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文檔簡介

1、熒光定量檢測HBV DNA與ELISA法測兩對(duì)半相關(guān)性分析福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科(350001) 陳 鶯 陳建森 【摘 要】 目的 探討熒光定量檢測HBV DNA-9乙肝兩對(duì)半之間的關(guān)系及臨床意義。方法 運(yùn)用熒光定量PCR(FQPCR)與ELISA兩種方法同時(shí)檢測242份血清,對(duì)其結(jié)果加以對(duì)比分析。結(jié)果 51例乙肝大三陽患者血清HBV DNA檢出率100(5151);60例乙肝小三陽患者血清HBV DNA檢出率517(3160);9例HBsAg(+)、抗一HBs(+)、HBeAg(+)血清HBV DNA檢出率100(99);5例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗一HBe(+)血清H

2、BV DNA檢出率100(55);11例抗一HBs(+)及31例抗一HBs(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)血清HBV DNA檢出率0;38例抗一HBs(+)、抗一HBc(+)患者血清HBV DNA檢出率79;17例HBsAg(+)、抗一HBc(+)血清HBV DNA檢出率588;20例抗一HBc(+)血清HBV DNA檢出率10。結(jié)論 熒光定量PCR檢測HBV DNA具有準(zhǔn)確、靈敏、特異等優(yōu)點(diǎn),對(duì)干乙肝患者臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。 【關(guān)鍵詞】 熒光定量PCR;HBV DNA;ELISA;乙肝兩對(duì)半 【中圖分類號(hào)】R5751 【獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1002

3、2600(2003)020118一02乙肝兩對(duì)半與熒光定量檢測HBV DNA是目前臨床分析和判斷乙肝患者病情及療效預(yù)后的主要依據(jù)。為了解兩種方法之間的關(guān)系,我們應(yīng)用熒光定量PCR與ELISA法對(duì)我院242份血清進(jìn)行檢測,現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法11 研究對(duì)象:系2002年9月11月我院門診及住院病人同時(shí)檢測乙肝兩對(duì)半和HBV DNA者。12實(shí)驗(yàn)方法:熒光定量PCR檢測:乙肝病毒試劑盒購自深圳匹基生物股份有限公司,采用羅氏公司lightcycler熒光PCR儀。ELISA法測乙肝兩對(duì)半診斷試劑由英科廈門新創(chuàng)科技有限公司提供,檢測HBsAg、抗一HBs、HBeAg、抗一HBe、抗一HBc 5個(gè)項(xiàng)目

4、,操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果OD值檢測采用美國寶特EL311s全自動(dòng)酶標(biāo)儀。2結(jié)果 見附表。3 討論 51例乙肝大三陽患者血清檢測HBV DNA皆陽性,說明大三陽患者在熒光定量PCR法與ELISA兩種測定方法上有良好的一致性,均表明體內(nèi)HBV有活動(dòng)性復(fù)制L1。60例乙肝小三陽患者血清中有31例檢出HBV DNA,陽性率517,說明小三陽患者只有半數(shù)左右人群體內(nèi)含有HBV DNA。本結(jié)果同時(shí)說明抗一HBe存在并不表示患者體內(nèi)沒有病毒復(fù)制,一般認(rèn)為抗一HBe持續(xù)陽性提示HBV復(fù)制處于較低水平或HBV可能已和宿主DNA整合并潛伏下來L2。所以小三陽患者體內(nèi)是否有活動(dòng)性復(fù)制及其水平如何,單靠兩對(duì)

5、半測定是無法準(zhǔn)確判斷,而必須進(jìn)行HBV DNA定量檢測。9例HBsAg(+)、抗一HBs(+)、HBeAg(+)、抗一HBc(+)及5例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)患者血清中HBV DNA陽性率達(dá)100,結(jié)合大三陽模式,我們不難發(fā)現(xiàn)這三種模式患者血清中HBeAg皆陽性,說明HBeAg(+)與HBV DNA有良好的一致性,HBeAg可作為HBV復(fù)制及具有強(qiáng)感染性的一個(gè)指標(biāo)。11例抗一HBs(+)及31例抗一HBs(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)的患者血清中無1例HBVDNA陽性,說明抗一HBs陽性可清除血清中乙肝病毒,為保護(hù)性抗體。而38例抗一

6、HBs(+)、抗一HBC(+) 的血清中HBV DNA檢出率為79(338),雖然患者血清中存在抗一HBs抗體,但體內(nèi)仍有病毒存在,國外研究表明,HBsAg至抗一HBs轉(zhuǎn)換后HBV DNA的變化,抗一HBs出現(xiàn)后2個(gè)月58病人血清HBV DNA陽性,6個(gè)月時(shí)31陽性,12個(gè)月時(shí)15陽性【3】,本文觀察到的結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。17例HBsAg(+)、抗一HBc(+)患者血清中HBV DNA陽性率達(dá)588 oA(1017)。此情況可能為血清轉(zhuǎn)換期或前C區(qū)突變,如果經(jīng)過動(dòng)態(tài)觀察仍表現(xiàn)為HBsAg(+),抗一HBc(+)及HBV DNA陽性,可能為前C區(qū)突變“】。20例抗一HBc(+)患者血清中檢

7、出2例HBV DNA陽性,陽性率10(210)。此情況可能HBV在體內(nèi)含量低ELlSA法未能檢出,或處在“窗口期”。 綜上所述,乙肝兩對(duì)半是HBV在人體內(nèi)的一種免疫反應(yīng)狀態(tài)而表現(xiàn)出的各種模式,ELISA法測乙肝兩對(duì)半是診斷HBV感染的傳統(tǒng)方法,我們知道HBV在電鏡下有三種顆粒,大球形顆粒即Dane顆粒僅占02,具有完整的病毒顆粒,而小球形顆粒及管形顆粒占98以上,其僅表達(dá)HBsAg而不含DNA,無感染性,因此對(duì)于ELlSA檢出HBsAg(+)者并不代表其HBV DNA陽性。同時(shí)筆者認(rèn)為對(duì)于ELISA判斷在灰區(qū)范圍的人群,除行綜合試驗(yàn)確診是否HBsAg陽性,也可建議進(jìn)行FQPCR,以判斷其是否為

8、乙肝患者。我們知道PCR方法是檢測HBV病毒本身,而且能進(jìn)行量化,可檢出培水平病毒含量,而ELISA法只能檢出ng水平,因此FQ-PCR能更準(zhǔn)確、靈敏地反映HBV的感染和恢復(fù)情況,對(duì)于乙肝的臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷比乙肝兩對(duì)半具有更重要的臨床意義。參 考 文 獻(xiàn)1 蔡衛(wèi)平,唐小平,陳勁峰,等慢性乙型肝炎抗HBV DNA定量 檢測與病原學(xué)標(biāo)志和肝損害程度的關(guān)系中國實(shí)用內(nèi)科雜志, 1998,18:1492 彭文偉傳染病學(xué)第l版北京:人民衛(wèi)生出版社,1997153 Loriot MA。Marcellin P,Bismuth E,et a1Demonstration of hepatitis Virus DNA by polymerase chain reaction in the serum liver after spontaneous or thernpeutic induced HBeAg to antiHbe or HBeAg to antiHBs seroconversion in patients with chronic hepatitis BHepatology,1992,15(1):324 Rodriguez FE,

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