實訓(xùn)項目六紅細(xì)胞計數(shù)檢查

1、國家高等職業(yè)教育畜牧獸醫(yī)專業(yè)教學(xué)資源庫實驗實訓(xùn)七 紅細(xì)胞計數(shù)檢查一、目的要求：紅細(xì)胞計數(shù)的操作方法及注意事項。二、設(shè)備材料：雞、或牛、兔、顯微鏡、血細(xì)胞計數(shù)板、紅細(xì)胞吸管（沙利氏吸血管）、血蓋片、0.85%的氯化鈉溶液、赫姆氏液、小試管、試管架、拭鏡紙、計數(shù)器。三、實驗內(nèi)容：紅細(xì)胞計數(shù)是指計算每升血液內(nèi)所含紅細(xì)胞的數(shù)目。紅細(xì)胞計數(shù)的方法有顯微鏡計數(shù)法、血沉管計數(shù)法、光電比色法、血細(xì)胞電子計數(shù)器計數(shù)法等。目前在獸醫(yī)臨床上使用最廣泛的是顯微鏡計數(shù)法（計數(shù)板法）。1、原理 血液經(jīng)稀釋后，充入血細(xì)胞計數(shù)板，用顯微鏡觀察，計數(shù)一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)并換算成每l內(nèi)的數(shù)目。2、器材（1）改良式血細(xì)胞計數(shù)板：臨

2、床上最常用的是改良紐巴（Neubauer）氏計數(shù)板，它是由一塊特制的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中間有橫溝將其分為三個狹窄的平臺，兩邊的平臺較中間的平臺高0.1mm。中央平臺又有一縱溝相隔，其上各刻有一個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分為9個大方格，每一大方格面積為1.0mm2，深度為0.1mm；四角每一大方格劃分為16個中方格，為計數(shù)白細(xì)胞用。中央一大方格用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，共計400個小方格，此為紅細(xì)胞計數(shù)之用（圖7-6、7-7）。（2）血蓋片：專用于計數(shù)板的蓋玻片呈長方形，厚度為0.4mm。（3）沙利（shali）氏吸血管或紅細(xì)胞稀釋管，5ml吸管、中試管。（4）顯微鏡

3、，計數(shù)器等。圖7-6 血細(xì)胞計數(shù)板構(gòu)造圖7-7 記數(shù)室的劃格（5）稀釋液：0.85氯化鈉溶液。3、方法試管稀釋法 用5ml吸管吸取紅細(xì)胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至20l刻度處（或吸血至刻度10處，紅細(xì)胞稀釋液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數(shù)次，以洗出沙利氏管內(nèi)粘附的血細(xì)胞，然后試管口加塞，顛倒混合數(shù)次，再用毛細(xì)吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計數(shù)室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計數(shù)室中。注意充液不可過多或過少，過多則溢出而流入兩側(cè)槽內(nèi)，過少則計數(shù)池中形成氣泡，致使無法計數(shù)。計數(shù)時，先用低倍鏡，光線要稍暗些，

4、找到計數(shù)室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在此中央大方格內(nèi)選擇四角與最中的五個中方格（或用對角線的方法數(shù)五個中方格），每個中方格有16個小方格，所以共計數(shù)80個小方格。計數(shù)時注意壓在左邊雙線上的紅細(xì)胞計在內(nèi)，壓在右邊雙線上的紅細(xì)胞則不計數(shù)在內(nèi)；同樣，壓在上線的計入，壓在下線的不計入，此所謂“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的計數(shù)法則（圖7-8、7-9）。圖7-9 紅細(xì)胞記數(shù)順序圖7-8 記數(shù)室充液法       4、計算X/80×400×200×10=1mm3血液中紅細(xì)胞個數(shù)。X5個中方格（即

5、80個小方格）內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。400一個大方格，即1mm2面積內(nèi)共有400個小方格。200稀釋倍數(shù)。10血蓋片與計數(shù)板的實際高度是1/10mm，乘10后則為1.0mm。上式簡化后為X×10，000=紅細(xì)胞數(shù)/mm35、注意事項（1）紅細(xì)胞計數(shù)是一項細(xì)致的工作，稍有粗心大意，就會引起計數(shù)不準(zhǔn)。關(guān)鍵是防凝、防溶、取樣正確。取抗凝血時，抗凝劑的量要合適，不可過少使血液部分呈小塊凝集；采血時應(yīng)注意及時將抗凝劑與血液混勻。防溶是指防止過分振搖而使紅細(xì)胞溶解，或是器材用水洗后未用生理鹽水沖洗而發(fā)生溶血，使計數(shù)結(jié)果偏低。取樣正確是指吸血10或20l一定要準(zhǔn)確，吸血管外的血液要擦去，吸血管內(nèi)的血液要

6、全部洗入稀釋液中，稀釋液的用量要準(zhǔn)；充液量不可過多或過少，過多可使血蓋片浮起，過少則計數(shù)室中形成小的空氣泡，使計數(shù)結(jié)果偏低甚至無法計數(shù)。此外，顯微鏡臺未保持水平，使計數(shù)室內(nèi)的液體流向一側(cè)，這些操作上的錯誤均可使計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。（2）器材清洗方法：沙利氏吸血管或試管，每次用完后，先用清水吸吹數(shù)次，然后用蒸餾水、酒精、乙醚，按次序分別吸吹數(shù)次，干后備下次使用。血細(xì)胞計數(shù)板用蒸餾水沖洗后，用絨布輕輕擦干即可，切不可用粗布擦試，也不可用酒精、乙醚等溶液沖洗。6、正常值 健康家畜除山羊的紅細(xì)胞數(shù)較多外，其他家畜的紅細(xì)胞數(shù)約600800萬/l。7、臨床意義 由于血紅蛋白是紅細(xì)胞的內(nèi)含物，占紅細(xì)胞重量的32

7、%36%，或紅細(xì)胞干重的96%，因此紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白含量的增多或減少通常是平行的相對關(guān)系。但在某些類型貧血時，如低色素貧血時，紅細(xì)胞與血紅蛋白降低的程度常不一致，血紅蛋白的降低比紅細(xì)胞明顯。故同時測定紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白量以作比較，對診斷更有實際意義。（1）紅細(xì)胞增多：每升血液中紅細(xì)胞數(shù)及血紅蛋白含量高于正常參考值上限時，稱紅細(xì)胞和血紅蛋白增多?？煞譃橄鄬π栽龆嗪徒^對性增多兩類。相對性增多：這是由于血漿中水分丟失，血液濃縮所致。見于嚴(yán)重嘔吐、腹瀉、大量出汗、急性胃腸炎、腸便秘、腸變位、瘤胃積食、瓣胃阻塞、真胃阻塞、滲出性胸膜炎、滲出性腹膜炎、日射病與熱射病、大面積燒傷等。絕對性增多：這是由于紅

8、細(xì)胞增生活躍的結(jié)果。按發(fā)病原因分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類：原發(fā)性紅細(xì)胞增多：原發(fā)性紅細(xì)胞增多又稱真性紅細(xì)胞增多癥，是一種原因不明的骨髓增生性疾病，目前認(rèn)為是多能干細(xì)胞受累所致。其特點是紅細(xì)胞持續(xù)性顯著增多，全身總血量也增加，見于馬、牛、犬和貓。繼發(fā)性增多：是非造血系統(tǒng)疾病，發(fā)病的主要環(huán)節(jié)是血中紅細(xì)胞生成素增多。A紅細(xì)胞生成素代償性增加：因血氧飽和度減低，導(dǎo)致組織缺氧，紅細(xì)胞生成素增加，骨髓制造紅細(xì)胞的機能亢進(jìn)而引起紅細(xì)胞增多。紅細(xì)胞增多的程度與缺氧程度成正比。見于高原適應(yīng)、慢性阻塞性肺病、先天性心臟病（如肺動脈狹窄、動脈導(dǎo)管未閉、法樂氏四聯(lián)綜合癥）、血紅蛋白?。ㄈ绺哞F血紅蛋白癥、硫化血紅蛋白癥）。

9、B紅細(xì)胞生成素病理性增加：紅細(xì)胞生成素增加與腎臟疾病或腫瘤有關(guān)，如腎囊腫、腎積水、腎血管缺陷、腎癌、腎淋巴肉瘤、小腦血管瘤、子宮肌瘤、肝癌等。（2）紅細(xì)胞數(shù)減少：見于貧血。每升血液中紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量及紅細(xì)胞壓積容量低于正常參考值下限時，稱為貧血。按病因可將貧血分為4類：失血性貧血：慢性失血性貧血見于胃潰瘍、球蟲病、鉤蟲病、捻轉(zhuǎn)胃蟲病、螨病、維生素C和凝血酶原缺乏等疾病。急性失血性貧血見于丙酮芐烴香豆素中毒、草木樨中毒、脾血管肉瘤、犬和貓自體免疫性血小板減少性紫癜、手術(shù)和外傷等。溶血性貧血：見于牛巴貝西蟲病、牛泰勒蟲病、鉤端螺旋體病、馬傳染性貧血；綿羊、豬、犢牛的甘藍(lán)中毒和野洋蔥中毒；新生騾駒溶血病、犬自體免疫性溶血性貧血等。營養(yǎng)性貧血：見于蛋白質(zhì)缺乏，銅、鐵、鈷等微量元素缺乏，維生素B1、B2、B6、B12、葉酸、煙酸缺乏等。再生障礙性貧血：見于輻射病、蕨中毒、馬穗狀葡萄菌毒病、梨孢鐮刀菌毒病、羊毛圓線蟲病、犬歐利希文病、貓傳染性泛白細(xì)胞減少癥、慢性粒細(xì)胞白血病、淋巴細(xì)胞白血病、垂體