薄層色譜在藥物成分分離中的應(yīng)用的研究進(jìn)展分享

1、真誠(chéng)為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當(dāng)之處，請(qǐng)指正。薄層色譜在醫(yī)藥方面應(yīng)用的研究進(jìn)展摘要 制備色譜技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域的迅速發(fā)展，使得研究和開發(fā)有中國(guó)特色的醫(yī)藥和攻克疑難雜癥方面尤為重要，薄層色譜作為一種在物質(zhì)分析和分離方面具有良好效果的制備方法，越來越受到人們的重視。文章列舉了一些國(guó)內(nèi)外近些年有關(guān)薄層色譜用于醫(yī)藥成分研究的動(dòng)態(tài)，綜述了一些有關(guān)薄層色譜的優(yōu)勢(shì)和具體的制備方法，希望能對(duì)未來研究醫(yī)藥方面的科研工XXX提供一些幫助。關(guān)鍵詞 薄層色譜、醫(yī)藥1.1前言 中國(guó)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥是在千年臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上總結(jié)而來的，有4O多個(gè)民族有自己的特色藥物，有20多個(gè)民族有較完整的醫(yī)藥體系，可謂資源豐富，數(shù)量龐大，特色鮮

2、明從中研究和開發(fā)創(chuàng)新藥物，是我國(guó)減少仿制、增加自主創(chuàng)新、攻克重大疾病的有效途徑目前中國(guó)少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥開發(fā)主要靠提取、分離、純化及活性追蹤技術(shù)，雖然這類技術(shù)手段在民族藥物資源的挖掘和開發(fā)中取得了關(guān)鍵性的進(jìn)展，但是尚不能滿足海量的民族醫(yī)藥資源的開發(fā)需要，大量寶貴的民族醫(yī)藥資源亟待開發(fā)和利用極有必要采取新思路、新技術(shù)、新手段，加快開發(fā)速度，彌補(bǔ)常規(guī)手段的不足。1現(xiàn)代制備色譜技術(shù)以快速、高效、高載樣量和自動(dòng)化為發(fā)展方向，融合了傳統(tǒng)色譜的經(jīng)典理論和現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)中的眾多創(chuàng)新之處，解決了許多傳統(tǒng)色譜未能解決的問題與不足可用于少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥樣品的快速制備和分離1.2薄層色譜法的基本原理 色譜法的基本原理是

3、利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。薄層色譜是一種微量、快速和簡(jiǎn)便的色譜方法。由于各種化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動(dòng)，進(jìn)行不同程度的解析，根據(jù)原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心及展開劑前沿的距離，計(jì)算比移值（Rf）。2 化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強(qiáng)，因此Rf值較小。在給定的條件下（吸附劑、展開劑、板層厚度等），化合物移動(dòng)的距離和展開劑移動(dòng)的距離之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常數(shù)，其大小只與化合物本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)，因此可以根據(jù)Rf值鑒別化

4、合物。 薄層色譜可適用小量樣品（幾到幾十微克甚至0.01g）的分離：也可用于多達(dá)500mg樣品的分離，是近代有機(jī)化學(xué)中用于定性，定量的一種重要手段。特別適用于那些揮發(fā)性小的化合物，以及在高溫下易發(fā)生化學(xué)變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。 1.3薄層色譜法的應(yīng)用1.3.1 娑羅子的薄層色譜鑒別 婆羅子為中國(guó)藥典收載的少常用中藥。該藥具有疏肝、理氣、和胃、止痛、殺蟲之功效; 用于治療肝胃氣滯, 院腹脹滿, 小兒瘡積等病癥; 近年來臨床用于治療冠心病, 此外, 還具有抗炎消腫的作用。采用不同展開系統(tǒng)對(duì)3 種不同來源的婆羅子進(jìn)行薄層色譜實(shí)驗(yàn), 結(jié)果表明, 婆羅子藥材植物來源不同, 但所含化學(xué)成分基本相同

5、。同時(shí)表明, 采用抓仿一甲醇(4 , l) 為展開劑,化學(xué)諸成分分離較好。另外, 通過對(duì)不同品種來源的婆羅子進(jìn)行的秦皮甲素、秦皮乙素成分鑒定, 表明婆羅子中均含有秦皮乙素, 并不含秦皮甲素。31.3.2 微乳薄層色譜用于黃連類藥物分離鑒定的研究微乳液是由表面活性劑、助表面活性劑、油、水等組分在適當(dāng)配比下自發(fā)生成的無(wú)色透明、各向同性、低粘度的熱力學(xué)穩(wěn)定體系, 與膠束皆屬締合膠體, 但在某些特性上存在明顯的差別。與膠束體系相比, 微乳體系具有更大的增溶量( 增溶量: 膠束體系5% 20% , 微乳體系60% 70%) 和超低界面張力(界面張力mN/m: 油水界面72, 膠束體系20,微乳體系10-

6、2 10-4）。4 實(shí)驗(yàn)使用聚酰胺薄膜,以中性的含水量為75%的陰離子O/W型微乳液作為展開劑。在此層析條件中,黃連各生物堿的Rf值適中(藥根堿0.47,小檗堿0.59,巴馬丁0.67);黃連各生物堿間的vRf值均大于0105(藥根堿與小檗堿0112,小檗堿與巴馬汀0.08,藥根堿與巴馬汀0.20),供試品中生物堿及其它成分的斑點(diǎn)得以完全分離;色譜斑點(diǎn)規(guī)則清晰,圓而集中,不擴(kuò)散,不拖尾;點(diǎn)樣量更小,僅為常用量的一半,因而檢出靈敏度顯著提高。此外, 由于微乳展開劑含水量大, 濕度對(duì)實(shí)驗(yàn)無(wú)影響，不使用刺激性強(qiáng)的濃氨水及苯等有機(jī)溶媒, 減少了環(huán)境污染并降低了實(shí)驗(yàn)成本。51.3.3風(fēng)濕寧膠囊的薄層色譜

7、鑒別研究風(fēng)濕寧膠囊由元胡、麻黃、青風(fēng)藤、羌活、獨(dú)活等多味中藥組成, 具有祛風(fēng)散寒、除濕通絡(luò)、活血止痛的功能, 臨床上用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、痛風(fēng)性和風(fēng)濕性及退行性關(guān)節(jié)炎等疾病的治療, 具有較好的臨床療效。為了有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量,保證臨床療效, 對(duì)處方中的麻黃、青風(fēng)藤、元胡進(jìn)行了定性鑒別。6元胡的薄層鑒別以正丁烷-氯仿-甲醇（10:6:1）展開劑，麻黃以氯仿-甲醇-濃氨作展開劑，青風(fēng)藤以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水作為展開劑。實(shí)驗(yàn)所得色譜斑點(diǎn)清晰明顯，實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，重現(xiàn)性好。1.4薄層色譜的制備步驟1.4.1薄層板制備7 除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去

8、除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.20.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板倆種。常用吸附劑的基本情況：顆粒的大小，太大洗脫劑流速快分離效果不好，太細(xì)溶液流速太慢。一般說來吸附性強(qiáng)的顆粒稍大，吸附性弱的顆粒稍小。氧化鋁一般在100-150目。氧化鋁分為堿性氧化鋁，適用于碳?xì)浠衔?、生物堿及堿性化合物的分離，一般適用于PH為9-10的環(huán)境。中性氧化鋁適用于醛、酮、醌、酯等PH約為7.5的中性物質(zhì)的

9、分離。酸性氧化鋁適用于PH44.5的酸性有機(jī)酸類的分離。氧化鋁、硅膠根據(jù)活性分為五個(gè)級(jí)，一級(jí)活性最高，五級(jí)最低。黏合劑及添加劑：為了使固定相（吸附劑）牢固地附著在載板上以增加薄層的機(jī)械強(qiáng)度，有利于操作，需要時(shí)在吸附劑中加入合適的黏合劑：有時(shí)為了特殊的分離或檢出需要，要在固定相中加入某些添加劑。薄層板的活化：硅膠板于105-11烘30分鐘，氧化鋁板于150-160烘4小時(shí)，可得活性的薄層板。1.4.2點(diǎn)樣除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。點(diǎn)樣直徑不超過5

10、mm，點(diǎn)樣距離一般為11.5cm即可。樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將呈空心環(huán)環(huán)形色譜效應(yīng)。因此配制樣品溶液時(shí)應(yīng)選擇對(duì)組分溶解度相對(duì)較小的溶劑。點(diǎn)樣方式有點(diǎn)狀點(diǎn)樣和帶狀點(diǎn)樣。1.4.3展開 展開劑也稱溶劑系統(tǒng)，流動(dòng)性或洗脫劑，是在平面色譜中用作流動(dòng)相的液體。展開劑的主要任務(wù)是溶解被分離的物質(zhì)，在吸附劑薄層上轉(zhuǎn)移被分離物質(zhì)，使個(gè)組分的Rf值在0.20.8之間并對(duì)被分離物質(zhì)要有適當(dāng)?shù)倪x擇性。作為展開劑的溶劑應(yīng)滿足以下要求：適當(dāng)?shù)募兌?、適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性、低黏度 、線性分配等溫線、很低或很高的蒸氣壓一級(jí)盡可能低的毒性。展開方式總的來講平面色譜的展開有線性、環(huán)形及向心3種幾何形式。 A 單次展開 用同一種展

11、開劑一個(gè)方向展開一次，這種方式在平面色譜中應(yīng)用最為廣泛。（垂直上行展開，垂直下行展開，一向水平展開，對(duì)向水平展開）B 多次展開 單向?qū)Υ苏归_，用相同的展開劑沿同一方向進(jìn)行相同距離的重復(fù)展開，直至分離滿意，廣泛應(yīng)用于薄層色譜法C 雙向展開 用于成分較多、性質(zhì)比較接近的難分離組分的分離。薄層展開展開室如需預(yù)先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.51.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中），密封室蓋，待展開至規(guī)定距離（一般為101

12、5cm），取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。1.4.4顯色 顯色劑可采用噴霧顯色、浸漬顯色或置適宜試劑的蒸氣中熏蒸顯色，用以檢出斑點(diǎn)。 顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。 熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，有色物質(zhì)可直接檢視，無(wú)色物質(zhì)可用物理或化學(xué)方法檢視。物理方法是檢出斑點(diǎn)的熒光顏色及強(qiáng)度；化學(xué)方法一般用化學(xué)試劑顯色后，立即覆蓋同樣大小的玻璃板，檢視。1.4.5測(cè)定比移值 系指從基線至展開斑點(diǎn)中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比值。鑒別時(shí)，可用供試品溶液主斑點(diǎn)

13、與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的比移值進(jìn)行比較，或用比移值來說明主斑點(diǎn)或雜質(zhì)斑點(diǎn)的位置。除另有規(guī)定外，比移值（Rf）應(yīng)在0.20.8 之間。81.4.6薄層掃描薄層掃描法指用一定波長(zhǎng)的光照射在經(jīng)薄層層析后的層析板上，對(duì)具有吸收或能產(chǎn)生熒光的層析斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，用反射法或透射法測(cè)定吸收的強(qiáng)度，以檢測(cè)層析譜。對(duì)于中成藥復(fù)方制劑，亦可用相應(yīng)的原藥材按需要組合作陰、陽(yáng)對(duì)照，然后比較其薄層掃描圖譜加以鑒別。使用儀器為薄層掃描儀。如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明，結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒

14、光法，用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開后掃描，進(jìn)行比較并計(jì)算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結(jié)果。1.5薄層色譜在中藥研究的弊端 在中藥的研究上, 通常是把一個(gè)成分復(fù)雜的、完整的藥材通過化學(xué)手段分解出各種可以確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分, 逐一研究其藥理作用, 竭力找出最有效的活性成分, 結(jié)果將藥材本身內(nèi)部各種成分的綜合作用和相互關(guān)系割裂開來。分析工XXX沿著這條思路也力求運(yùn)用各種分析檢測(cè)手段測(cè)定某種有效成分, 以某一活性成分含量的多少來判斷

15、某種藥材的質(zhì)量。但是對(duì)于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥, 尤其是復(fù)方制劑, 任何一種活性成分均不能反映中醫(yī)用藥所體現(xiàn)的整體療效。就是說分析的越細(xì), 目標(biāo)越縮小, 離中藥的整體療效的距離越遠(yuǎn)。9參考文獻(xiàn)：【1】劉慶山等?，F(xiàn)代制備色譜技術(shù)在少數(shù)民族醫(yī)藥快速研究體系中的應(yīng)用。北京：中央民族大學(xué) 中國(guó)少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究院 2009【2】劉燁大豆提取物中異黃酮成分的分離與純化湖南師范大學(xué) 2007【3】杜向紅等，娑羅子的薄層色譜鑒別。鄭州：河南省人民醫(yī)院，河南省藥品檢驗(yàn)所，河南省雙益藥具科技開發(fā)公司 1999【4】康純等。微乳薄層色譜用于黃連類藥物分離鑒定的研究。江蘇：揚(yáng)州大學(xué)，揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所 1999【5】

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