鹽脅迫下外源NO供體對白皮黃瓜種子萌發(fā)的影響

1、鹽脅迫下外源NO供體對白皮黃瓜種子萌發(fā)的影響、尸、 亠刖言人均土地資源和淡水的日益缺乏制約著經(jīng)濟和社會的可持續(xù)發(fā) 展,全球約33%的農(nóng)業(yè)用地遭受著鹽堿化的影響 ,其中Na和Cl 是最普遍的鹽害離子耕地鹽堿化降低了農(nóng)作物的產(chǎn)量，增加了對灌 溉裝置 的需求，消耗了更多的人力、物力和財力.尋找抗鹽或耐鹽性 作物，利用其本身的抗鹽特性成為解決這一問題的重要出路之一 另一方面，也可通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)把抗鹽植物的耐鹽關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)入作物中 提高作物的抗鹽性.對于擁有18000km漫長海岸線和20779km沿 海灘涂而承受著巨大人口壓力的中國來說，發(fā)展海水灌 溉農(nóng)業(yè)，其經(jīng) 濟、社會和生態(tài)意義是可想而知的多年來的農(nóng)作

2、物灌溉，消耗了大量 寶貴的淡水，而隨著工業(yè)社會的迅猛發(fā)展，淡水用量猛增且受到污染 程度日漸加重，淡水成了制約城市發(fā)展和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)豐收的瓶頸因素,這一點在沿海地區(qū)表現(xiàn)更加明顯通過對植物抗鹽機制的研究，采取合 適的技術(shù)增強植物抗鹽性，發(fā)展海水灌溉農(nóng)業(yè)，經(jīng)濟價值是難以估價 的近年來，一氧化氮(NO)作為信號分子的研究備受關(guān)注.已證明， NO在植物生長、發(fā)育、衰老、細胞程序一、實驗?zāi)康?、探究鹽脅迫下，不同濃度的 SNP溶液處理白皮黃瓜種子對 其萌發(fā)的影響。2、測定a-淀粉酶的變化及萌發(fā)過程中吸水情況。7 / 63、測定處理后種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢。4、細胞膜透性的測定（以相對電導(dǎo)率表示）。二、材料、儀器

3、白黃瓜種子、0.1%的氯化汞溶液、蒸餾水、SNP溶液培養(yǎng)皿、 帶塞的三角瓶、濾紙、培養(yǎng)箱。三、實驗過程 一 、處理1、取飽滿、無病害的白皮黃瓜種子，用0.1%的氯化汞溶液消毒 10min,再用蒸餾水沖洗干凈在鹽濃度為 250mmol/L（參考王春林等鹽 脅迫對甜瓜種子萌發(fā)的影響）的培養(yǎng)皿中 28攝氏度暗箱浸泡所需的 黃瓜種子（參考王春林等鹽脅迫對甜瓜種子萌發(fā)的影響）。2、設(shè)0mmol/L（只加蒸餾水）、0.01mmol/L、0.1mmol/L、1.0mmol/L 的SNP溶液濃度梯度（張秀瑋，董元杰等外源 NO對不同作物種子萌 發(fā)、幼苗生長及抗氧化酶活性的影響）。二 、實驗過程實驗分為三部分。

4、第一，測定種子萌發(fā)是的吸水率和發(fā)芽率發(fā)芽 勢（需4500粒種子）。具體過程是取用鹽濃度浸泡過的飽滿、無病害 的白皮黃瓜種子，放入有不同SNP濃度的培養(yǎng)皿，每皿100粒，浸泡 6h、8h、12h、15h、24h，3次重復(fù)（參考參考運城生命科學(xué)院王霞 的研究）。晾干，在鋪有兩層濾紙的培養(yǎng)皿中保濕 25恒溫培養(yǎng)。早晚 澆SNP溶液10mL（張秀瑋，董元杰等外源NO對不同作物種子萌發(fā)、 幼苗生長及抗氧化酶活性的影響），保濕，發(fā)現(xiàn)有霉變種子，及時剔除。自培養(yǎng)之日起測種子吸水率并記錄，選取自然風(fēng)干的種子、處理后1、2、4、8、12、24、48h的種子各50粒稱重（精度為0. 001 g 的 電子秤）,3次

5、重復(fù)。種子的吸水率按下式計算：W （% ） = （W1 - W2 ） /W2 * 100式中:W1為50粒種子鮮質(zhì)量，W2為50粒種子自然風(fēng)干質(zhì) 量（參考王春林等鹽脅迫對甜瓜種子萌發(fā)的影響）。3-5天后發(fā)芽。自發(fā)芽之日起，每天記錄發(fā)芽種子粒數(shù)（胚根突出種皮視為發(fā)芽）。計 算發(fā)芽率（以浸種后放入培養(yǎng)皿的次日開始，每天記錄發(fā)芽粒數(shù)，至 萌發(fā)結(jié)束即第7 d。發(fā)芽率二發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)* 100% ）和發(fā) 芽指數(shù)（發(fā)芽指數(shù)二（Gt /D t）, 其中，Gt為t日內(nèi)的發(fā)芽數(shù)，D t為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)）。表1 SNP對白皮黃瓜種子萌發(fā)的影響SNP發(fā)芽率%發(fā)芽勢%發(fā)芽指數(shù)（mmol/L）SNP溶液處理不同

6、時間（h）68121524681215246812152400.010.11.0第二，測定a-淀粉酶（需2250粒種子）（1）測定原理測定淀粉酶活力的方法主要根據(jù)支鏈淀粉或可溶性淀粉經(jīng)酶分 解后還原力提高；淀粉酶分解后碘染色性質(zhì)的改變。（2）儀器設(shè)備分光光度計、pH計、勻漿器、恒溫水浴等。（3）材料和試劑1、 材料含淀粉的植物種子。2、試劑 、50mmol/L Tris-HCI 緩沖液（pH=7.0）內(nèi)含3mmol/L氯化鈣和 4mmol/L NaCI。 、B-極限糊精1g馬鈴薯淀粉加入2ml蒸餾水調(diào)勻，傾入30ml 沸水中，煮沸并攪拌2min,冷卻至室溫。另取50mlB-淀粉酶（不帶a- 淀

7、粉酶）加5ml蒸餾水溶解。加入上述淀粉溶液，調(diào)至 pH=4.5，然后 定容至50ml加入甲苯10滴，搖勻，再30攝氏度下放置24h,放入冰箱保 存，1-2周內(nèi)可用。用時取出回升到室溫。 、0.3gKI溶于少許水中，加0.1g碘使溶解定容到100ml。 、50mmol（pH3.6） 內(nèi)含 1mmol/L EDTA。 、1%的馬鈴薯淀粉液稱1g3,5-二硝基楊酸，20ml2NNaOH,50m水，30g酒石酸鉀鈉，溶解后水定容到100ml。暗中保存， 并防止與二氧化碳接觸。（5）操作方法1、粗酶液制備黃瓜種子在暗30攝氏度下萌發(fā)7天，將子葉分離出來。2、a-淀粉酶的活力測定 0.2ml極限糊精加0.

8、2ml酶液再37攝氏 度保溫5min,加入0.5ml碘-KI溶液是反應(yīng)停止。再加2ml水，然后在 620nn處測定光密度。對照以pH7.0Tris-HCI緩沖液代替酶液。規(guī)定在 620nm引起光密度降低10淀為1個酶活單位。（參考顏啟傳等主編的種子活力測定原理和方法一書）（發(fā)芽后 48小時，測a-淀粉酶， 每隔兩天測一次，總共測3次。參考宋亮等不同化學(xué)試劑處理對甜玉 米種子萌發(fā)及幼苗生長的影響）具體步驟：處理后第三，細胞膜透性的測定（需 2250粒種子）分別取處理后1、2、4、8、12、24、48 h的種子各20粒，小心剝?nèi)シN殼,用蒸餾水沖洗1次，再用去離子水沖洗2次，用濾紙吸干其表 面浮水，

9、裝入小燒杯中，加入15ml去離子水，用真空抽氣泵抽氣30 m in后在室溫下靜置20m in,測定初始電導(dǎo)率Ax,然后在沸水中煮 10 min,冷卻至室溫再測其煮后電導(dǎo)率Bx。以相對電導(dǎo)率表示細胞膜 透性。細胞膜透性（ ） = Ax /Bx * 100 （參考王春林等鹽脅迫對甜 瓜種子萌發(fā)的影響）。參考文獻：1、德州學(xué)院生物系李妍NaCl脅迫對蘇丹草種子萌發(fā)及幼苗 生長的影響。2、王春林 張玉鑫 陳年來NaCl脅迫對甜瓜種子萌發(fā)的影3、衡水學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院崔興國、時麗冉NO供體SNP寸黃芪種子萌發(fā)和幼苗生長的影響4、宋 亮、洪狄俊、葛忠德、 詹生華不同化學(xué)藥劑處理對甜玉米種子萌發(fā)及幼苗生長的影響5、運城學(xué)院生命科學(xué)系王 霞水楊酸、硝普鈉浸種對玉米種 子發(fā)芽率的影響。6、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院張秀瑋，董元杰 *，邱現(xiàn) 奎，王全輝，王艷華，胡國慶外源NO對不同作物種子萌 發(fā)、幼苗生長及抗氧化酶活性的影響。7、生物資源保護與利用湖北省重點實驗室，廈門大學(xué)生命 科學(xué)學(xué)院肖 強、鄭海雷外源NO寸鹽脅迫下小白菜種子萌 發(fā)的影響。&a