沙棘粉對(duì)衰老模型小鼠腦組織MDA和GSH含量的影響及其抗疲勞效果的研究

1、    沙棘粉對(duì)衰老模型小鼠腦組織MDA和GSH含量的影響及其抗疲勞效果的研究            作者：時(shí)間：2007-11-22 11:10:00                         

2、;   作者：陳軼玉,喬慧,陸培培,黃成【摘要】  采用昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過飼喂不同比例的沙棘粉飼料4周以后，在抗疲勞實(shí)驗(yàn)中，以血清乳酸脫氫酶(LDH)活力、血乳酸(BLA)、肌糖原(MG)、肝糖原(LG)等4個(gè)生理參數(shù)為指標(biāo)觀察沙棘粉的抗疲勞效應(yīng)，結(jié)果表明，飼喂4周沙棘粉劑的小鼠，其LDH、LG含量均顯著高于對(duì)照組；其抗疲勞時(shí)間亦顯著增長，且抗疲勞實(shí)驗(yàn)30min和60min后的血乳酸水平均低于對(duì)照組。在檢測(cè)小鼠腦組織的MDA和GSH含量時(shí)發(fā)現(xiàn)46劑量沙棘粉能降低MDA含量，提高GSH含量，表明沙棘粉能拮抗D-半乳糖的損傷，達(dá)到維生素相同效果。 &#

3、160;      【關(guān)鍵詞】  沙棘粉；衰老小鼠；腦組織氧化還原物質(zhì)；抗疲勞效果        沙棘制品不僅可以作為餌料中的維生素源，還可制成供人類食用的產(chǎn)品。沙棘果享有“維生素倉庫”和“神秘果”之稱，沙棘果中含有豐富的生物活性物質(zhì)，具有祛痰、利肺、養(yǎng)胃、健脾等功效，對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、抗腫瘤、抗衰老、抗炎、抗輻射損傷等方面均有顯著的藥理效應(yīng)1?？梢灶A(yù)見，沙棘制品的市場(chǎng)前景十分可觀，而目前我國沙棘資源浪費(fèi)嚴(yán)重。因此開發(fā)利用此資源已迫在眉睫。西部地區(qū)政府及種植戶迫切希望高等學(xué)校、科

4、研院所開展沙棘資源開發(fā)利用的研究，本實(shí)驗(yàn)采用沙棘果的干粉作為實(shí)驗(yàn)材料，通過飼喂昆明鼠4周以后，進(jìn)行其抗疲勞效果的研究，為沙棘資源開發(fā)利用提供基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)參數(shù)。        1  材料與方法        1.1  動(dòng)物來源及實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選自南京安立默實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖調(diào)劑中心（許可證號(hào)SYXK 2002-0059）， 在分組前選用了出生日齡（4周齡）及體重都基本相同的昆明小鼠（雄性）；實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所為南京大學(xué)藥業(yè)有限公司動(dòng)物房（許可證號(hào)SCXK200

5、2-0016）。        1.2  實(shí)驗(yàn)分組  取小白鼠147只，隨機(jī)分成7個(gè)大組，每組均為21只，組1作為飼喂添加復(fù)合維生素的對(duì)照組，組2作為飼喂無復(fù)合維生素飼料的空白對(duì)照組，組3組7作為飼喂添加比例不同的沙棘粉飼料實(shí)驗(yàn)組，小鼠均單籠飼養(yǎng)4周。        1.3  飼喂劑量及配方  每日投喂足量飼料和水，各組飼料配方如表1。表1  各組配方成分表  （%）    

6、1.4  LDH活力、BLA、MG、LG含量測(cè)試  抗疲勞實(shí)驗(yàn)前，從每組取小鼠3只，眼眶放血制血清送檢，測(cè)試乳酸脫氫酶（LDH）活力、肌糖原（MG）和肝糖原（LG），LDH活力，參數(shù)King氏法測(cè)定2。        1.5  抗疲勞實(shí)驗(yàn)  抗疲勞試驗(yàn)依陳奇方法3，將飼喂4周的小組分別取12只按小鼠體重10%負(fù)重砝碼，于水溫2527、40cm深、直徑為20cm的標(biāo)本瓶中游泳，進(jìn)行抗疲勞試驗(yàn)。待其頭部沒入水下5秒時(shí)迅速撈起，記錄游泳時(shí)間，待其恢復(fù)30min后各取6只眼眶放血，制備血清，待送檢測(cè)試B

7、LA，各組剩余6只待其恢復(fù)60min后再眼眶放血，制血漿送檢測(cè)試BLA。        考慮到在對(duì)每一只鼠的每一次取血操作時(shí)，對(duì)動(dòng)物造成不同程度傷害性刺激，由此引起的抗疲勞強(qiáng)度無法保持一致，故而設(shè)計(jì)成每一個(gè)實(shí)驗(yàn)測(cè)定都分批取樣，進(jìn)行一次性采血。        1.6  小鼠腦組織MDA、GSH含量  取飼喂4周的小鼠，每組6只，斷頸處死，迅速取出大腦，用冰冷的PBS緩沖液制備10%腦勻漿，離心后取上清液進(jìn)行MDA和GSH含量測(cè)定。測(cè)定步驟按試劑盒說

8、明書進(jìn)行，MDA、GSH測(cè)定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。        2  結(jié)果        2.1  飼喂4周后各組小鼠LDH活力、MG、LG與BLA值  見表2。飼喂4周后各組小鼠血液指標(biāo)初始值，各組取6只小鼠眼眶測(cè)試MG、LG、BLA和LDH，因這批動(dòng)物取自抗疲勞動(dòng)物之前，故稱為初始數(shù)值，表2為測(cè)試結(jié)果。表2  各組小鼠LDH活力、MG、LG與BLA初始值  (x±s)注：表中不同組的相同指標(biāo)中，*

9、表示差異有顯著性；*表示差異有非常顯著性    由表2統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可知，g3g5沙棘粉組的小白鼠，其MG和LG含量均顯著大于空白組(P<0.01)，其中維生素組也顯著大于空白組(P<0.01)；BLA含量各組差異無顯著性；g4g5沙棘粉組和維生素組的LDH活力均顯著大于空白組（P<0.01)，說明4%6%沙棘粉在提高小鼠的LDH活力方面達(dá)到維生素對(duì)照組效果。g6g7組變化不顯著，說明8%10%沙棘粉的效果不明顯。        2.2  抗疲勞及血乳酸指標(biāo)  各組隨機(jī)

10、取12只鼠，做抗疲勞實(shí)驗(yàn)，于其休息30min、60min兩個(gè)階段各取6只放血制血清測(cè)試BLA含量，各組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行均數(shù)差顯著性檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。表3  抗疲勞時(shí)間、30min與60min的BLA數(shù)值及其均數(shù)差檢驗(yàn)  (x±s)注：*表示差異有顯著性；*表示差異有非常顯著性由表3測(cè)試結(jié)果可推算：飼喂2%6%沙棘粉的小白鼠抗疲勞時(shí)間比對(duì)照組延長1.173.64min，且差異有非常顯著性（P<0.01)；與維生素組相比，不達(dá)顯著性，但維生素組的抗疲勞時(shí)間比空白對(duì)照組延長3.36min，且差異有非常顯著性（P<0.01)；抗疲勞運(yùn)動(dòng)后30min和60mi

11、n血乳酸含量4%6%組和維生素組，與對(duì)照組相比，差異有非常顯著性（P<0.01)。        2.3  血乳酸變異級(jí)差及其恢復(fù)速度  由于各組抗疲勞運(yùn)動(dòng)前的血乳酸含量初始值不同，故僅僅使用抗疲勞后30min和60min的血乳酸含量差異性還不足以說明動(dòng)物在疲勞運(yùn)動(dòng)后乳酸清除速度大小，因此依據(jù)表3與表2可推算各組血乳酸變異級(jí)差和恢復(fù)速度，見表4。 表4  抗疲勞后30min與60min血乳酸BLA濃度變異級(jí)差和恢復(fù)速度 注：BLA濃度變異級(jí)差：Bt-B0；恢復(fù)速度： (Bt2-B

12、t1)/(t2-t1)    2.4  各組小鼠腦組織MDA、GSH含量  灌喂沙棘油后各組小鼠腦組織MDA、GSH含量變化見表5。表5  灌喂沙棘油各組小鼠腦組織GSH及MDA含量  (x±s)注：*表示差異有顯著性；*表示差異有非常顯著性由表5可以看出，維生素組中，GSH的升高以及MDA的下降相對(duì)于空白組都有極其顯著的變化（P<0.01)。g4g5沙棘粉組的GSH的升高以及MDA的下降相對(duì)于空白組也有極顯著的變化，但其余各組變化均不明顯。    3  討論由文鏡等的

13、研究4可知，動(dòng)物疲勞后的BLA降低取決于LDH活力，肌糖原和肝糖原是運(yùn)動(dòng)能源。從表2可以看到，服用沙棘粉可以提高體內(nèi)糖原含量，從而使機(jī)體抗疲勞能力增強(qiáng)。在初始條件下，LDH活力及肌糖原和肝糖原的測(cè)試結(jié)果表明，2%6%沙棘粉在提高小鼠的LDH活力、肌糖原和肝糖原方面與復(fù)合維生素的效果差異無顯著性；從而也可說明飼喂適當(dāng)劑量沙棘粉的抗疲勞效果與復(fù)合維生素差異無顯著性。表3結(jié)果表明：飼喂2%6%沙棘粉劑量的小白鼠抗疲勞時(shí)間比對(duì)照組長，與飼喂復(fù)合維生素組的效果差異無顯著性，表明沙棘對(duì)提高小白鼠抗疲勞具有一定效果。劑量在8%10%時(shí)效果不明顯，可能為沙棘粉含量較高導(dǎo)致玉米粉含量下降引起。表4的推算結(jié)果則可

14、以說明疲勞后的2%6%沙棘粉組BLA下降比對(duì)照組快。由表5統(tǒng)計(jì)分析可得，飼喂4%6%沙棘粉及維生素的小白鼠腦組織GSH含量顯著高于對(duì)照組，MDA含量顯著低于對(duì)照組。說明沙棘粉對(duì)衰老小鼠具有抗衰老作用。沙棘是目前學(xué)術(shù)界發(fā)現(xiàn)的唯一能把經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益和社會(huì)效益集注于一身的作物，沙棘資源的開發(fā)利用研究正日益受到重視。在國際上，那些沒有野生沙棘資源分布的國家，如加拿大、美國、日本、南非等國，近年來對(duì)沙棘的研究也十分關(guān)注5。目前沙棘的開發(fā)產(chǎn)品主要為沙棘油，其保健功能研究正在被應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、保健食品、化妝品、航空航天醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。沙棘油占沙棘果實(shí)的2%5%，且提煉復(fù)雜，相比而言，沙棘汁占沙棘果的70%以上，

15、在生產(chǎn)沙棘油過程中，許多豐富的營養(yǎng)成分及生理活性物質(zhì)也富集于沙棘汁中。本實(shí)驗(yàn)充分的證明，適當(dāng)劑量的沙棘粉能夠?qū)?dòng)物體產(chǎn)生一定抗疲勞的作用和抗衰老的作用。因此，未來對(duì)沙棘的利用可以不再單單拘泥于沙棘油，沙棘的利用率也能得到大大的提高。我國沙棘總面積居世界各國之首，占世界沙棘總面積的95%6。如何開發(fā)利用如此豐富的沙棘資源用于造福人類健康生活仍需要進(jìn)一步地探索和    研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】    1  齊東梅.保健型沙棘果茶的研制. 沙棘，2001，14(1)： 2224.        2  King J. A routine method for the estimation of lactic dehydrogenase activity. J Med Lab Tech， 1959， 16295.        3  陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué). 北京：人民衛(wèi)生出版社，1994，624625.