué)特點(diǎn)選擇補(bǔ)充資料，可另附紙)精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼2.實(shí)驗(yàn)操作2. 1計(jì)算：根據(jù)配方比例，計(jì)算100mL培養(yǎng)基各成分用量。2.2稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。 稱取牛肉膏和蛋 白胨時(shí)動(dòng)作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空氣中 水分。2.3溶化：加水加熱熔化牛肉膏；加入蛋 白胨和氯化鈉繼續(xù)加熱；加入瓊脂；用蒸餾水 定容到100mL。整個(gè)過程不斷用玻棒攪拌，目的是 防止

23、瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。2. 4調(diào)pH:用1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至偏 堿性。2.5滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中， 加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；所用培養(yǎng)皿用 報(bào)紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌。2.6倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50 C左右時(shí)在 酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。其過程是：1在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；2右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火 焰；3左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基 倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。4待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。思考1錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是消 _ 滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培養(yǎng)基。1思考2倒平板的目的是防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的

24、水滴落到培養(yǎng)基表面。思考3若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？ 不能?？諝庵须s菌會在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。思考4配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染。思考5試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。2. 7接種2.7.1微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法，另外還有穿刺接種和斜面 _ 接種等。2.7.2平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種 逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。其操作步驟是：1將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅。2在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。3將菌種試

25、管口通過火焰達(dá)到消滅試管口雜菌的目的。4將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種。5將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。6將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)伸入平板內(nèi)劃35條平行線，蓋上皿蓋，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。7灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)上述過程，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線相連。8將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。思考6取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物；除第一次劃線外，其余 劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻_后進(jìn)行，其目的是防止高溫殺死菌種；最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細(xì)菌污染環(huán)境和

26、操作者。思考7在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是獲得由單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌 落。2.7.3稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布 到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。_2.7.4系列稀釋操作：1取盛有9mL水的無菌試管6支，編號101、102、103、104、105、106。II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼2用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號為101試管中，并吹打3次，使之混勻。3從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。依此 類推。思考8操

27、作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處。整個(gè)操作過程中使用了1支移液管。3實(shí)驗(yàn)操作一一大腸桿菌的培養(yǎng)與純化：(1)平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子 細(xì)胞群體，這就是菌落(colo ny)。1平板劃線操作：a.將接種環(huán)放在火焰上燃燒，直到接種環(huán)燒紅。b.在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。c.將試管口通過火焰。d.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。e.將試管口通過火焰，并塞上棉塞。f.左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上 皿

28、蓋，注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。InnL IvnL ImL ImL InL IrrLg.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在 三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。h.將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2問題討論：a.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要 灼燒接種環(huán)嗎？為什么？提示：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線 前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán) 上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使

29、每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目 逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免 細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。b.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？提示：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。b.在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？提示： 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的 數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。(2)稀釋平板法和涂抹平板法：精誠凝聚=A_A=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分

30、別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn) 行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面 形成單個(gè)的菌落。1稀釋平板操作（如下圖）：a.將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按10叫10叫的順序編號。b用無菌移液管吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。取另一支無菌移液管，用手指輕壓 移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。c從10倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入10。倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。 依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。提示：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12 cm處。2涂抹平板操作：a.將涂布器末端

31、浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b操作中一定要注意防火！不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒 精。培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放人37C恒溫箱中，培養(yǎng)12 h和24 h,分析觀察并記錄結(jié)果。2期少H繭液不韜過OJmU話加到培養(yǎng)恤徘柑止培報(bào)率去血.仗簾時(shí)訶戦動(dòng)培諒皿ft按巧均勻 a4用涂II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(AvA)照亮人生 .鑼微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)2導(dǎo)學(xué)案使用時(shí)間：_主備人：_一、 學(xué)習(xí)目標(biāo)：通過練習(xí)微生物的接種方法掌握微生物的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)二、 知識構(gòu)成：1通

32、常把在 _ 條件下將微生物接入 _ 的操 作過程叫_是微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵。2._常用的接種工具有 _ 、和三種。3._常用的接種方法有 _ 、和三種。4衛(wèi)生學(xué)上常以 _ 和_ 作為飲用水、牛奶、飲料和食品的衛(wèi)生鑒定指標(biāo)。生活飲用水 中_ 每1 L不超過_ 個(gè)。實(shí)驗(yàn)操作的過程包括哪幾步？動(dòng)手完成實(shí)驗(yàn)操作1微生物接種的最常用方法有哪些？2平板劃線法的操作步驟哪些？3稀釋涂布平板法的過程及系列稀釋操作步驟包括哪些？【問題討論】 涂抹平板法的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與稀釋平板的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？2未接種的培養(yǎng)基表面有茵落生長，說明了什么？3在接種大腸桿菌

33、的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了獨(dú)立菌落？三、學(xué)法和自檢：1、培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿，接種環(huán)，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣，牛奶所采用的滅菌，消毒方法依次是（）化學(xué)消毒 灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法A.B.C.D.2、 下列操作與滅菌無關(guān)的是（）A.接種前用火焰灼燒接種環(huán)B.接種前用酒精擦拭雙手C.將平板倒置，放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.接種在酒精燈的火焰旁完成3、 有關(guān)稀釋平板法與涂抹平板法，敘述錯(cuò)誤的是（）A.首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C.適宜條件下培養(yǎng)D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落4根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理和材料用具，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)選擇運(yùn)載體質(zhì)粒，明確質(zhì)粒的抗菌素基因所抗的抗菌素類別。（1）實(shí)驗(yàn)原理：作為運(yùn)載體的質(zhì)粒，須有標(biāo)記基因，這一標(biāo)記基因是抗菌素抗性基因。 故凡有抗菌素抗性的細(xì)菌，其質(zhì)粒才可用作運(yùn)載體。（2）材料用具：青霉素、四環(huán)素的10萬單位溶液，菌種試管，滅菌的含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，酒精燈，接種環(huán)，一次性注射器，蒸餾水，恒溫箱。（3）方法步驟：第一步：取3個(gè)含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿并標(biāo)為1、2、3號，在酒精燈旁，用3支注射器分別向3個(gè)培養(yǎng)皿中注入1 mL蒸餾水、青霉素液、四環(huán)素液，并使之分布在整個(gè)培養(yǎng)基表面。II精誠凝聚7=成就夢想 鑼點(diǎn)亮心燈/(Av