姜黃素對CCl4所致急性肝損傷的保護(hù)作用研究

1、姜黃素對CCl4所致急性肝損傷的保護(hù)作用研究    【摘要】  目的 觀察姜黃素對CCl4所致急性肝損傷的保護(hù)作用。方法 將大鼠分為模型組（單純皮下注射CCl4），低、中、高劑量姜黃素治療組（皮下注射CCl4的同時，給予不同濃度的姜黃素腹腔注射）及正常對照組，應(yīng)用光鏡、電鏡觀察肝細(xì)胞的病理學(xué)變化。結(jié)果 模型組大鼠的肝組織呈現(xiàn)明顯的水樣變性和脂肪變性，并可見肝細(xì)胞壞死灶，姜黃素治療組的肝細(xì)胞未見壞死改變，水樣變性和脂肪變性程度減輕，以高劑量姜黃素組的治療效果最為明顯。結(jié)論 姜黃素能有效抑制CCl4所致的肝細(xì)胞損傷。 【關(guān)鍵詞】  姜黃素

2、；CCl4；急性肝損傷     Abstract  Objective  To investigate the protective effect of curcumine on acute liver injury induced by carbon tetrachlorid（CCl4）.Methods  The rats were divided into model group（only CCl4 hypodermic）,curcumine treatment group（CCl4 hypodermic and curcumin

3、e injected to abdominal cavity in low,medium and high doses）and normal group.The pathologic changes were observed by light and electron microscope.Results  The liver tissues of the rats in model group showed obvious hydropic and fatty degeneration.And the necrosis foci of hepatocytes were seen

4、in liver tissue.Hepatocytes in curcumine treatment group showed no necrotic changes,and the degree of hydropic and fatty degeneration was markedly reduced,especially in the high-dose curcumine treatment group.Conclusion  Curcumine can effcetively suppress hepatocytes injury induced by CCl4.

5、60;   Key words  curcumine;CCl4;acute liver injury     姜黃素類化合物是中藥姜黃的主要有效成分，主要包括姜黃素（curcumine）、去甲氧基姜黃素（demethoxycurcumin）和去二甲氧基姜黃素（bisdemethoxy-ocurcumin）三種，近來研究發(fā)現(xiàn)姜黃素具有較廣泛的藥理作用，如抗炎、抗氧化、清除自由基和降血脂等1，特別是它的抗氧化和抗癌作用日益引起人們的重視2。本實驗旨在研究姜黃素對CCl4所致急性肝損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制，現(xiàn)將其光鏡、電鏡形態(tài)學(xué)特征報告如

6、下。     1  材料與方法     1.1  實驗動物及分組  健康雌性SD大鼠30只，重量200500 g（南華大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供），隨機(jī)分為組，每組各只，即正常對照組，模型組，低、中、高劑量姜黃素治療組。     1.2  藥品與試劑  姜黃素（上海試劑三廠出口），以6%乙醇6%聚乙二醇400+88%水助溶后配制成水溶液（濃度為1 mg/ml）。主要儀器有：德國Medim全自動石蠟切片機(jī)，Leica光學(xué)顯微鏡，Leica超薄切片機(jī)，荷蘭FEI

7、 Tecnai G2 12型透射電子顯微鏡。     1.3  模型建立給藥方法  實驗周期為7天。（1）正常對照組：皮下注射生理鹽水。（2）模型組：大鼠第一天上午單純皮下注射CCl4（劑量0.5 ml/100 g）。（3）治療組：又分為三組，即低、中、高劑量姜黃素治療組。大鼠第一天上午皮下注射CCl4（劑量0.5 ml/100 g）后，用新鮮配制的姜黃素水溶液腹腔注射，低、中、高劑量組的注射劑量分別為：1 mg/100 g、2 mg/100 g、4 mg/100 g體重。姜黃素注射持續(xù)7天。     &

8、#160; 實驗期間各組大鼠均給予標(biāo)準(zhǔn)飲水及全價營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)。     1.4  實驗方法  實驗第8天，將大鼠用乙醚麻醉后以股動脈放血法處死大鼠，剖開腹腔，迅速取出肝臟，取1 mm3大小的肝組織，立即用預(yù)冷的2.5%戊二醛緩沖固定液固定，再取稍大的肝組織投入10%中性甲醛溶液中固定。然后分別進(jìn)行石蠟及環(huán)氧樹脂包埋。（1）光鏡觀察：石蠟包埋的肝組織制作成5 m厚切片，HE染色，置光鏡下觀察。（2）電鏡觀察：環(huán)氧樹脂包埋的肝組織經(jīng)超薄切片機(jī)制成50 nm厚超薄切片，醋酸雙氧鈾檸檬酸鉛雙重染色后，置透射電鏡下觀察、拍照。   &

9、#160; 2  結(jié)果     2.1  光學(xué)顯微鏡檢查  正常大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清楚，肝小葉內(nèi)的肝細(xì)胞單行排列，以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞圓形或多邊形，細(xì)胞核圓形，染色質(zhì)淡亮，核仁明顯。胞漿豐富，紅染，呈細(xì)顆粒狀。少數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)可見雙核。肝竇大小正常，無擴(kuò)張及淤血，無炎性細(xì)胞浸潤。     模型組大鼠肝小葉界限不清，肝細(xì)胞變性腫脹。變性類型在不同肝小葉之間有一定差異：部分區(qū)域肝細(xì)胞表現(xiàn)為水樣變性，輕者胞漿疏松成網(wǎng)狀，淡染，重者細(xì)胞體積增大腫脹變圓，胞漿空亮，胞核孤立地位于胞體中央；部分區(qū)域肝細(xì)胞表現(xiàn)

10、為不同程度的脂肪變性，胞體腫大，胞漿中可見大小不等的脂性空泡，脂滴較大的細(xì)胞可見細(xì)胞核偏于細(xì)胞的一側(cè)形同半月狀。有些區(qū)域可見肝細(xì)胞灶狀壞死。并可見炎性細(xì)胞浸潤。部分肝竇因肝細(xì)胞腫脹而變窄，部分肝竇擴(kuò)張并伴有明顯淤血。無明顯假小葉形成。匯管區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤。     低劑量姜黃素治療組的肝組織光鏡下除肝細(xì)胞壞死灶少見外，其余表現(xiàn)與模型組大鼠肝組織變化基本相同，肝細(xì)胞也可見較明顯的水樣變性和脂肪變性。中劑量姜黃素治療組的大鼠肝組織的細(xì)胞腫脹及脂肪變性較模型組減輕，未見明顯肝細(xì)胞壞死灶。高劑量治療組大鼠僅部分肝細(xì)胞有輕微的腫脹，部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見小的脂滴形成。 &#

11、160;   2.2  電子顯微鏡檢查  正常對照組大鼠的肝細(xì)胞體積較大，核圓形或卵圓形，常染色質(zhì)豐富，分布均勻，核仁明顯。胞漿豐富，線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)常呈片狀分布，糖原散在，溶酶體及脂滴少見。    模型組大鼠肝臟的大部分肝細(xì)胞腫脹明顯，核圓形或不規(guī)則形，部分細(xì)胞核染色質(zhì)凝聚成塊，核仁少見。胞質(zhì)疏松，線粒體腫脹，嵴模糊不清或變空泡。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變短或明顯擴(kuò)張成囊狀。部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)細(xì)胞器溶解，形成大小不等的空亮區(qū)。部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)則可見大小不等的脂滴分布。此外，少數(shù)肝細(xì)胞呈壞死表現(xiàn)，細(xì)胞膜破裂，核染色

12、質(zhì)及細(xì)胞器溶解。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹壞死。肝竇內(nèi)枯死細(xì)胞增多。     低劑量姜黃素治療組大鼠肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變與模型組基本相似，肝細(xì)胞腫脹明顯，部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)細(xì)胞器溶解，部分肝細(xì)胞內(nèi)有明顯脂滴形成，但未見壞死肝細(xì)胞。中劑量姜黃素治療組，大鼠肝細(xì)胞的細(xì)胞器溶解范圍變小，脂滴的數(shù)量減少，體積變小。高劑量姜黃素治療組大鼠肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)明顯改善，僅部分肝細(xì)胞有輕微腫脹，線粒體數(shù)量多，輕微腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯的擴(kuò)張和斷裂，少數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)有較小的脂滴形成。     3  討論     姜黃素是姜科植物

13、根莖姜黃的主要成分，生活中可作為調(diào)料、食品染色劑等。其具有多方面的藥理作用，如抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗動脈粥樣硬化、誘導(dǎo)腫瘤壞死和凋亡等。其抗腫瘤的效應(yīng)已有較多文獻(xiàn)報道3，4，但姜黃素對急性肝損傷的治療作用目前還少有研究。     工業(yè)發(fā)展在帶給人們豐富物質(zhì)享受的同時，食品及環(huán)境污染也越來越威脅人們的身體健康。肝臟是人體重要的代謝毒物的器官，極易受到損傷。研究表明，多種因素可導(dǎo)致肝臟的急性損傷，如病毒、酒精、化學(xué)物中毒等5。盡管可治療急性肝損傷的藥物較多，由于損傷原因不同，其損傷機(jī)制也有差別。因此，尋找針對不同原因?qū)е碌募毙愿螕p傷的藥物很有必要。多種化學(xué)毒物

14、損傷肝細(xì)胞的機(jī)制均與氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。CCl4是一種經(jīng)典的致肝損傷化學(xué)物品，脂質(zhì)過氧化是CCl4造成肝損傷的主要機(jī)制6，7。CCl4經(jīng)肝細(xì)胞微粒體P450酶系統(tǒng)代謝后，其分子中的C-Cl鍵斷裂，產(chǎn)生三氯甲基和氯自由基，三氯甲基可致肝細(xì)胞膜磷脂分子產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化。脂質(zhì)過氧化破壞了肝細(xì)胞和線粒體結(jié)構(gòu)和功能的完整，表現(xiàn)為膜的流動性降低，對鈣的通透性增加，以致脂質(zhì)代謝障礙，肝細(xì)胞脂肪變，甚至壞死。因此，我們選用其建立急性肝損傷模型來觀察姜黃素的治療作用。     目前，針對脂質(zhì)過氧化這一環(huán)節(jié)應(yīng)用抗氧化劑已成為治療急性肝損傷的一個新的著眼點。姜黃素具有清除氧自由基、抗氧化的

15、作用。本研究結(jié)果表明：中、高劑量姜黃素治療由CCl4導(dǎo)致的急性肝損傷有較好的療效，本光鏡及電鏡觀察顯示，其可明顯減輕由CCl4的毒性作用引起的肝細(xì)胞腫脹、細(xì)胞器溶解、細(xì)胞壞死、脂肪變性及炎性細(xì)胞浸潤，有效保護(hù)肝細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。是一種較為理想的治療急性肝損傷的藥物。     而且姜黃素的毒性研究表明，其短期及長期用于正常動物未見不良反應(yīng)、致畸及致癌反應(yīng)8，的確是一種有廣闊應(yīng)用前景的藥物。隨著對姜黃素藥理作用的深入研究及對其作用機(jī)制的進(jìn)一步闡明，這種一直被作為食用色素使用的天然活性成分，必將對人類發(fā)揮更大的作用。 【參考文獻(xiàn)】  1 顧軍，韓香，顧欣.姜黃素

16、的基礎(chǔ)藥理作用.天津藥學(xué)，2000,12:5-6. 2 Nishino H,Tokuda H,Satomi Y.et al.Cancer prevention by antioxidants.Biofactors,2004,22:57-61. 3 Karunagaran D,Rashmi R,Kumar TR.Induction of apoptosis by curcumin and its implications for cancer therapy.Curr Cancer Drug Targets,2005,5:117-129. 4 黃冬生，陳金和.姜黃素誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制初步研究.中國藥理學(xué)通報，2003,19:880-882. 5 張巍，員克明，韓德五.甘氨酸對硫代乙酰胺所致急性肝損傷的保護(hù)作用.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2003,34:210-211. 6 劉桂喜，李衛(wèi)星，姜楠，等.垂