人參與林蛙油配伍的保健食品體外致突變?cè)囼?yàn)研究

1、人參與林蛙油配伍的保健食品體外致突變?cè)囼?yàn)研究人參作為著名的中草藥 , 在我國(guó)已經(jīng)使用了幾千年之久 , 據(jù)?神農(nóng)本草經(jīng)?記載 ：人參主補(bǔ)五臟 , 安精神 , 定魂魄 , 止驚悸 , 除邪氣 , 明目開心益智 , 久服輕身延年。 林蛙油又稱蛤蟆油、田雞油、哈什螞油 , 為雌性林蛙枯燥的輸卵管制品 , 具有補(bǔ)腎益精、潤(rùn)肺養(yǎng)陰之成效 , 其主要分布東北長(zhǎng)白山區(qū)。林蛙油中含有多種生理活性物質(zhì) , 具有明顯的生理保健作用。因此 , 本文采用 Ames 試驗(yàn)平皿摻入法對(duì)人參與林蛙油配伍的保健食品進(jìn)展了體外致突變效應(yīng)初步討論 , 為其保健食品開發(fā)利用提出科學(xué)理論根據(jù)。1材料與方法1. 1材料1. 1. 1試劑

2、 人參與林蛙油配伍的保健食品 , 由本實(shí)驗(yàn)室自制 ;敵克松、疊氮鈉、二氨基芴、1, 8- 二羥基蒽醌均購(gòu)自 Sigma 公司 ;D- 生物素、L- 鹽酸組氨酸購(gòu)自 Fluka 公司 ;鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株 TA97、TA98、TA100、TA102和 S9 均購(gòu)自上海啟發(fā)實(shí)驗(yàn)。1. 1. 2儀器 電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱 , 均由上海基瑋試驗(yàn)儀器設(shè)備產(chǎn) ;立式壓力蒸汽滅菌儀(YXQ-LS-50G 型 ), 上海博迅實(shí)業(yè)醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn) ;METTLER TOLEDO-AB204-N 分析天平 , 上海產(chǎn)。1. 2方法1. 2. 1試驗(yàn)方法 根據(jù)?保健食品平安性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)

3、?中介紹的平板摻入法進(jìn)展試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)5000、1000、200、40、8 g/ 皿 5 個(gè)劑量。取 2.5 g 受試物加二甲基亞砜至 50 ml 混均即為 5000 g/ 皿劑量 , 其余各受試物劑量 1/5 倍比遞減稀釋 ;上述受試液經(jīng)滅菌 ( 時(shí)間 ：20 min,溫度 ：121 , 壓力 ：0.103 MPa) 后使用 ;另設(shè)未處理對(duì)照、溶劑對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照。在頂層瓊脂中參加 0.1 ml 試驗(yàn)菌株增菌液、0.1 ml 受試物溶液 , 代謝活化時(shí)參加 0.5 ml S9 混合液 ,混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。37 , 培養(yǎng) 48 h, 計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。假設(shè)受試物的回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌

4、落數(shù) 2倍以上 , 并具有劑量 - 反響關(guān)系者那么定為陽(yáng)性。每個(gè)劑量做3 個(gè)平行。整套試驗(yàn)在一樣條件下重復(fù)做 2 次并分別統(tǒng)計(jì)。1. 2. 2 陽(yáng)性對(duì)照 活化系統(tǒng) TA97、TA98、TA100 采用二氨基芴 10.0 g/ 皿 , TA102 為 1, 8- 二羥基蒽醌 50.0 g/ 皿。非活化系統(tǒng) TA97、TA98、TA102 為敵克松 50.0 g/ 皿 , TA100為疊氮鈉 1.5 g/ 皿。1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差 ( x-s) 表示 , 采用 t 檢驗(yàn)。P0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果結(jié)果顯示

5、 , 將人參與林蛙油配伍的保健食品在鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株 TA97、TA98、TA100、TA102 進(jìn)展平板摻入試驗(yàn) , 無(wú)論在加和不加 S9 混合液時(shí) ,85000 g/ 皿各劑量組均未引起試驗(yàn)菌株的回復(fù)突變菌落數(shù)顯著增加 , 與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P溶劑對(duì)照組的菌落回變數(shù)與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P陽(yáng)性誘變劑誘發(fā)回變菌落數(shù)均明顯增加 , 與陰性對(duì)照比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P0.01)。3討論Ames 試驗(yàn)是國(guó)際上通用的遺傳毒理學(xué)鑒定致突變的必檢工程之一。采用鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株作為微生物 , 檢測(cè)化學(xué)物的致突變性。人工誘變的鼠傷寒沙

6、門氏菌的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株在其組氨酸操縱子中有一個(gè)突變 , 突變菌株必需以來(lái)外源性組氨酸才能生長(zhǎng) , 在無(wú)組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能存活 , 誘變劑可使其基因發(fā)生回復(fù)突變 , 使它在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)。另外 ,Ames 試驗(yàn)在平安性評(píng)價(jià)方面具有舉足輕重的作用 , 應(yīng)在生物平安柜中操作及觀察結(jié)果 , 注意嚴(yán)格無(wú)菌操作 , 以保證本次試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本試驗(yàn)將人參與林蛙油配伍的保健食品與各標(biāo)準(zhǔn)菌液混合后在最低營(yíng)養(yǎng)板上培養(yǎng) , 根據(jù)出現(xiàn)的回變菌落數(shù)及致突變比值來(lái)判斷其是否存在誘變物質(zhì)。結(jié)果顯示 , 在有無(wú) S9 的作用下 , 人參與林蛙油配伍的保健食品各劑量組均未發(fā)現(xiàn)測(cè)試菌株回變菌落數(shù)超過(guò)陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的 2 倍 , 且無(wú)劑量 - 反響關(guān)系 , 而陽(yáng)性對(duì)照組各測(cè)試菌株的回變菌落數(shù)均明顯增加 , 并超過(guò)陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的 2 倍以上 , 證實(shí)本實(shí)驗(yàn)條件下 , 鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌株對(duì)人參與林蛙油配伍的保健食品檢測(cè)結(jié)果為陰性 , 試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明 , 人參與林