高效液相色譜法測定護(hù)肝膠囊中五味子醇甲的含量

1、高效液相色譜法測定護(hù)肝膠囊中五味子醇甲的含量         【摘要】  目的探討大蒜素對血液流變性及紅細(xì)胞生理特性的影響。 方法制作急性高黏滯大鼠模型動脈取血，通過黏度法測定血流變指標(biāo)及紅細(xì)胞聚集指數(shù)，核孔膜濾過法測定紅細(xì)胞濾過指數(shù)，熒光偏振法測定紅細(xì)胞膜流動性，以及紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)，比較大蒜素腹腔注射組和未處理組的差異。 結(jié)果與未處理組比較，大蒜素高、中、低劑量組對血瘀癥大鼠全血黏度的增加均有明顯降低作用（P0.01，P0.05）；中、高劑量組對血漿黏度有明顯降低作用（P0.05），且上述作用呈現(xiàn)一

2、定的量效關(guān)系；高劑量組可明顯降低紅細(xì)胞壓積（P0.05），可明顯提高紅細(xì)胞的變形性（P0.05）；中、低劑量組有降低紅細(xì)胞聚集性的作用；各劑量組對紅細(xì)胞滲透脆性的增大有改善作用；各劑量組對紅細(xì)胞膜流動性的降低有改善作用，但均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 大蒜素可提高紅細(xì)胞變形性和降低血液黏度，改善血液流變性，而用于血淤癥的防治。 【關(guān)鍵詞】  大蒜素； 急性血淤癥； 血液流變性； 紅細(xì)胞Effects of Allicin on Hemorheology and Physiological Properties of Erythrocytes in Acute Blood-stagnate

3、d RatsAbstract:ObjectiveTo explore the effects of allicin on hemorheology and physiological properties of erythrocytes.MethodsWe established the rat models of acute hyperviscosity and collected artery blood samples. Then we examined the hemorheology index and erythrocyte aggregation index by the vis

4、cosity methods, detected the erythrocyte filtration index by the nuclear  pore  film, determined erythrocyte membrane fluidity by the fluorescence polarization and performed erythrocyte osmotic fragility test. The difference between the allicin intrapertoneal injection group and the untrea

5、tment group was observed.ResultsIn comparison with the untreatment group, all the high-, medium- and low-dose groups of allicin treatment had a decline in the enhancement of whole blood viscosity in rats with blood stasis (P0.01, P0.05). In the high- and medium-dose groups, the plasma viscosity sign

6、ificantly decreased (P0.05) and had the dose-effect relationship. In the high-dose group, the hematocrit greatly decreased  (P0.05) and the erythrocyte deformability increased (P0.05). In the medium- and low-dose groups, the erythrocyte aggregation index decreased. All dose of allicin had effec

7、t on the increase of erythrocyte osmotic fragility and the decrease of erythrocyte membrane fluidity, but no significance was detected. ConclusionAllicin may increase the erythrocyte deformability, decrease the whole blood viscosity and improve the blood rheological properties and it can be used in

8、the treatment of blood stasis.Key words:Allicin;   Acute blood stasis ;   Erythrocyte;   Hemorheology   大蒜素(Allicin)具有抗細(xì)菌、抗真菌、抗腫瘤和殺蟲等作用1。近年發(fā)現(xiàn)其還有抗病毒、提高免疫功能、清除自由基、抗氧化、降血壓、降血脂、抗動脈粥樣硬化、降血糖、抗心律失常及收斂作用2。目前醫(yī)學(xué)界已將其廣泛用于多種疾病的防治。其降壓、降脂、抗動脈粥樣硬化作用主要表現(xiàn)在對血液流變性的影響，而對血液流變性的研究，多

9、數(shù)集中在血小板功能上，對紅細(xì)胞流變性研究頗少。本文著重研究大蒜素對紅細(xì)胞流變性等生理特性的影響。1  材料1.1  動物Wistar大鼠，雌雄兼用，體重(200±20)g，34月齡，購自北京海淀通利實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心。1.2  藥品與試劑大蒜素注射液產(chǎn)自上海禾豐制藥有限公司，30 mg/2 ml。1.3  主要儀器NXE1型錐板式黏度儀：成都儀器廠產(chǎn)品。DXC300型核孔膜紅細(xì)胞變形能力測定儀：上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠產(chǎn)品。65060熒光偏振儀：日本日立公司產(chǎn)品。微量高速離心機(jī)：航空航天部華興航空機(jī)輪公司產(chǎn)品。2  方法2.1  動

10、物分組及給藥實(shí)驗(yàn)動物50只，隨機(jī)平均分為5組：空白對照組（生理鹽水2 ml·kg-1·d-1）、急性高黏滯模型組（生理鹽水2 ml·kg-1·d-1）、大蒜素低劑量組（5 ml·kg-1·d-1）、大蒜素中劑量組（10 ml·kg-1·d-1）、大蒜素高劑量組（20 ml·kg-1·d-1）。除空白對照組，其余動物每日自來水灌胃5 ml/只，連續(xù)7 d，第7天皮下注射濃度為0.1%的腎上腺素0.08 ml/100 g體重，注射2 h后，浸入冰水中5 min，間隔4 h注射第2次，制作急性高黏滯模

11、型3。所有動物在造模后的第2天開始每日腹腔注射（ip）相應(yīng)藥物1次，連續(xù)用藥7 d。2.2  血流變指標(biāo)及紅細(xì)胞聚集性的測定黏度法4。2.3  紅細(xì)胞變形性的測定核孔膜濾過法5。2.4  紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)5稱取120恒重的分析純NaCl 1.000 g，加少量蒸餾水溶解，于100 ml容量瓶中用蒸餾水定容，得171.1 mmol/L NaCl溶液。取12支試管，加入氯化鈉溶液和蒸餾水，配制濃度為41.0，47.9，54.7，61.6，68.4，75.2，82.1，88.9，95.8，102.6，109.4，116.3 mmol/L的NaCl溶液。取頸動脈不抗凝血

12、液1 ml，通過6號針頭，針頭斜面向上，向以上每管加入1滴血，輕輕搖勻，在室溫靜置2 h后，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷時(shí)，先從高濃度開始觀察，上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色者為開始溶血管，溶液為透明紅色且管底紅細(xì)胞完全消失者為完全溶血管。分別記錄其各自的NaCl濃度。濃度值高于正常對照，表明滲透脆性增大，反之減小。         2.5  紅細(xì)胞膜流動性的測定熒光偏振法6。2.6   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為計(jì)數(shù)資料，均數(shù)以±s表示，統(tǒng)計(jì)分析采用方差分析及q檢驗(yàn)，等級資料采用秩和檢驗(yàn)。3&

13、#160;  結(jié)果3.1  大蒜素對紅細(xì)胞聚集性的影響急性高黏滯模型組與對照組比較，全血高切及低切黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積均明顯增高（P0.01或P0.05），提示急性血淤癥模型復(fù)制成功。與模型組比較，大蒜素高、中、低劑量組對血淤癥大鼠全血高切黏度分別降低14.43%（P0.01），9.71%（P0.01），4.15%（P0.05）；對全血低切黏度分別降低15.89%（P0.01），14.27%（P0.01），6.86%（P0.01）；對血漿黏度分別降低11.33%（P0.05），9.78%（P0.05），3.49%（P0.05），且上述作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。大蒜素高劑

14、量組可明顯降低紅細(xì)胞壓積（P0.05），降低程度為6.47%；中、低劑量組此作用不明顯。大蒜素中、低劑量組有降低紅細(xì)胞聚集性的作用，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。表1  大蒜素對紅細(xì)胞聚集性的影響（略）與空白對照組比較，*P0.05；*P0.01；與急性高黏滯模型組比較，P0.05；P0.013.2   大蒜素對紅細(xì)胞變形性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：急性高黏滯模型組紅細(xì)胞濾過指數(shù)較對照組明顯增大（P0.05），表明紅細(xì)胞變形性。結(jié)果見表2。表2  大蒜素對紅細(xì)胞變形性的影響（略）與空白對照組比較，*P0.05，與急性高黏滯模型組比較，P0.053.3

15、0;  大蒜素對紅細(xì)胞滲透脆性的影響急性高黏滯模型組開始溶血及完全溶血時(shí)的NaCl溶液濃度較對照組稍高，表明模型組大鼠紅細(xì)胞對低滲鹽溶液的抵抗力差，滲透脆性增大，滲透脆性在一定程度上反映了紅細(xì)胞膜黏彈性，影響著紅細(xì)胞的變形性。大蒜素各劑量組對紅細(xì)胞滲透脆性的增大有改善作用，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表3。3.4   大蒜素對紅細(xì)胞膜流動性的影響急性高黏滯模型組紅細(xì)胞膜熒光偏振度明顯增高，表明膜流動性降低。大蒜素各劑量組對紅細(xì)胞膜流動性的降低均有改善作用，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表4。表3  大蒜素對紅細(xì)胞滲透脆性的影響（略）表4  大蒜素對紅細(xì)胞膜

16、流動性的影響（略）與空白對照組比較，*P0.054  討論   全血黏度是血液最基本的流動特性7。全血黏度增加，血流受阻，氧氣和養(yǎng)分供應(yīng)不足，能量代謝障礙，臟器功能受損。同時(shí)血流緩慢或停滯又可促使血栓形成。全血黏度在體內(nèi)主要受到血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞流變性等因素的影響4。血漿中因含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等高分子化合物而具有一定黏度，血漿黏度增加可導(dǎo)致全血黏度增高；紅細(xì)胞在血液的有形成分中數(shù)量最多，故紅細(xì)胞壓積也是影響全血黏度的主要因素之一，全血黏度隨紅細(xì)胞壓積增高而變大。在本實(shí)驗(yàn)中，急性血淤癥大鼠全血黏度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積均明顯升高，反映模型大鼠血液流動性

17、降低。大蒜素對以上指標(biāo)均有明顯改善作用，能降低血液黏度，加速血液流動性，改善微循環(huán)。   紅細(xì)胞的流變性主要體現(xiàn)在其變形性和聚集性兩方面7。二者都影響血液黏度，變形性降低可以導(dǎo)致高切變率條件下全血黏度增高，聚集性增高可使低切變率條件下全血黏度增高，因此，改善紅細(xì)胞變形能力和抑制紅細(xì)胞聚集都能有效降低血液黏度，從而改善組織供血。紅細(xì)胞的變形性主要取決于細(xì)胞的3個(gè)內(nèi)在因素：紅細(xì)胞膜的流動性和黏彈性、紅細(xì)胞的幾何形狀、紅細(xì)胞內(nèi)液的黏度（即血紅蛋白的理化性質(zhì)及濃度）4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大蒜素對血淤癥大鼠紅細(xì)胞膜黏彈性的減弱及紅細(xì)胞膜流動性的降低有改善的趨勢，說明大蒜素對紅細(xì)胞變形性的提

18、高與影響紅細(xì)胞膜的功能有關(guān)。紅細(xì)胞的聚集性高低主要取決于血漿蛋白與球蛋白的橋聯(lián)作用、流場中切變力的大小、紅細(xì)胞表面電荷的多少3個(gè)因素4。紅細(xì)胞的聚集程度可以用紅細(xì)胞聚集指數(shù)來衡量，數(shù)值越大，表明紅細(xì)胞聚集性越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果未表明大蒜素對紅細(xì)胞聚集性的增強(qiáng)有明顯降低作用，說明大蒜素降低低切血液黏度的作用主要與降低血漿黏度及紅細(xì)胞壓積有關(guān)。   許多有血淤癥臨床癥狀的患者都伴有血液流變學(xué)指標(biāo)的異常，且血液流變學(xué)指標(biāo)的改變多早于臨床表現(xiàn)，恢復(fù)正常又晚于臨床癥狀和體征的消失，因此藥物治療血淤癥的療效確定應(yīng)以血流變指標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)。大蒜素可提高紅細(xì)胞變形性和降低血液黏度，能改善血液流變性，可擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍，如預(yù)防和治療血淤癥即高黏滯血癥、改善微循環(huán)障礙、預(yù)防血栓形成等。【參考文獻(xiàn)】  1 關(guān) 軍,田家樂.大蒜素片作用機(jī)理及其藥效學(xué)研究述要J.中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21(5):675，6802 Balasenthil S, Rao KS, Nagini S. Altered cytokeratin expression during chemoprevention of experim