DNA的粗提取與鑒定學(xué)案

1、§ « DNA勺粗提取與鑒定導(dǎo)學(xué)案班級(jí)：高二()班姓名：【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1 .說出DNA勺物理和化學(xué)性質(zhì)。2 .概述DNA1提取和鑒定的原理。3 .嘗試對(duì)動(dòng)物或植物組織的 DNAS行粗提取并對(duì)其進(jìn)行鑒定?！咀灾鲗W(xué)習(xí)】4 .提取DNA勺方法和原理：(1)提取生物大分子的基本思路 ：選用一定的 方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的 生物大分子。(2)提取DNA勺方法：利用DNAW、和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA,去除其他成分。的溶解性：(1)DNA在NaCl溶液中的溶解度：DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，其中在NaCl溶液中溶解度最低。(2)在酒精溶液中的

2、溶解性：不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些 溶于酒精溶液。 對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性 ：(1)對(duì)酶的而t受性：蛋白酶能水解 ，但對(duì) 沒有影響。(2)對(duì)溫度的耐受性：大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受 的高溫，而DNAt 以上才會(huì)變性。(3)對(duì)洗滌劑白耐受性：洗滌劑能夠瓦解 ，但對(duì) 沒有影響。的鑒定：在 的條件下，DNA與 反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)5 .實(shí)驗(yàn)材料的選?。哼x用DN蛤量 的生物組織。6 .破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液：(1)動(dòng)物細(xì)胞的破碎。選材及方法：選用動(dòng)物細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，由于其無 ,因此可直接采用吸水漲破的方法。過程：以雞血為例。在雞血細(xì)胞液中加入一定量的 ,同時(shí)用 攪拌，細(xì)胞會(huì)吸水漲

3、破,然后用紗布過濾，過濾后收集濾液即可。(2)植物細(xì)胞的破碎。方法：需要先用 溶解細(xì)胞膜。過程：以提取洋蔥的DNA為例。在切碎的洋蔥中加入一定的 ,進(jìn)行充分地?cái)嚢韬?過濾后收集研磨液。7 .去除濾液中的雜質(zhì)：力殺一利用DNA在不同濃度的去除雜質(zhì)NaCl溶液中不同,通過控制NaCl溶液的力殺一直接在濾液中加入 夠分解蛋白質(zhì)，反應(yīng)1015 min,嫩肉粉中的_臺(tái)匕目匕力呆二將濾液放在 的恒溫水浴箱中保溫1015 min,注意嚴(yán)格控制溫度范圍的析出：利用DNM溶于 這一原理,可從DNA§液中析出比較純凈的 DNA,此時(shí)DNA的狀態(tài)為。 的鑒定：將白色絲狀物溶解于 5 mL物質(zhì)的量濃度為 中

4、，再加入4 mL白 試劑,沸水浴加熱5 min,冷卻后觀察溶液的顏色,同時(shí)設(shè)計(jì)不含 DNA勺NaCl溶液作為對(duì)照。 三、操作提示1 .以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100 mL血液中需要加入3 g檸檬酸鈉，防止。2 .加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生 ,不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒 精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇 ,導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3 .鑒定DN刖的二苯力鉆式劑要 ，否則會(huì)影響鑒定的效果。 四、實(shí)驗(yàn)操作 從雞血細(xì)胞中提取 DNA(1)破碎細(xì)胞(釋放 DNA：在雞血細(xì)胞液中加入一定量的 ,同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向攪 拌(2)過濾：?jiǎn)螌蛹啿歼^濾，濾液中含有 和其他核物質(zhì)

5、，如 、RN感。取。(3)溶解核內(nèi) DNA向上述濾液中加入物質(zhì)的量濃度為 mol/L的NaCl溶液，并用玻棒沿 一個(gè)方向攪拌(4)過濾：將含DNA勺2 mol/L的NaCl溶液用兩層紗布過濾取 。(5)析出DNA向上述濾液中緩緩加入 ,同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向輕輕攪拌，出現(xiàn)白色 絮狀物，當(dāng)絮狀物不再增加時(shí)，停止加水(此時(shí)NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度接近 mol/L。(6)過濾：用多層紗布過濾，含 的粘稠物留在紗布上(7) DNA再溶解：將上述粘稠物再次用 mol/L的NaCl溶液溶解(8)提取含雜質(zhì)較少的 DNA向上述濾液中加入等體積的、冷卻的、體積分?jǐn)?shù)為95%勺酒精溶液，靜置2-3 min,出現(xiàn)

6、,用玻璃棒將絲狀物卷起。【合作探究】主題1 DNA1提取與鑒定的方法溶解性原理：結(jié)合DNA NaCl溶液中的溶解度曲線，分析DNA不同濃度NaCl溶液中的溶解度有何特點(diǎn)。低于mol/L時(shí)：DNA的溶解度隨NaCl溶液物質(zhì)的量濃度增加而逐漸 。(2)高于mol/L時(shí)：DNA的溶解度隨NaCl溶液物質(zhì)的量濃度增加而逐漸 。 粗提取的操作思路：DNA與蛋白質(zhì)在NaCl溶液中的溶解情況如下表。2 mol/L 的 NaCl 溶液mol/L的NaCl溶液DNA析出蛋白質(zhì)不溶，部分發(fā)生鹽析沉淀探討通過控制 NaCl溶液的濃度使 DNAS鹽溶液中溶解或析出的思路是： 用 的NaCl溶液溶解DNA然后過濾獲得

7、,能夠去除該條件下 (不能、能)溶解的雜質(zhì)；調(diào)節(jié) NaCl溶 液的物質(zhì)的量濃度為 mol/L ,使DNA析出，然后過濾獲得 ,能夠去除該條件下仍然(不能、能夠)溶解的雜質(zhì)。不溶于 ,而細(xì)胞中的某些 則溶于酒精溶液，此特點(diǎn)對(duì)于提取DNA的作用是主題2 DNA勺粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)【互動(dòng)探究】1 .實(shí)驗(yàn)材料的選?。翰溉閯?dòng)物的紅細(xì)胞和雞的血液提取DNA效果更衣？的是。原因是 細(xì)胞核DN*量豐富，材料易得，而 無細(xì)胞核，不含 DNA2 .實(shí)驗(yàn)操作分析：（1）在雞血細(xì)胞液中加入蒸儲(chǔ)水的目的是使雞血細(xì)胞 漲破，釋放出。（2）提取菜花的DNA寸，加入洗滌劑和食鹽的目的是：加入洗滌劑的目的：洗滌劑能溶解 ,

8、有利于 的釋放。加入食鹽的目的：食鹽的主要成分是 ,有利于 的溶解。（3）探討在DNA分子的粗提取實(shí)驗(yàn)中，兩次向燒杯中加入蒸儲(chǔ)水的目的：操作項(xiàng)目目的第一次加蒸儲(chǔ)水雞血細(xì)胞.漲破,釋放出O第二次加蒸儲(chǔ)水稀釋NaCl溶液, 使DN砥漸析出使其濃度接近_ mol/L ,（2）三次加NaCl溶液:次數(shù)實(shí)驗(yàn)步驟目的第一次第（3）步溶解,析出蛋白質(zhì)等雜質(zhì)第二次第步使DNA再,為了獲得含雜質(zhì)較少的 DNA第三次DNA定溶解DNA以便DNAW反應(yīng)【當(dāng)堂檢測(cè)】一、判斷題和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它們都是有機(jī)物但都溶于酒精。（）2 .做DNA®提取實(shí)驗(yàn)時(shí)，可用新鮮豬血代替雞

9、血。（）3 .蛋白質(zhì)和DNA在高溫下都會(huì)變性，當(dāng)溫度下降后蛋白質(zhì)不能復(fù)性而DNA可以復(fù)性。（）4 .在用95%勺冷酒精析出DNA應(yīng)用玻璃棒沿同一個(gè)方向輕輕攪拌。（）5 .在實(shí)驗(yàn)中兩次加入蒸儲(chǔ)水，均是為了析出DNA （）6 .在析出DNA寸，要緩緩加入蒸儲(chǔ)水，直到出現(xiàn)絮狀物為止。（）7 .洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA NaCl溶液中的溶解度。（）二、單項(xiàng)選擇題1 .（2017 連云港高二檢測(cè)）下列有關(guān)“ DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)原理的敘述正確的是（）在NaCl溶液中的溶解度，隨NaCl溶液濃度的降低而減小B.利用DNA溶于酒精的性質(zhì)，可除去細(xì)胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的DNA是大分子有機(jī)物，

10、不溶于水而溶于某些有機(jī)溶劑D.在沸水中，DNA遇二苯胺會(huì)出現(xiàn)紫色反應(yīng)2 .在DNA®提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，將獲得的含有DNA勺黏稠物（含較多物質(zhì)）分別處理如下，其中雜質(zhì) 所處的位置在（）操作過程黏稠物濾液放入2 mol/L的氯化鈉溶液中，攪拌后過濾放入mol/L的氯化鈉溶液中，攪拌后過濾放入冷卻的95%勺酒精溶液中，攪拌后過濾A.B.C.D.3 .（2017 常州高二檢測(cè)）下圖為“ DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是（）A.是洗滌紅細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)B.是溶解DNA去除不溶于酒精的雜質(zhì)C.溶解DNA去除不溶于2 mol/LNaCl溶液的雜質(zhì)D.稀釋NaCl溶

11、液，去除不溶于低濃度 NaCl溶液的雜質(zhì)4 .在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，對(duì)DNA提取量影響較小的是（）A.使雞血細(xì)胞在蒸儲(chǔ)水中充分破裂，釋放出DNA等核物質(zhì)B.攪拌時(shí)要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕緩攪動(dòng)C.在析出DNA占稠物時(shí)，要緩緩加入蒸儲(chǔ)水，直到黏稠物不再增多D.要用冷酒精沉淀DNA,甚至再將混合液放入冰箱中冷卻6 .（2017 赤峰高二檢測(cè)）下列關(guān)于“ DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)操作的說法中，正確的是 （）A.該實(shí)驗(yàn)中有兩次加入蒸儲(chǔ)水，均是為了析出DNAB.該實(shí)驗(yàn)中多次要求用玻璃棒單向攪拌，目的是攪拌均勻C.該實(shí)驗(yàn)中有3次過濾，過濾時(shí)使用尼龍布層數(shù)與DNA的存在狀態(tài)有關(guān)D.實(shí)驗(yàn)3次加入NaCl溶液，第二次的目的是析出DNA7 .回答下列有關(guān)“ DN