全國病媒生物抗藥性監(jiān)測方案(試行)4

1、全國重要病媒生物抗藥性監(jiān)測(試行方案1 背景 (21.1 抗藥性監(jiān)測在疾病預(yù)防控制中的重要性 (21.2 抗藥性概況 (21.3 抗藥性監(jiān)測的基礎(chǔ)條件 (31.3.1 疫情控制的需要 (31.3.2 人民生活和社會與經(jīng)濟(jì)的需要 (31.3.3 已有的工作基礎(chǔ) (41.4 當(dāng)前抗藥性監(jiān)測中存在的問題 (41.4.1 專業(yè)技術(shù)人員缺乏 (41.4.2 測定方法不統(tǒng)一 (41.4.3 抗藥性監(jiān)測結(jié)果的利用率低 (42 監(jiān)測目的 (52.1 掌握抗藥性水平,指導(dǎo)防制 (52.2 制定控制預(yù)案,提高疾控能力 (53 監(jiān)測的組織、分工和職責(zé) (53.1 監(jiān)測網(wǎng)絡(luò) (53.2 分工和職責(zé) (53.2.1 中

2、國疾病預(yù)防控制中心傳染病所 (53.2.1 省(自治區(qū),直轄市疾病預(yù)防控制部門 (54 監(jiān)測內(nèi)容和方法 (54.1 蚊蟲抗藥性監(jiān)測 (54.1.1 靶標(biāo)蚊蟲及監(jiān)測點的選擇 (54.1.2 監(jiān)測時間 (64.1.3 試蟲采集 (64.1.4 監(jiān)測藥劑 (64.1.5 設(shè)施和器材 (64.1.6 監(jiān)測方法 (64.1.6.1 幼蟲浸漬法 (64.1.6.2 成蚊監(jiān)測法 (74.1.7 統(tǒng)計與計算 (74.2 家蠅抗藥性監(jiān)測 (74.2.1 監(jiān)測點的選擇 (74.2.2 試蟲采集 (74.2.3 監(jiān)測藥劑 (74.2.3 設(shè)施和器材 (84.2.4 監(jiān)測方法 (84.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 (8附錄1淡色

3、庫蚊對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 (9附錄2 白紋伊蚊對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 (10附錄3中華按蚊對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 (11附錄4 家蠅對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 (12附錄5 中華按蚊測試基本情況記錄 (13附錄6 測試殺蟲劑的推薦使用濃度 (13附錄7 推薦使用敏感基線 (13附錄8 成蚊測定用藥紙的計算 (13附錄9 關(guān)于化學(xué)殺蟲劑對昆蟲的毒力回歸線統(tǒng)計問題 (141. 使用國際通用的統(tǒng)計軟件POLO-PC (142. 使用具有我國知識產(chǎn)權(quán)的DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) (15附錄10 關(guān)于敏感基線的現(xiàn)狀和設(shè)想 (161 建立敏感性基線的重要性 (162 昆蟲產(chǎn)生

4、敏感性差異的原因 (163 如何建立敏感基線 (17根據(jù)衛(wèi)生部2007年衛(wèi)生應(yīng)急工作要點中“提高衛(wèi)生應(yīng)急能力”的精神,和衛(wèi)生部發(fā)布的2007年衛(wèi)生工作要點中“大力開展愛國衛(wèi)生運動”的要求,落實中國疾病預(yù)防控制中心的關(guān)于重要病媒生物年度工作計劃,特制定本方案。方案的實施能夠指導(dǎo)和推進(jìn)“十一五”期間我國重要病媒生物控制水平、提升突發(fā)公共衛(wèi)生事件中病媒生物控制技術(shù)支撐水平、規(guī)范我國重要病媒生物抗藥性監(jiān)測方法。抗藥性是影響全球公共衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)等領(lǐng)域中有害生物控制的重要問題,是影響媒介生物性傳染病疾病預(yù)防控制的關(guān)鍵因素。抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展與藥劑的使用有非常密切的關(guān)系。開展和加強(qiáng)重要病媒生物抗

5、藥性監(jiān)測,可以指導(dǎo)化學(xué)藥劑的科學(xué)合理使用,提高控制效果,延緩抗藥性發(fā)展速度,減少人畜中毒事件的發(fā)生,保護(hù)有益生物,維持生態(tài)平衡。1 背景1.1 抗藥性監(jiān)測在疾病預(yù)防控制中的重要性目前,我國登革熱、瘧疾、鼠疫、腎綜合征出血熱、腸道傳染病(如霍亂、細(xì)菌性痢疾等疫區(qū)處理中,化學(xué)控制是其媒介生物控制的主要措施。通過對常用化學(xué)藥劑的敏感性調(diào)查和抗藥性動態(tài)監(jiān)測,可以選擇并儲備適宜的控制藥劑,針對疫情種類、疫區(qū)的病媒生物種類、疫情的發(fā)生季節(jié)和生境等背景材料制定“病媒生物應(yīng)急控制預(yù)案”,提高我國在傳染病預(yù)防控制中病媒生物控制能力。1.2 抗藥性概況據(jù)統(tǒng)計,全球幾乎所有病媒生物(如蚊類、蠅類、鼠類、蚤類等都有產(chǎn)

6、生抗藥性的報道。據(jù)統(tǒng)計,全世界已經(jīng)有90種蚊蟲對一種或幾種殺蟲劑產(chǎn)生抗性,其中按蚊51種、庫蚊20種、伊蚊19種。51種按蚊中,對DDT產(chǎn)生抗性的有49種,有機(jī)磷抗性24種,氨基甲酸酯14種,擬除蟲菊酯10種。產(chǎn)生抗性的庫蚊有20種。家蠅的抗藥性問題在我國十分突出,對DDT、六六六等有機(jī)氯類,對敵百蟲、敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱等有機(jī)磷類,對殘殺威等有機(jī)磷類,對二氯苯醚菊酯、胺菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯等擬除蟲菊酯類藥劑,都已經(jīng)產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。1978年,全國蚊蟲抗性調(diào)查顯示:淡色庫蚊對有機(jī)氯類殺蟲劑產(chǎn)生抗性,且無明顯的區(qū)域性差異;淡色庫蚊對有機(jī)磷類殺蟲劑抗性在我國的東部高于西部。中華按蚊

7、對DDT的抗性現(xiàn)象發(fā)生普遍。在1984-1986年的調(diào)查顯示,淡色庫蚊對擬除蟲菊酯類殺蟲劑普遍產(chǎn)生抗性。在二十世紀(jì)90年代,淡色庫蚊對溴氰菊酯的抗藥性趨勢顯示,東南沿海高于華北和東北,城市高于農(nóng)村。目前,淡色庫蚊、白紋伊蚊、家蠅、中華按蚊、三帶喙庫蚊在我國多數(shù)地區(qū)已經(jīng)產(chǎn)生了不同程度的抗藥性,印鼠客蚤在廣東省、云南省產(chǎn)生抗藥性,褐家鼠、黃胸鼠、小家鼠在我國的多數(shù)分布區(qū)也對抗凝血劑產(chǎn)生抗性。鑒于目前媒介生物性傳染病發(fā)生的嚴(yán)峻形勢,必須加強(qiáng)我國主要病媒生物抗藥性監(jiān)測工作。1.3 抗藥性監(jiān)測的基礎(chǔ)條件1.3.1 疫情控制的需要媒介生物性傳染病占我國法定傳染病的1/3,控制病媒是控制這類疾病的有效措施之

8、一,化學(xué)藥劑是快速降低媒介密度的必須手段,其依據(jù)是控制預(yù)案。了解當(dāng)?shù)夭∶綄ΤＳ没瘜W(xué)藥劑的敏感程度、掌握有效藥劑種類及其使用技術(shù)、制定針對性的控制預(yù)案,以應(yīng)對可能出現(xiàn)的疫情。1.3.2 人民生活和社會與經(jīng)濟(jì)的需要隨著社會和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們的健康意識增強(qiáng)?？刂颇軌蛴绊懭祟惤】岛蜕畹牟∶缴?倍受各界人士的關(guān)注。無論在大型活動(如奧運會、亞運會、世博會等、大型工程(如三峽工程、南水北調(diào)、青藏鐵路等,還是在市民群眾的出游和日常生活中,對公共衛(wèi)生要求更高,對環(huán)境保護(hù)的意識更強(qiáng),這些都要求我們既要控制有害生物,又要綠色環(huán)保,抗藥性調(diào)查可以使我們科學(xué)用藥、少用藥。1.3.3 已有的工作基礎(chǔ)由于病媒生物控制

9、在我國疾病預(yù)防控制中的重要作用,國家對此非常重視,全國愛國衛(wèi)生委員會是我國的病媒生物控制的積極推動者,在此平臺上開展了一系列工作,如于二十世紀(jì)70年代末進(jìn)行的全國蚊、蠅、鼠的抗藥性監(jiān)測,在全國范圍廣泛進(jìn)行,基本摸清了當(dāng)時的抗藥性現(xiàn)狀和發(fā)展動態(tài),奠定了抗藥性監(jiān)測的理論基礎(chǔ)和本底資料,同時也培養(yǎng)了大量的專業(yè)技術(shù)人員。針對重要媒介生物性傳染病和具有嚴(yán)重騷擾性的媒介,進(jìn)行抗藥性調(diào)查。調(diào)查以WHO的測定方法為基礎(chǔ),統(tǒng)一檢測方法,成果與信息共享。與此同時,也進(jìn)行抗性機(jī)制、抗性遺傳規(guī)律、抗藥性治理策略等的研究,對我國疾病預(yù)防控制和環(huán)境衛(wèi)生的改善起到積極作用。另外,在全國重要病媒生物監(jiān)測正在運行,在該平臺的支

10、持下,使對抗藥性的監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)化成為可能,可以利用已有的人才、物資和系統(tǒng)資源,豐富各級疾控系統(tǒng)的病媒生物預(yù)防控制工作,為了實現(xiàn)病媒生物可持續(xù)控制,提高疾控能力。1.4 當(dāng)前抗藥性監(jiān)測中存在的問題1.4.1 專業(yè)技術(shù)人員缺乏二十世紀(jì)90年代,由于工作經(jīng)費緊張和工作重心的轉(zhuǎn)移,全國抗藥性協(xié)作中斷,使一些從事抗藥性監(jiān)測的專業(yè)技術(shù)人員離開原工作崗位,使病媒生物控制的發(fā)展受到極大損失。1.4.2 測定方法不統(tǒng)一抗藥性的檢測和研究,主要集中在各級疾控機(jī)構(gòu)、研究所、大學(xué)等領(lǐng)域,通過對近20多年發(fā)表的文獻(xiàn)統(tǒng)計,出現(xiàn)試驗方法不一致,即使相同的方法,試驗條件不同、試蟲不統(tǒng)一、供試藥劑各異、死亡率判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致、數(shù)據(jù)統(tǒng)

11、計方法各異等現(xiàn)象,致使獲得資料間可比性差,不能實現(xiàn)資料的共享。1.4.3 抗藥性監(jiān)測結(jié)果的利用率低對病媒生物的監(jiān)測是為了指導(dǎo)用藥,科學(xué)合理用藥,進(jìn)而制定抗性治理方案、疫情控制預(yù)案,最終為疾病預(yù)防控制提供理論依據(jù)。由于抗藥性的發(fā)生有區(qū)域性,不同的病媒生物、不同的藥劑類型其抗性機(jī)制不同,只有充分利用抗藥性監(jiān)測和研究的結(jié)果,實現(xiàn)成果共享,才能提供資料的利用率,更好地為疾控服務(wù)。2 監(jiān)測目的2.1 掌握抗藥性水平,指導(dǎo)防制掌握我國重要病媒生物對主要化學(xué)藥劑的抗性水平,了解抗性動態(tài)和發(fā)展規(guī)律。2.2 制定控制預(yù)案,提高疾控能力為病媒生物控制中藥劑的選擇和使用提供科學(xué)依據(jù);針對不同疫情、不同地區(qū)、不同病媒

12、生物制定藥劑的儲備和使用預(yù)案。3 監(jiān)測的組織、分工和職責(zé)3.1 監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)以中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所媒介生物控制室為依托,以各省(自治區(qū),直轄市為監(jiān)測試點單位,監(jiān)測點由監(jiān)測試點設(shè)立。3.2 分工和職責(zé)3.2.1 中國疾病預(yù)防控制中心傳染病所負(fù)責(zé)全國重要病媒生物抗藥性監(jiān)測方案(以下簡稱方案的制定、組織、協(xié)調(diào)和督導(dǎo);承擔(dān)抗藥性監(jiān)測的技術(shù)指導(dǎo)和培訓(xùn),提供監(jiān)測藥劑的標(biāo)準(zhǔn)樣品,負(fù)責(zé)監(jiān)測信息的收集、整理、分析、總結(jié)和反饋;并進(jìn)行監(jiān)測工作的督查和質(zhì)量控制。3.2.1 省(自治區(qū),直轄市疾病預(yù)防控制部門按照方案要求,落實開展轄區(qū)內(nèi)監(jiān)測工作;確定一名主管領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)協(xié)調(diào),督促檢查監(jiān)測方案落實;按時上報、分

13、析監(jiān)測結(jié)果。4 監(jiān)測內(nèi)容和方法4.1 蚊蟲抗藥性監(jiān)測4.1.1 靶標(biāo)蚊蟲及監(jiān)測點的選擇淡色庫蚊/致倦庫蚊(幼蟲、中華按蚊(成蟲、白紋伊蚊(幼蟲為監(jiān)測對象。各監(jiān)測試點選擇依據(jù):(1當(dāng)?shù)孛浇樯镄詡魅静〉陌l(fā)生情況;(2相關(guān)疾病媒介生物的種類和發(fā)生強(qiáng)度;(3病媒生物對人的騷擾程度等選擇。監(jiān)測點要考慮地理分布(經(jīng)緯度、生境,每省選兩個監(jiān)測點進(jìn)行。監(jiān)測點要相對固定。4.1.2 監(jiān)測時間在當(dāng)?shù)氐陌l(fā)生高峰期,每年進(jìn)行一次,年度間的測定時間相對固定。4.1.3 試蟲采集淡色庫蚊:雌成蚊100頭以上,或幼蟲300頭以上,或淡色庫蚊卵塊50個以上,以居民區(qū)為主(依據(jù):自然情況下,昆蟲抗藥性的等位基因頻率為10-6

14、10-8,抗性個體百分率為10-1。白紋伊蚊:幼蟲采集在150頭以上,成蚊誘集在30頭以上(伊蚊捕獲成蚊的難度較大。中華按蚊:在牲口棚內(nèi)采集成蚊100頭以上、或在稻田、積水等處采集300頭以上幼蟲?？顾幮员O(jiān)測,在采集試蟲的當(dāng)代或室內(nèi)飼養(yǎng)的12代進(jìn)行。4.1.4 監(jiān)測藥劑擬除蟲菊酯類溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯;有機(jī)磷類敵敵畏、毒死蜱、倍硫磷;氨基甲酸酯類殘殺威。根據(jù)當(dāng)?shù)赜盟幥闆r進(jìn)行藥劑的選擇。(需要好好討論4.1.5 設(shè)施和器材配備抗性監(jiān)測實驗室,有測試室或光照培養(yǎng)箱(可以調(diào)解溫濕度和光周期,蚊蟲飼養(yǎng)室,有通風(fēng)櫥、烘箱、防蚊驅(qū)避劑、防蚊罩等防護(hù)用品,誘蚊燈、吸蚊器、采集勺等蚊蟲的采集器具。有電子

15、天平(感量為0.1毫克,200微升、1000微升移液器,200ml燒杯等。有計算機(jī)、數(shù)據(jù)處理軟件。4.1.6 監(jiān)測方法4.1.6.1 幼蟲浸漬法以4齡初幼蟲為測試對象,以丙酮將原藥稀釋,將待測藥劑配置57個系列濃度,即在200ml的燒杯中加入99ml脫氯水和1ml相應(yīng)的藥液(最后一次稀釋用水為溶劑,加入30頭試蟲,以200ml脫氯水為對照。試蟲在25、相對濕度為80±10%的條件下放置24小時,調(diào)查并記錄各處理的死亡數(shù)。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn),用銳器觸動不能逃逸的幼蟲為死亡。試驗重復(fù)3次。對照死亡率超過20%,試驗無效。4.1.6.2 成蚊監(jiān)測法藥紙的制備將白油和乙醚(AR按12比例混合作為溶

16、劑。殺蟲劑按需要量溶解其中,配成一定濃度(附錄4,吸取2.14毫升均勻滴于16厘米×12.5厘米的新華1號濾紙或其他質(zhì)量相近的濾紙上。2小時后待乙醚完全揮發(fā)即可應(yīng)用。藥紙制備后應(yīng)在6小時內(nèi)使用,如需要可以把l0-20張藥紙用大小相同的玻璃板夾緊,用橡皮膏把間縫封實,再裝入黑紙袋中,在較低溫下大約可以存放一個月,但一經(jīng)開啟即不能儲存,必須在兩三天內(nèi)用完,如果已經(jīng)裝入接觸筒,就只能用一次。先把恢復(fù)筒接裝在放隔板的一面,用吸蚊器吸取12只雌蚊吹入筒內(nèi),然后關(guān)閉隔板,在隔板另一面裝上已襯貼藥紙的接觸筒,把隔板抽開,將恢復(fù)筒內(nèi)蚊蟲輕吹入接觸筒,迅速關(guān)上隔板,將筒平放,即開始計算接觸時間,完畢后

17、再抽開隔板將蚊蟲再吹入恢復(fù)筒,關(guān)上隔板,將筒直放,用浸有5%葡萄糖水的棉花團(tuán)置于尼龍網(wǎng)上。室溫27±1,無論測定時間的長短,皆從接觸完畢后24小時計算死亡率。為了便于蚊蟲在恢復(fù)筒內(nèi)停留,可用白紙襯貼在筒內(nèi)上端l/2或2/3,空出下端,以便于觀察死亡掉下的蚊蟲。每劑量應(yīng)至少測40只蚊,實驗重復(fù)3次。4.1.7 統(tǒng)計與計算用POLO軟件或DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,獲得致死中濃度(LC50值及其95%置信限,LC90及其95%置信限,毒力回歸線的斜率b值。4.2 家蠅抗藥性監(jiān)測4.2.1 監(jiān)測點的選擇監(jiān)測點要考慮地理分布(經(jīng)緯度、生境,每省選兩個監(jiān)測點進(jìn)行。監(jiān)測點要相對固定。4.2.2 試蟲

18、采集成蠅100頭以上、幼蟲300條以上,以居民區(qū)為主。4.2.3 監(jiān)測藥劑擬除蟲菊酯類溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯;有機(jī)磷類敵敵畏、辛硫磷、毒死蜱;氨基甲酸酯類殘殺威。4.2.3 設(shè)施和器材有抗性測試室或光照培養(yǎng)箱,有能夠控制溫濕度的家蠅飼養(yǎng)室。電子天平(感量0.1毫克,200微升、1000微升移液器,0.050.1µL微量點滴器;500mL燒杯;飼養(yǎng)缸;養(yǎng)蠅籠。在溫度為25±1,相對濕度7080%的條件下飼養(yǎng),成蠅羽化后供給奶粉和白糖(比例為1:1。4.2.4 監(jiān)測方法用丙酮(分析純將原藥配成57個系列濃度。取35日齡,體重為18 20mg的家蠅成蟲。把含有乙醚(分析純的棉

19、球?qū)⒅感喂芸诙氯?、輕度麻醉后,選健康雌蟲,每處理30只置于平皿中,用點滴器(類型將藥液按濃度由低到高的順序,點滴于中胸背板上,放入加有少量奶粉的500 mL潔凈的燒杯中,以5mL燒杯內(nèi)放置海綿供水,在溫度為25±1,相對濕度60%70%的條件下飼養(yǎng)24 h。記錄各處理的死亡蟲數(shù)。對照以丙酮處理,死亡率超過20%時需要重新進(jìn)行。試驗重復(fù)3次。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn):凡腹部上翻,六足抽搐,用探針觸之不能翻身爬行者判為死亡。4.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計用POLO軟件或DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,獲得致死中濃度(LC50值及其95%置信限,LC90及其95%置信限,毒力回歸線的斜率b值。附錄1淡色庫蚊對化學(xué)藥劑的

20、抗藥性測定原始記錄表 附錄2 白紋伊蚊對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 附錄3中華按蚊對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 附錄4 家蠅對化學(xué)藥劑的抗藥性測定原始記錄表 附錄5 中華按蚊測試基本情況記錄1.測定人,單位:。測定日期:年月日。2.試蟲來源:省(市、自治區(qū)、區(qū)(縣、街道(村、生境。試蟲名稱(中文,(拉丁文 , 性別 ,齡期 ,生理狀態(tài):吸血、未吸血、半懷孕、懷孕。測試殺蟲劑:藥劑來源,有效期年月日,藥劑的儲存條件。3.背景資料殺蟲劑使用: 處理蚊帳;室內(nèi)滯留噴灑;使用滅幼劑;農(nóng)田用藥.試蟲的采集方式:幼蟲,F1后代,人誘法誘捕,動物誘法誘捕,室內(nèi)捕獲,燈誘法、其它。如果采集幼蟲注明:稻

21、田、雨水坑、河邊、生活污水、其它。附錄6 測試殺蟲劑的推薦使用濃度附錄7 推薦使用敏感基線附錄8 成蚊測定用藥紙的計算WH0對紙上的劑量標(biāo)準(zhǔn)系以殺蟲劑在白油中的濃度計算。如混合液的l%實際為0.3 3%。按照這種方法,每平方米濾紙滴混合液應(yīng)為107.1毫升,乙醚全部揮發(fā)后僅殘留白油3 5.7毫升,如含藥量1%,即為0.357克。濾紙的面積定為16×12.5=200平方厘米,為1平方米的1/50。WH0多年來皆以殺蟲劑在溶劑中的百分率為劑量標(biāo)準(zhǔn),如溴氰菊酯的標(biāo)準(zhǔn)劑量為0.025%,實際每平方米藥量0.00 8 9克。WH 0專家委員會認(rèn)為百分率與墻面藥量無直接聯(lián)系,建議今后使用“克/平

22、方米的計量單位。附錄9 關(guān)于化學(xué)殺蟲劑對昆蟲的毒力回歸線統(tǒng)計問題建議使用對大家所公認(rèn)的統(tǒng)計軟件,這樣可以大大提高計算速度,減少出錯的機(jī)會?；揪哂锌焖佟⒑啽?、準(zhǔn)確的特點。常用的統(tǒng)計軟件有POLO-PC, SAS,BA,DPS等多種。1. 使用國際通用的統(tǒng)計軟件POLO-PCLeOra Software POLO-PC, Berkeley, CalifRussel R, Robertson J L, Savin N E. POLO: a new computer program for probit analysis. Bull Entomol Soc Am. 1977;23:202213.目前

23、我們一直使用其它單位給的軟件,其中有一些參數(shù)不能得到,我們正在連續(xù)一些國際有人,爭取盡快由正規(guī)渠道購買正版軟件。例 1=F1*deltamethrin0 130 30.02 60 600.01 60 510.005 120 900.01125 60 600.0075 60 590.003 60 420.002 60 180.0056 30 190.00375 30 140.0025 30 110.0017 30 40.001 30 1Index of significance for potency estimation:g(.90=.08179 g(.95=.12361 g(.99=.250

24、08Effective Dosesdose limits 0.90 0.95 0.99LD10 deltamet .00122 lower .00073 .00061 .00034upper .00166 .00175 .00196LD50 deltamet .00309 lower .00248 .00232 .00191upper .00367 .00382 .00417LD90 deltamet .00782 lower .00632 .00607 .00557upper .01088 .01213 .01701F1deltamet subjects 630 controls 130lo

25、g(L=-282.4 slope=3.178+-.250 nat.resp.=.021+-.012heterogeneity=4.01 g=.124LD10=.001 limits: .001 to .002LD50=.003 limits: .002 to .004LD90=.008 limits: .006 to .0122. 使用具有我國知識產(chǎn)權(quán)的DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)統(tǒng)計結(jié)果和POLO的結(jié)果相近,經(jīng)過我們對試驗數(shù)據(jù)核實沒有顯著差異,即計算的LC50及其95%置信限基本重疊。例 2 唐啟義,馮明光著。實用統(tǒng)計分析及其PDS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。科學(xué)出版社,2002。附錄 10 關(guān)于敏感基線的現(xiàn)狀和設(shè)

26、想 1 建立敏感性基線的重要性 基線是衡量抗藥性強(qiáng)弱的尺度，基線不統(tǒng)一就不能在全國范圍內(nèi)進(jìn)行比較、 分析。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)，很難找到一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。以淡色庫蚊對溴氰菊酯的使用 的敏感基線為例： 程璟俠等使用淡色庫蚊德敏感品系其 LC50 為 0.24 g/mL（程璟俠等， 1998） ；本實驗室長期保存的敏感品系 LC50 為 0.987g/mL，天津衛(wèi)生防疫站使 用的淡色庫蚊德敏感品系其 LC50 為 2.7g/mL；中國科學(xué)院上海昆蟲所淡色庫 蚊敏感品系的 LC50 值為 0.1g/mL。南京醫(yī)科大學(xué)朱昌亮實驗室，引入中國科 學(xué)院上海昆蟲研究所后已在室內(nèi)傳 70 余代，檢測對溴氰菊酯的半數(shù)致死

27、濃度 (LC50為 0.8g/L。 問題：1、溶劑對試驗結(jié)果的影響。2、溫度、濕度、光周期對試驗結(jié)果的影 響。3、試蟲齡期不同。 敏感基線是相對的，如何建立一系列有代表性的敏感基線，將是我們急待解 決的問題。研究目的不同可以基線的表現(xiàn)不同。如抗藥性機(jī)制研究中使用的敏感 基線，一般使用未選育的相同種群的毒力回歸線為基線，再使用一個大家公認(rèn)的 敏感基線，盡量使其遺傳背景一致。為了進(jìn)行質(zhì)量控制，全國性的抗藥性監(jiān)測， 敏感基線要有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。 2 昆蟲產(chǎn)生敏感性差異的原因 抗藥性的主要特點是分布上的區(qū)域性、抗性機(jī)制和及其遺傳機(jī)制的多樣性。 其主要原因有： （1）抗藥性遺傳多樣性豐富。即使在沒有接觸任何藥

28、劑的情況下，也會對 同種殺蟲劑表現(xiàn)出約十倍抗藥性差異。 （例 1） 。 （2）藥劑使用歷史和交互抗性的影響。 由于用藥背景不同，各地蚊蟲對淡色庫蚊表現(xiàn)出不同的敏感性水平，如河北 省冀州市對溴氰菊酯的敏感性資源保留較好， 白淑萍等 1999 年發(fā)表的文章顯示， 其敏感性比實驗室的敏感品系還要敏感，其 LC50 為 0.02g/mL。 藥劑的使用背景可以影響一個種群對殺蟲劑的抗藥性水平。如 DDT 與擬除 蟲菊酯類殺蟲劑有交互抗性，二十實際 80 年代出的測定表明，在很多沒有使用 16 過擬除蟲菊酯的地區(qū)也有抗藥性發(fā)生。 （3）殺蟲劑的作用機(jī)制多樣，昆蟲對藥劑的敏感性程度由其行為習(xí)性、生 理生化和

29、遺傳物質(zhì)的不同所綜合決定的。即使是核酸水平的差異不大，還有細(xì)胞 質(zhì)水平的差異（例 2） 。 3 如何建立敏感基線 理論上，敏感基線是沒有使用某種殺蟲劑，或未使用具有類似作用機(jī)制殺蟲 劑的前提下，采集靶標(biāo)生物進(jìn)行敏感性測定的結(jié)果。除了對新開發(fā)的藥物以外， 盡量尋找受藥劑污染少的區(qū)域，獲得敏感品系。在我國的不同區(qū)域，包括各實驗 室種群和野外種群，用統(tǒng)一的方法測定，獲得敏感品系。 利用已經(jīng)報道的相對敏感的毒力回歸線為基線，但是到 1998 年以前 WHO 推薦使用區(qū)分計量法來測定抗性的強(qiáng)弱，由于該方法是單劑量處理試蟲，試驗結(jié) 果不穩(wěn)定，適用于抗性發(fā)生的早期。隨著擬除蟲菊酯的大量廣泛推廣應(yīng)用，濃度 對

30、數(shù)與死亡率幾率值回歸方程毒力回歸線法是國內(nèi)外的首選方法。 例 1 ：Geographic Variation in Susceptibility of Chilo suppressalis (Lepidoptera: Pyralidae to Bacillus thuringiensis Toxins in China FENGXIA MENG1, 2, KONGMING WU 1, 3, XIWU GAO2, YUFA PENG1, AND YUYUAN GUO1 Table 1. Sampling dates, host crops and development stages of C.

31、 suppressalis Collection locations Fuzhou, Fujian Cangnan, Zhejiang Changsha, Hunan Wenzhou, Zhejiang Chengdu, Sichuan Susong, Anhui Hangzhou, Zhejiang Jurong, Jiangsu Xiangfan, Hubei Ankang, Shanxi Haidian, Beijing Changping, Beijing Site 26°5N, 119°19E 27°24N, 120°23 E 28°

32、N, 113°15 E 28°01N, 120°40 E 30°N, 104°20 E 30°10N, 116°8 E 30°18N, 120°10 E 31°57N, 119°10 E 32°N, 112°9 E 32°45N, 108°9 E 40°N, 116°24 E 40°N, 116°30 E Map ref. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Collection date

33、 Aug. 2002 Jul. 2002 Aug. 2002 Jul. 2001 Aug. 2002 Jul. 2002 Jul. 2002 Jun. 2002 Jul. 2002 Jun. 2002 Apr. 2002 Sep. 2002 Host plant Rice Rice Rice Rice Rice Rice Rice Rice Rice Rice Rice Development stage 6th instar larvae 3rd instar larvae 6th instar larvae 4th instar larvae 6th instar larvae Eggs Adults Eggs 4th instar larvae 4th instar larvae P