美國FDA用無菌工藝生產(chǎn)滅菌藥品的指南

1、美國FDA用無菌工藝生產(chǎn)滅菌藥品的指南美國FDA用無菌工藝生產(chǎn)滅菌藥品的指南1 9 8 7年4I3>目的 4導言 6III廠房和設施 9組分 10V，容器密封件 11時限 11生產(chǎn)和工藝控制驗證 16試驗室控制 17. 無菌檢驗 20X參考資料 I目的 本指南為有關人員提供用無菌工藝生產(chǎn)滅菌藥品的些操作和規(guī)程這些操作和規(guī)程是 由符合現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范有關部分的合格方法所組成(21CFR210和211部分)。應 該注意，對21CFR600-680部分中規(guī)定的生物制品而言，210.2(a)和211.1（b)部分規(guī)定，同時遵守600-800部分和分篇210與211的適當規(guī)定是不可能的，對

2、于這些生物制品將制訂特殊的規(guī)定。因此，生物制品的無菌檢驗和用于這樣檢驗的培養(yǎng)基必須符合610.12部分的要求。 導言 本指南依據(jù)2lCFRl0.90而發(fā)布，它所敘述的通用原則和方法不是法定的，但是為FDA所認可。廠家可依據(jù)本指南確保FDA的認可，或者遵循其他不同的規(guī)程。廠家采用不同規(guī)程時，可事先同F(xiàn)DA商討但并非必須這樣)，以免日后為FDA所否定而浪費人力和財力。 如果當局認為需要，可以通過它在法規(guī)上的努力和有關人員提出的意見與建議，不時地修訂本指南。 用無菌工藝和用最后滅菌方法生產(chǎn)滅菌藥品有不同之處。最后滅菌方法通常包括在高質(zhì)量環(huán)境條件下產(chǎn)品容器的灌裝和密封；產(chǎn)品、容器和密封件通常具有高度的

3、微生物學的質(zhì)量要求，但不是無菌的。為降低產(chǎn)品的微生物含量并確保隨后的滅菌處理成功，重要的是灌裝和密封在高質(zhì)量的環(huán)境中進行。然后對在其最終容器中的產(chǎn)品進行滅菌處理-通常用加熱法或輻射法。在無菌工藝中，產(chǎn)品、容器和密封件都分別經(jīng)過滅菌處理，然后放到起。因產(chǎn)品裝入其最終容器后不再進行滅菌處理，所以為保持產(chǎn)品的無菌性，在極高質(zhì)量的環(huán)境下進行產(chǎn)品灌裝和容器封閉至關重要。此外，無菌工藝比最終滅菌法通常有更多的變量，這因素使得確保最終產(chǎn)品無菌更為困難，例如在無菌灌裝前，最終產(chǎn)品的不同部分經(jīng)過不同的滅菌處理-如玻璃器皿的干燥加熱、膠塞經(jīng)高壓蒸汽處理、液體劑型的過濾，每處理都需要完全有效并處于控制之下。每一處理

4、都有出錯的可能性(另一方面，因最終滅菌的藥品通常只有次滅菌處理，因此出錯的可能性有限)，而且已滅菌的藥品、容器、密封件等的操作在直至進行最終包裝之前就有污染的危險，必須謹慎控制。 這些工藝的不同引出了有關無菌工藝的若干問題，關系到FDA認可的符合現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范規(guī)定中某些部分的方法?，F(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中的這些部分通常大多是討論關于廠房和設備、部件、容器密封件、生產(chǎn)時間限制、驗證、試驗室控制和無菌檢測，尤其因為這些問題大多涉及到工藝的驗證，本指南將詳細說明。本指南準備回答這些問題并澄清滅菌藥品的無菌生產(chǎn)工藝中的某些技術方面問題。應該注意，本文件沒有提出無菌工藝中其他幾個重要的方面-

5、如人員衛(wèi)生、無菌工作服和潔凈室設計。如需要，這些問題及其他問題將包括在本指南以后的修訂版本中。盡管本指南的某些部分也可用于最終滅菌藥品的制備，但本指南并不論述最終滅菌藥品問題。 本指南，在21CFR211分篇的某些章節(jié)所規(guī)定的現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范要求之后是FDA認為符合這些要求的操作和規(guī)程的討論。應注意，并非用于無菌工藝處理的滅菌藥品的全部規(guī)定均得到過鑒定，只是對提出了中肯問題的部分作了鑒定。本指南還包括了可能對讀者有用的參考資料的目錄。 定義關鍵區(qū)域(Criticalareas)：打開滅過菌的產(chǎn)品或容器密封件的區(qū)域。關鍵表面(Criticalsurfaces)：與滅過菌的產(chǎn)品或容器密封件

6、相接觸的表面。 D值(Dvalue)：在指定溫度下，減少微生物數(shù)目90所需要的時間。 過度滅菌工藝(Overkill sterilization process)：足以使D值小于1分鐘的微生物更少降低12個對數(shù)值的工藝。 除菌過濾器(Sterilizing filter)：以微小假單孢菌為挑試菌種，在每平方厘米過濾表面的微牛物最小濃度為10-7的條件下能產(chǎn)生無菌濾出液的過濾器。 驗 證(Validation)：建立高度保證的書面證據(jù)，保證個特定的工藝將自始至終生產(chǎn)出符合其預定規(guī)格和質(zhì)量品質(zhì)的產(chǎn)品。 最差狀況(Worstcase)：組生產(chǎn)上限和下限及環(huán)境的，包括列入標準操作規(guī)程內(nèi)的條件與理想條件

7、相比，這組條件具有使工藝過程或產(chǎn)品發(fā)生問題的最大機會。這些條件并不一定使過程失敗或產(chǎn)品不合格。 III廠房和設施 要求 211.42節(jié)(設計和建筑特征)要求，在某種程度上，應有隔離的或特定的操作區(qū)域以防污染。對無菌工藝而言，應適時提供正壓下經(jīng)過高效過濾器過濾的空氣以及控制無菌條件的監(jiān)測環(huán)境和維護設備的系統(tǒng)。 211.46節(jié)(通風、空氣過濾、空氣加熱和冷卻)要求，在某種程度上，應提供足以控制氣壓、微生物、灰塵、濕度和溫度的設備以及為生產(chǎn)區(qū)提供空氣所用的過濾系統(tǒng)，包括預過濾和高效過濾器。 指導 在無菌工藝中有要求隔離和控制的若干種操作區(qū)，依各操作區(qū)的性質(zhì)而需要不同級別的空氣。有兩個區(qū)域?qū)λ幤焚|(zhì)量至

8、關重要-關鍵區(qū)域和控制區(qū)域。 關鍵區(qū)域 關鍵區(qū)域是指滅過菌的產(chǎn)品、容器和密封件暴露于環(huán)境中的區(qū)域。在該區(qū)域的工作包括滅過菌的物料產(chǎn)品灌裝密封前及這些過程中的操作。這些操作在通常稱作“無菌中心”或“無菌工藝”區(qū)中進行。 該區(qū)域至關重要，因為產(chǎn)品在容器內(nèi)不再進行處理并且產(chǎn)品易于受污染，因此，為保證質(zhì)量，特別是產(chǎn)品無菌，在實際操作中直接接觸的環(huán)境應具有最高的質(zhì)量。 環(huán)境質(zhì)量的個方面是空氣中微粒含量。微粒非常重要，從物理學方面而言，微粒可以進入產(chǎn)品中使產(chǎn)品污染；或從生物學方面而言，微?？沙蔀槲⑸锏妮d體。因此，減少空氣中微粒含量和有效地去除存在的微粒很重要。已滅菌容器密封件和灌裝密封操作直接接觸的空氣

9、的可以接受的微粒質(zhì)量是：在離工作臺不超出1ft處和灌裝密封操作時氣流的上流處測量，每立方英尺空氣中含0.5m或大于0.5m的微粒數(shù)量不得超過100個(100級)。有些粉末灌裝操作可以產(chǎn)生大量的粉末微粒，但從其性質(zhì)而言沒有造成污染的危險。在這些情況下，在lft距離內(nèi)測定空氣質(zhì)量不可行，并且更不能區(qū)分影響產(chǎn)品質(zhì)量的空氣污染物和粉塵微粒的“背景噪音”水平。在這些場合下，產(chǎn)品接觸的空氣的取樣盡可能代表外來微粒污染的真實水平，這點很重要。 在關鍵區(qū)域內(nèi)，必須有使用高效過濾器過濾的層流空氣供應，該空氣具有足夠從灌裝封閉區(qū)內(nèi)去除微粒的速度。盡管在操作產(chǎn)生大量塵?；蛟O備的構造于擾層流處也需要較高速度，但正常情

10、況下，90ft分±20%的速度是足夠的。 空氣也應具有高度的微生物學質(zhì)量要求。每10ft3不多于個菌落形成單位的發(fā)生率是可以達到的和理想的。 在灌裝封閉操作附近，空氣不是需要具有高的微粒和微生物質(zhì)量的唯氣體。接觸產(chǎn)品、容器密封件或產(chǎn)品接觸的表面的其他氣體，如N2和CO2(例如沖洗或復蓋)也應經(jīng)過無菌過濾。此外，壓縮空氣應無可檢測到的油蒸汽。 關鍵區(qū)域相對于鄰近的潔凈要求較低的區(qū)域，應有正壓差?？山邮艿膲翰顬?.05inH2O。 控制區(qū) 控制區(qū)是準備未滅菌產(chǎn)品、加工過程中的物料和容器密封件的區(qū)域，是第二類重要的環(huán)境控制區(qū)。它包括組件混合區(qū)和組件、加工過程中的物料、藥品和經(jīng)最后沖洗的與藥

11、品接觸的設備、容器密封件的表面暴露在工廠環(huán)境中的區(qū)域。為了降低最終產(chǎn)品中微粒污染物的水平和控制隨后進行滅菌的物品及組件的微生物含量(生物負荷)，這環(huán)境應具有高的微生物和微粒質(zhì)量要求。 工作期間在暴露物品的附近測量時，如果每立方英尺中0.5m和大于0.5m的塵粒數(shù)不高于100000(100000級)，該控制區(qū)中空氣的微粒質(zhì)量般認為是可以接受的?？山邮艿奈⑸镔|(zhì)量為每10ft3中菌落形成單位不多于25個。 為了保持控制區(qū)內(nèi)空氣質(zhì)量，獲得足夠的空氣流，并相對于鄰近非控制區(qū)保持正壓差非常重要。在這點上，氣流應達到每小時至少換氣20次，并且壓差般說來至少為0.05inH2O(所有門均關閉)。當門打開時，

12、外向氣流應足以使污染的侵入減至最低限度。 控制區(qū)內(nèi)也可以使用周圍空氣以外的氣體。如通入控制區(qū)內(nèi)，這種氣體應具有與周圍空氣相門同的質(zhì)量。壓縮空氣應無可檢測到的油蒸汽。 除這些生產(chǎn)區(qū)外，對有些設備也應提供高質(zhì)量的過濾空氣。設備中的空氣與已滅菌的物料，或微生物和微粒含量均低的物料相接觸處尤為重要。例如，除菌過濾器應用于冷凍干燥器真空間歇和熱空氣滅菌器的通風口處，以確保與已滅菌產(chǎn)品接觸的空氣是無菌的。同樣，進入盛裝已滅菌液體的常壓容器中的空氣也應是經(jīng)過過濾的。用于盛裝具有高度的微生物學的質(zhì)量要求的物料貯罐內(nèi)的空氣也應是經(jīng)過過濾的，并且過濾器應是干燥的，以防止隨后堵塞凝聚，或微生物生長而弄濕(有兩種方法

13、可以達到這些要求，給過濾器供熱和使用疏水性過濾器)。對這些空氣過濾器定期進行完整性檢測是重要的。 保持空氣質(zhì)量的合格系統(tǒng)包括檢測高效過濾器的完整性。為檢查密封墊圈周圍、框架之間或過濾介質(zhì)間的泄漏情況，裝置首次安裝時，應先進行完整性檢測。此后，應在間隔適當時期進行完整性檢測。通常在關鍵區(qū)域每年至少進行兩次這樣的測試就足夠了。然而，如果發(fā)現(xiàn)空氣質(zhì)量低或者作為藥品非無菌性調(diào)查的一部分，就需要進行更多的測試。使用鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)氣霧劑做挑戰(zhàn)性試驗(challenge test)是檢測高效過濾器完整性的種可以接受的方法。因為高效過濾器能截住99.97直徑大于0.3m的微粒，所以確保用做挑戰(zhàn)性試

14、驗的物質(zhì)有足夠數(shù)量的該大小范圍內(nèi)的粒子是非常重要的。一種可以接受的鄰苯二甲酸二辛酯挑戰(zhàn)性試驗包括：在過濾器氣流進口加入鄰苯二甲酸二辛酯氣霧劑，濃度為每立升空氣80l00g，速度為過濾器的設計的氣流速度，然后在過濾器氣流出口處用合適的光度計探針掃描，取樣速度至少為每分鐘1ft3。探針應掃描整個過濾器的表面和框架，探針的位置應距過濾器的表面12in。個探針的讀數(shù)相當于入口挑試品的0.01%就認為有值得注意的泄漏的征兆，應加以修理。 不在過濾器進口處加入已知大小的微粒而用微粒計數(shù)器檢測泄漏是無效的。應注意，過濾器完整性測試和效率測試有不同之處。完整性測試是查出過濾介質(zhì)、過濾器框架和密封墊是否泄漏。挑

15、試品是種多分散性的氣霧劑，通常由大小為13m的微粒組成。測試在固定位置進行并用探針掃描過濾器表面，測量出的出口泄漏物作為入口挑戰(zhàn)性試驗的個百分比。而另方面，效率測試是測定過濾器的速度。該測試使用微粒為0.3m大小的單一分散性氣霧劑，它與過濾介質(zhì)有關并且通常需要特殊設備。出口處的讀數(shù)代表著整個過濾器表面的平均值，因此效率測試不能用來檢測泄漏。 由于速度的明顯降低能增加污染的可能性，并且速度的變化能影響氣流的層流，因此根據(jù)已確定間隔時間的工藝，監(jiān)測氣流速度也很重要。應測試氣流的類型，湍流會干擾空氣的吹掃作用。 組分 要求 211.80節(jié)(總的要求)在”定程度上要求對組分的貯存、處理及檢測、批準或拒

16、收建立書面程序。 211.84節(jié)(組分、藥品容器密封件的檢測以及批準或拒收)在定程度上要求那些易受微生物污染（這些微生物污染就組分的使用而言是不允許的)的組分在使用前必須經(jīng)過微生物檢驗。 引言 經(jīng)無菌工藝制造的滅菌藥品中使用的組分的最重要的方面之一是微生物質(zhì)量。用無菌工藝生產(chǎn)的成品可以因使用含微生物的個或多個組分而受到污染。因此，如果不對組分用過度殺滅滅菌工藝，按常規(guī)說明每種易受污染組分的微生物含量和根據(jù)這一生物負荷確定合適的接受或拒收限度是很重要的。如對組分使用非過度殺滅滅菌工藝，那么這個生物負荷的情況在獲得高度無菌保證中尤為重要。 在無菌工藝中，可以每組分單獨滅菌或幾種組分合并成混合物后滅

17、菌。組分滅菌有幾種方法，如經(jīng)過嚴格的驗證，每一種方法均可被接受。一種廣泛采用的方法是將組分溶解于種溶劑(如美國藥典注射用水)中形成溶液，過濾該溶液。過濾用無菌膜或筒形過濾器。在組分受熱可能有不利影響的情況下可以用這種方法。該方法的另種情況是使過濾后的溶液進行組分的無菌結晶和沉淀，成為無菌粉末。然而這種方法比其他方法涉及更多的處理和操作，因此在操作中污染的可能性更大。 如果種組分對受熱無不利影響，且該組分是可溶性的，這種組分可以制成溶液并且用單獨的高壓釜或在有蒸汽套的加壓制備容器中進行蒸汽滅菌。 對于受熱穩(wěn)定且不溶性組分，干熱滅菌是種合適的方法。但這種方法的問題是熱穿透深度和分布不夠。例如，由于

18、粉末的隔熱效果，用這種方法處理粉末需要進行適當?shù)臒岽┩干疃群头植嫉难芯俊?環(huán)氧乙烷表面滅菌是另一種對組分滅菌的方法，然而作為主要滅菌的方法，其有效性是有問題的，因為這種滅菌劑對粉末晶核的持久穿透性不夠。在滅菌處理過程中，環(huán)氧乙烷可用于預防可能的微生物污染的粉末表面滅菌。 對要求無熱原的產(chǎn)品而言，對熱原敏感組分的接受或拒絕應有書面規(guī)程。被熱原污染的組分應當拒絕或進行除熱原性質(zhì)的處理，以使處理后的組分符合標準、規(guī)格和特性。 V，容器密封件 要求 211.94節(jié)(藥品容器和密封件)在定程度上要求藥品容器和密封件潔凈，并根據(jù)藥品性質(zhì)，要求無菌和無熱原。標準測試方法以及潔凈、滅菌和除熱原的處理的方法必須

19、寫出書面規(guī)程并遵照執(zhí)行。 引言 在用無菌工藝制備滅菌藥品的情況下，灌裝和密封操作前容器和密封件的準備不僅僅是除去表面碎屑的清潔工作。對注射劑最終產(chǎn)品的完整性而言，容器和密封件的無菌、無熱原至關重要。滅菌和除熱原處理的方式主要取決于構成容器密封件的材料的性質(zhì)。任何嚴格驗證過的處理方式均可被接受。 在使用玻璃容器的情況下，滅菌前的準備般包括系列的洗滌及沖洗循環(huán)。不但洗滌有效地除去碎屑很重要，而且最終沖洗用水的質(zhì)量也很重要。最終沖洗用水應符合美國藥典注射用水的要求。除熱原有各種方法，如先用化學溶液洗滌，隨后用注射用水沖洗。干熱可用于玻璃容器的滅菌和除熱原。干熱滅菌除熱原的驗證應包括熱穿透性和熱分布的

20、研究以及有代表性的處理周期和負載結構以模擬實際生產(chǎn)過程。無論使用什么除熱原方法，驗證資料應證明該過程將使內(nèi)毒素含量降低3個對數(shù)值。 除熱原處理是否徹底的一個估價方法是用含已知量標準內(nèi)毒素的容器模仿該處理過程并測定內(nèi)毒素降低的水平。然而，F(xiàn)DA已意識到用內(nèi)毒素挑試品估價某些洗滌工藝的個潛在問題，問題產(chǎn)生于將粉狀內(nèi)毒素挑試品直接用于測試表面而不是先溶解該內(nèi)毒素并在該表面上進行空氣干燥。粉狀物質(zhì)可能比用空氣重新干燥的物質(zhì)更易溶于沖洗水中，并且比正常存在于容器密封件表面的內(nèi)毒素更易溶于水中。這使人們感覺所研究的工藝在去除內(nèi)毒素方面的效果超過廠實際情況。因此，從目標物表面除去內(nèi)毒素挑試品不應該比除去原來

21、存在的內(nèi)毒素更加容易。 未經(jīng)控制的裝卸及貯存的塑料容器是熱原的來源，因此必須除熱原。塑料容器可以用環(huán)氧乙烷氣體滅菌，生物指示劑可用于監(jiān)測這樣的程序。同時要監(jiān)測和控制溫度、壓力、濕度和環(huán)氧乙烷濃度，容器表面和容器內(nèi)可能存在的殘留物(如環(huán)氧乙烷和其降解產(chǎn)物)也要測定。 膠塞是微生物和熱原(如產(chǎn)品要求無熱原)污染的另一個可能的來源。在最終蒸汽滅菌前，膠塞般經(jīng)過多次洗滌循環(huán)，最后沖洗用美國藥典注射用水。減少洗滌和滅菌之間的時間間隔也很重要，因為膠塞上的水分有助于微生物生長和熱原產(chǎn)生。因膠塞導熱差，所以膠塞滅菌工藝的適當驗證尤為重要。 時限 要求 211.111節(jié)(生產(chǎn)時間)在定程度上要求，為確保藥品質(zhì)

22、量，對每一生產(chǎn)階段的完成時間限度都要確定。 引言 在無菌工藝制備滅菌藥品中，確定時限通常對若干操作是合適的。例如，為了防止濾出物因微生物生長或通過過濾器時間過長而受到污染，產(chǎn)品過濾和灌裝操作的全部時間應限制在一個限定的最大值內(nèi)。這樣的限制也避免了過濾器進口端微生物數(shù)目的增多，微生物的增多將導致熱原產(chǎn)生。 生產(chǎn)和工藝控制驗證 要求 211.113節(jié)(微生物污染的控制)在一定程度上要求建立和遵守為防止微生物污染滅菌藥品而制定的合適的書面規(guī)程。該規(guī)程必須包括所有無菌工藝的驗證。 指導 為保證經(jīng)無菌工藝生產(chǎn)的滅菌產(chǎn)品的無菌，兩種操作類型，即滅菌和無菌條件下的灌裝密封的嚴格驗證最為重要。如果產(chǎn)品的無菌的

23、組件-藥品、容器和密封件在容易導致污染這些組件的條件下放在一起，即使最有效的無菌工藝也難以達到目標。相反，如果這些情況沒有造成任何污染，但產(chǎn)品組件組裝時不是無菌的，那么產(chǎn)品的滅菌也將受影響。 就驗證滅菌產(chǎn)品組件的無菌組裝和這些組件滅菌的可以接受的方式而言，已有問題產(chǎn)生，然而，些人認為滅菌產(chǎn)品組件的無菌組裝操作最為困難且已產(chǎn)生較多問題。因此，本指導重點為驗證無菌組裝(即灌裝和密封)操作。 無菌組裝操作 驗證無菌組裝工藝的一種可以接受的方法，包括用種微生物生長培養(yǎng)基模擬滅菌產(chǎn)品灌裝操作，這種方式稱作“無菌培養(yǎng)基灌裝”。使用該營養(yǎng)培養(yǎng)基，使之暴露于操作者、設備、表面和環(huán)境條件下，以盡可能模擬產(chǎn)品將經(jīng)

24、歷的相同暴露條件。密閉的藥品容器中灌裝了培養(yǎng)基，然后進行培養(yǎng)以檢查微生物的生長，并且評價結果以確定在實際灌裝和密封操作中所有給定的藥品單位被污染的可能性。培養(yǎng)基灌裝連同全面環(huán)境監(jiān)測在驗證無菌溶液、懸浮液和粉末的無菌工藝中尤有價值。灌裝液體培養(yǎng)基作為驗證粉末的無菌工藝的部分，可能需使用設備和(或)工藝步驟。而這些設備及程序步驟不會出現(xiàn)在常規(guī)的粉末程序操作中。然而，這樣一些工作對于表明粉末暴露受污染的特性是有價值的，并且是重要的。 培養(yǎng)基灌裝方面已出現(xiàn)了若干問題，涉及到培養(yǎng)基污染設備、灌裝的周期和次數(shù)、灌裝的規(guī)模、培養(yǎng)基本身、環(huán)境條件和試驗結果。 1受培養(yǎng)基污染：一些藥品生產(chǎn)廠對培養(yǎng)基灌裝操作中營

25、養(yǎng)培養(yǎng)基對設備和用具可能造成污染表示關注。然而，如果培養(yǎng)基經(jīng)過適當處理，并隨后立即進行設備的清洗、消毒，必要時 進行滅菌，那么培養(yǎng)基灌裝操作對后來使用同設備和用具處理的產(chǎn)品質(zhì)量不會有影響。 2. 頻次和試驗次數(shù)：當一個工藝最初被驗證時，每一個獨立的培養(yǎng)基灌裝均應重復足夠次數(shù)以保證結果的一致和有意義。因為一次單一試驗的結果可以有誤，多次試驗得到的偏差很大的結果可能標志著該工藝的失控，這是很重要的。FDA認為，在許多情況下，至少需要進行三次獨立的試驗，這一最少的次數(shù)被認為是工業(yè)中的一個總的驗證原則。初期驗證后，需增加培養(yǎng)基灌裝的頻次將取決于事故的次數(shù)和可能影響該無菌工藝除去滅菌產(chǎn)品組件污染的能力的

26、變化。例如設備和用具的改進、人員的重大變更、環(huán)境測試結果的反常和最終產(chǎn)品無菌檢驗顯示產(chǎn)品受到污染等都需重新驗證該系統(tǒng)。然而，沒有上述變化或事故時，一般可以接受的頻次是每個灌裝密封生產(chǎn)線，每一班每年至少做兩次。全體人員每年必須參加至少一次的培養(yǎng)基灌裝。因為使用培養(yǎng)基灌裝再驗證該工藝，每次再驗證中培養(yǎng)基灌裝單獨試驗的次數(shù)不必象初期驗證時那樣多，例如如果試驗結果與初期驗證的致，并且環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)證實灌裝環(huán)境質(zhì)量在規(guī)定的限度內(nèi)，那么做一次試驗就可以了。然而，當數(shù)據(jù)相反或數(shù)據(jù)表明該工藝失控時，應確保增加起確定作用的培養(yǎng)基灌裝試驗。 3試驗的規(guī)模：培養(yǎng)基灌裝單位的數(shù)目應對檢測低污染發(fā)生率的概率高得多。曾有報

27、道，要達到95%的可靠率(信任率)，污染率為11000，至少需檢測3000單位。 決定試驗規(guī)模時，無菌工藝操作持續(xù)的時間也是首先要考慮的。班次持續(xù)的時間尤其要足以覆蓋實際正常生產(chǎn)的全部操作。試驗單位的數(shù)目必須反映出在灌裝速度下暴露時間的“最差狀況”，這一灌裝速度相當于或低于實際灌裝速度。為使培養(yǎng)基接觸容器內(nèi)表面(例如，旋轉(zhuǎn)裝有培養(yǎng)基的容器)，并易于目檢微生物的生長情況，每一容器應灌裝足夠的培養(yǎng)基，這一點也很重要。 4培養(yǎng)基：培養(yǎng)基最重要的方面是它們促進微生物生長的能力。選擇用于驗證試驗的培養(yǎng)基前，應證實其能夠支持微生物生長。在這點上，與培養(yǎng)基灌裝試驗一道培養(yǎng)陽性控制單位是有價值的。一般說來，支

28、持廣譜需氧微生物生長的培養(yǎng)基(如胰酶酪胨大豆培養(yǎng)基)是可以接受的。美國藥典國家處方集(USPXNF)所列的用于無菌試驗生長促進檢測的微生物可用于此目的。 在選擇合適的培養(yǎng)基時，也應考慮它們是否有能力使經(jīng)過環(huán)境監(jiān)測和陽性無菌試驗結果確證的哪些種類微生物生長。 用足夠的時間(周期不少于14天)和溫度培養(yǎng)培養(yǎng)基單元用以檢測由于環(huán)境條件和取樣方法可能造成的影響致使在其他培養(yǎng)條件下不能生長的微生物生長，這一點也很重要。 5環(huán)境條件：培養(yǎng)基灌裝應在模擬實際和作用為生產(chǎn)質(zhì)量限度所確定的“最差狀況”的環(huán)境條件下進行。在標準操作規(guī)程內(nèi)，這樣強調(diào)條件在一定程度上是允許的，重要的是用來評定這些規(guī)程所包括的程序的某些

29、培養(yǎng)基灌裝過程中存在這些條件。在空氣微粒和微生物質(zhì)量超出正常的情況下和在特別注意的情況下，進行培養(yǎng)基灌裝會得出不正確的評定(造成該工藝比實際情況似乎更潔凈)。與其那樣，不如在確定的人員數(shù)目和活動、溫度及濕度的限度下對該系統(tǒng)做挑戰(zhàn)性試驗。 6試驗結果：具有高度可靠性的試驗結果表明產(chǎn)品單位在無菌工藝中被污染的可能性極小。一般說來，11000的污染概率是可以接受的。FDA可以接受的這一污染概率并不意味著在1000個單位以無菌工藝生產(chǎn)出的滅菌藥品中可能有1個是非無菌的。生產(chǎn)廠對所有非無菌產(chǎn)品的發(fā)貨負有全部法律責任。FDA僅承認關于如何正確并準確地驗證一個控制體系排除污染的特性方面有科學和技術的限制。

30、滅菌操作 過濾 過濾是消毒藥品溶液常用的方法，過濾后將藥品溶液在無菌條件下加入到滅過菌的容器中。滅菌過濾器是指用最低濃度為107微小假單孢菌cm2過濾器表面做挑戰(zhàn)性試驗，能濾出無菌濾液的過濾器。這種過濾器的孔隙直徑為0.22m或更小些。在某些情況下，產(chǎn)品粘度高或有膠體性質(zhì)，不能通過0.22m的孔隙，可以連續(xù)使用0.45m的過濾器除去微生物。然而，最好選用比過濾更能保證較高的無菌水平，而對產(chǎn)品質(zhì)量無不利影響的其他滅菌方法。 無論使用什么過濾器或組合過濾器，驗證均應包括微生物挑戰(zhàn)性試驗以模擬“最差狀況”生產(chǎn)條件，尤其要考慮待過濾物料中微生物的大小。微生物應足夠小，不但能挑試過濾器的孔隙，而且能模擬

31、生產(chǎn)中存在的最小微生物。就這一點而言，微小假單孢菌是可以接受的微生物，因為它是最小的細菌之一(直徑0.3m)。如果適當?shù)纳L、采集和使用，它可以通過孔隙大于0.22m等級的過濾器。挑戰(zhàn)性試驗中微生物的數(shù)目很重要，因為一個過濾器可能有若干個大于標示等級的孔隙，這些孔隙可以使微生物通過”j。這樣通過的可能性隨著待濾物料中微生物數(shù)目的增加而增加?？梢越邮艿奈⑿〖賳捂呔粼嚌舛葹槊科椒嚼迕走^濾器表面上不少于107，確保實際流人溶液的生物負荷不包括一定大小和(或)濃度的微生物，它們會降低濾液的無菌水平，這一點很重要。 有內(nèi)在殺菌力的藥品溶液和油質(zhì)藥品溶液，不可用微小假單孢菌做過濾器的挑戰(zhàn)性試驗。在上述情

32、況下，要使用粘度和其他物理性質(zhì)十分接近實際產(chǎn)品，對微生物挑戰(zhàn)性試驗無相反作用的挑試液。 過濾器驗證的挑戰(zhàn)性試驗條件應模擬生產(chǎn)的其他方面以及流入液的生物負荷，例如，待過濾物料的pH和粘度、流速、壓力、溫度、物料與過濾器本身的適應性和水力沖擊作用都是生產(chǎn)的諸多方面，它們能影響過濾器的工作，在驗證過濾程序中應模擬這些因素。這些因素中許多與它們對過濾器截獲微生物方法的作用有關，即篩子截留和(或)吸附。 過濾器驗證試驗，包括微生物挑戰(zhàn)性試驗不必在實際生產(chǎn)場地進行。然而，重要的是試驗室應按上述討論模擬實際生產(chǎn)條件。 一些較復雜的過濾器驗證試驗超出了某些過濾器用戶的能力。在上述情況下，由外部試驗室或過濾器制

33、造者進行試驗是可以的。FDA認為獲得有效的試驗數(shù)據(jù)是過濾器用戶的責任。這些數(shù)據(jù)必須適用于用戶的產(chǎn)品和使用條件，因為對各種不同條件和產(chǎn)品，過濾器性能明顯不同。 一類產(chǎn)品的性質(zhì)和影響過濾器效能的程序條件相似時，不必對該類產(chǎn)品逐個進行驗證研究。更確切地說，可將延伸法用于該類產(chǎn)品最具挑戰(zhàn)性試驗特性的有關產(chǎn)品、產(chǎn)品性質(zhì)的驗證數(shù)據(jù)和工藝條件。這種延伸法的正確性應有書面證明。 對一個特定的產(chǎn)品、工藝和過濾進行適當?shù)倪^濾工藝驗證后，重要的是確保生產(chǎn)中使用的相同過濾器配件(膜或濾筒)以相同的方式運行。達到這一目的的種方法是將過濾器操作數(shù)據(jù)與過濾器完整性試驗數(shù)據(jù)聯(lián)系起來。正常情況下，過濾器完整性試驗是在過濾器裝配

34、完畢并且用前滅菌之后進行。然而更重要的是，這樣的試驗應在過濾器使用過后進行，這種使用的目的是檢測過濾過程中會發(fā)生的所有過濾器滲漏或穿孔?！跋蚯傲鲃印薄芭蔹c”和“保持壓力”試驗都是可以接受的完整性試驗方法。 設備 與滅菌藥品或無菌容器密封件表面相接觸的設備表面當然也必須是無菌的。在無菌工藝中嚴格驗證用于設備表面的滅菌工藝和驗證藥品和容器密封件的滅菌工藝同等重要。 設備(如灌裝設備、連接管線和過濾器固定物)用高壓釜蒸汽滅菌時，考慮高壓釜中確定的裝載方式是很重要的，因為不同的結構方式會影響熱量分布和滅菌效力(確保驗證條件的重復性的一種方法是遵循已建立的裝載結構圖，該圖是無菌工藝記錄的一部分)。 諸如

35、大罐和固定管線等設備采用通加壓蒸汽的方法在現(xiàn)場滅菌，驗證時要考慮各個不同位置的溫度和壓力以便找出沒有足夠熱量達到滅菌目的的潛在“死角”。例如，在管線系統(tǒng)中，一些在線過濾器致使一端產(chǎn)生明顯的壓差，從而導致過濾器出口端溫度明顯下降。確定這樣的溫度下降是否對滅菌規(guī)程產(chǎn)生不利影響的方法有在合適的出口處放置生物指示劑。驗證也應包括測定各個不同點的溫度和壓力。 試驗室控制 要求 211.160節(jié)(總的要求)在一定程度上要求建立正確的和合適的規(guī)格標準、標準、取樣計劃以及為保證組件、藥品容器、密封件、生產(chǎn)過程中的物料和藥品符合合適的質(zhì)量標準而設計的試驗規(guī)程。 引言 在無菌工藝中，最重要的試驗室控制之就是建立環(huán)

36、境監(jiān)測程序。樣品應從組件和產(chǎn)品暴露于環(huán)境的區(qū)域(諸如混料室和組件準備區(qū))收集。監(jiān)測無菌工藝區(qū)的微生物質(zhì)量以確定灌裝密封工作時是否保持了無菌條件，這一點尤為重要。監(jiān)測工藝應含環(huán)境(包括房間空氣、地面、墻壁和設備表面)的常規(guī)取樣和試驗。這樣的工藝能證實設備以及產(chǎn)品接觸表面潔凈和衛(wèi) 生的有效性，并可以確定潛在的污染物是否能被控制到適當水平。確保消毒劑保持對正常微生物群的效力很重要。 書面的監(jiān)測程序應有科學的取樣時間表，包括取樣地點和頻次。此外，最高微生物限度和發(fā)現(xiàn)樣品超過這一限度時采取行動的明確過程均應確定。 監(jiān)測環(huán)境的微生物質(zhì)量有幾種可以接受的方法。一種是使用被動空氣取樣器，如落盤法-裝有暴露于環(huán)

37、境中的營養(yǎng)瓊脂的陪替氏培養(yǎng)皿。這些用具在定量監(jiān)測中的價值有限，因為它們不能檢測未落到瓊脂表面的微生物。然而，如果在產(chǎn)品污染危險最大的關鍵區(qū)把落盤作為定性指示劑放在適當?shù)奈恢?，并且它們可以有效地俘獲微生物，那么落盤是有價值的。當與其他型式的空氣取樣器的數(shù)據(jù)聯(lián)系起來時，上述取樣器的數(shù)據(jù)是有用的。 評價空氣微生物質(zhì)量的另一可接受的方法是使用更“主動”的器具，諸如縫隙瓊脂取樣器、離心取樣器和那些使用液體沖擊和膜過濾的器具。盡管允許用所有這些器具通過檢測單位體積空氣取樣的有機體數(shù)目來進行定量測試，但每一種器具都有它不利的方面。在無菌區(qū)使用這種器具是必要的，在生產(chǎn)中至少每天都要用。在多班生產(chǎn)的情況下，每班

38、每日都要監(jiān)測。 環(huán)境監(jiān)測應包括關鍵表面微生物質(zhì)量的試驗。進行這類試驗通常用接觸盤、棉花桿和凸盤?？刂茀^(qū)的其他表面也要定期測試以表明潔凈和衛(wèi)生規(guī)程的適當程度以及檢測人員導致的污染。 環(huán)境監(jiān)測程序應包括對獲取微生物的常規(guī)鑒別。為了對環(huán)境微生物質(zhì)量進行合理評價，鑒定應足以區(qū)分“正常菌”和偶然污染物。盡管不必鑒別每個分離物的菌屬和類別，但這些特征足以建立一個有效的數(shù)據(jù)庫并足以證明潔凈和衛(wèi)生繼續(xù)有效，這一點是重要的。確定分離物的特征足以確定無菌培養(yǎng)基灌裝和產(chǎn)品無菌試驗中發(fā)現(xiàn)的有機體的一種潛在的關系，這也很重要。在研究滅菌失敗的原因時，這種關系有很高的價值。 用于環(huán)境監(jiān)測的微生物培養(yǎng)基不但要能檢測細菌，而

39、且要能檢測霉菌和酵母菌，并應在合適的時間和溫度條件下培養(yǎng)。 除監(jiān)測空氣的微生物質(zhì)量外，還應監(jiān)測微粒質(zhì)量。關鍵區(qū)域在正常使用期間，至少每天做一次微粒監(jiān)測，微粒檢測裝置應在接進工作區(qū)的空氣中取樣。 應進行定期監(jiān)測以檢查微粒數(shù)目背離正常水平的一切明顯變化，由固定地點測得的顆粒數(shù)目超量較多預示著出現(xiàn)了不正常情況，應進行調(diào)查并迅速改正。 . 無菌檢驗 要求 211.167節(jié)(特殊檢驗要求)在一定程度上要求，每批滅菌藥品均應有適當?shù)脑囼炇覚z驗，以確定其無菌。 引言 無菌檢驗的某些方面尤為重要。這些方面包括控制試驗環(huán)境、明確試驗限度以及陽性結果的解釋和復試。 試驗室環(huán)境檢驗與灌裝密割操作所使用的設施和控制應

40、相似。無菌檢驗設施或控制較差或不足會使無菌檢驗失敗的比例增高。如果生產(chǎn)設施和控制明顯好于無菌檢驗中所使用的，那么如果被檢驗產(chǎn)品實際上并非無菌，也會有把陽性無菌檢驗的結果歸咎于不完善的試驗室檢驗的危險，因此，無菌程序中的一些問題就不能發(fā)現(xiàn)。 一般說來，無菌檢驗的效力僅限檢測低水平污染。例如，美國藥典X和國家處方集敘述的無菌檢驗規(guī)程的取樣要求是：“一批產(chǎn)品若有10被污染，10次中就有9次能通過檢驗”。這一有限的靈敏度使得有必要確保檢驗合適數(shù)量的產(chǎn)品并且這些被檢產(chǎn)品能均一地代表這一批產(chǎn)品以使一批產(chǎn)品通過。此外，考慮到檢驗有限的靈敏度，所有陽性結果(在檢驗容器中觀察到微生物生長)應做非常精確的評價。

41、對滅菌檢驗陽性結果的評價應包括調(diào)查研究，以在可能的范圍內(nèi)確定微生物的生長來自于產(chǎn)品污染還是試驗室錯誤。盡管這種確定不絕對可靠，但獲得這樣或那樣有說服力的證據(jù)通常是可能的。當有說服力的證據(jù)表明無試驗室差錯或得到的數(shù)據(jù)無說服力時，公司可能在安全方面犯了錯誤，并且這些批產(chǎn)品應因不符合無菌要求而被拒收。 調(diào)查研究應考慮到關于產(chǎn)品制造和樣品檢驗的所有有關因素。就這一點而言，僅僅因為重復檢驗中沒檢測到微生物生長而將最初的陽性結果歸咎于試驗室差錯是不合適的。更確切地說，污染原因的有說服力的證據(jù)至少應基于以下各點。 1無菌檢驗中微生物鑒別(至少鑒別出屬類)。如果這種微生物在試驗環(huán)境中很少見，那么產(chǎn)品更可能污染

42、。如果這種微生物在試驗室和生產(chǎn)環(huán)境中都常見，那么不應自動排除產(chǎn)品的污染。 有機體對滅菌方法的敏感性以及對產(chǎn)品中所有防腐劑的敏感性也有助于確定污染源。當有機體能對抗滅菌方法或防腐劑時，應考慮是內(nèi)在產(chǎn)品污染。另一方面，當缺乏污染來源的相反證明時，在有機體沒有對抗力的情況下，污染源更可能是來自于試驗室污染。 2試驗室記錄的長期檢驗。認真審查試驗室數(shù)據(jù)的傾向可以有助于排除或認定試驗室為污染源。在FDA的經(jīng)驗中，一個試驗室在全部滅菌檢驗中初次陽性的無菌檢驗失敗率低于0.5是正常的。對于第一次檢驗而言，高于0.5的失敗率可以說明試驗室或生產(chǎn)有問題，因而應進行調(diào)查研究。如果初次陽性結果呈上升趨勢，就應該著手

43、調(diào)查研究。上升趨勢與全面調(diào)查研究中的其他因素聯(lián)系起來，可以證實一個懷疑為污染原因的因素。同樣，假陽性結果上升趨勢也應進行調(diào)查研究，這種上升可以成為生產(chǎn)或試驗室問題的先兆。為了更正確地監(jiān)測潛在污染源，根據(jù)影響這些來源的特性區(qū)分這些傾向是很重要的。例如，可用產(chǎn)品、容器類型、灌裝線和樣品管理程度區(qū)分這些傾向。最后滅菌產(chǎn)品和無菌工藝產(chǎn)品的樣品管理是相同的，無菌工藝產(chǎn)品的初次無菌檢驗失敗率較高可視為生產(chǎn)問題。 試驗室環(huán)境的長期微生物監(jiān)測可以揭示一些傾向，這些傾向可提供信息。試驗室中微生物負荷上升的傾向應進行調(diào)查研究并加以改正。然而這樣的傾向更預示著無菌檢驗失敗是試驗室差錯造成的。 3生產(chǎn)區(qū)環(huán)境監(jiān)測。尤為

44、重要的是在關鍵區(qū)域能生存的有機體的傾向分析。上升傾向預示著無菌檢驗失敗的原因在于產(chǎn)品?？紤]環(huán)境微生物負荷不限于與有疑問的批產(chǎn)品有關的批、日或班的生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測結果，這一點很重要。低水平的可生存有機物的結果可能會造成錯覺，尤其是依據(jù)可以成為一種傾向的部分較高的生物負荷的數(shù)據(jù)分類時，因此，重要的是考慮環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)范圍要寬。 4產(chǎn)品滅菌前的生物負荷。產(chǎn)品生物負荷的傾向可以顯示與無菌檢驗失敗有關的問題。生物負荷上升傾向與無菌檢驗失敗同時發(fā)生是產(chǎn)品污染的更有力的說明。 5生產(chǎn)記錄審查。應審查完整的批和生產(chǎn)控制記錄以查出與產(chǎn)品無菌有關的失敗或不正常的一切跡象，例如灌裝線空氣質(zhì)量監(jiān)測記錄可以顯示出有異常的高微

45、粒計數(shù)的時間。 6無菌復檢。一種可以接受的復檢包括使用供試品數(shù)量至少為原來瓶數(shù)的兩倍，應能代表一批產(chǎn)品的各部分。復檢未發(fā)現(xiàn)微生物生長與其他調(diào)查研究相比不顯得那么重要。然而，如果復檢中發(fā)現(xiàn)微生物生長，該批產(chǎn)品應被拒收，除非一個新的徹底的研究工作結論性地表明污染來自于取樣或檢驗規(guī)程。在這樣情況下，可進行第二次復檢。第二次復檢的樣品量應是第一次復檢的2倍。如第二次復檢發(fā)現(xiàn)微生物生長，該批產(chǎn)品應被拒收并不允許進一步復檢。 生物產(chǎn)品的第一次無菌復檢不要求試驗瓶數(shù)為原來的2倍(21CFR，610.12節(jié))。關鍵在于是否允許做第二次復檢。散裝的生物物料不允許進行第二次復檢。 X參考資料 1. Federal Standard 209B, Clean Room and Work Station Requirements, Controlled Environment, April 24, 1973. 2. Technical Order 00 - 25 - 203, Contamination Control of Aerospace Facilities, U. S Air Force, December 1, 1972. 3. NASA Standard for Clean Room and Work Stations for Microbially Cont