類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RANTES及MCP-1的測定及其意義

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RANTES及MCP-1的測定及其意義              作者：李國輝姚航平李志會(huì)方【關(guān)鍵詞】  T細(xì)胞表達(dá);分泌因子;單核細(xì)胞趨化蛋白1;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎   摘要 目的研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清、關(guān)節(jié)滑液中調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES）及單核細(xì)胞趨化蛋白1（MCP-1）表達(dá)水平，探討其在RA致病中的作用。方法用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定27例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清及病變膝關(guān)節(jié)滑液中RANTES、

2、MCP-1水平，并與外傷截肢者對照。結(jié)果 RA患者血清及滑液中RANTES、MCP-1水平明顯高于對照組，且RA滑液中RANTES水平高于血清。結(jié)論以上研究結(jié)果提示RA病變關(guān)節(jié)組織是RANTES產(chǎn)生的主要部位。  關(guān)鍵詞 T細(xì)胞表達(dá);分泌因子;單核細(xì)胞趨化蛋白1;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎  Expression of RNATES，MCP-1in serum and synovial fluid in patients with rheumatoid arthritis   Abstract Objective To investigate th

3、e expression of activation normal T cell expressed and secreted（RANTES）and monocytechemoattracta protein1（MCP-1）in serum and synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis（RA）and to identify its pathological role in RA.Methods The serum and synovial fluid of the pathologic knee joints were obt

4、ained from patients with RA，and samples from leg traumatic amputees were used as the control group.Levels of RANTES and MCP-1protein in serum and synovial fluid were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Results Levels of RANTES，MCP-1protein in both serum and synovial fluid of patient

5、s with RA were significantly higher com-pared with corresponding samples of the control group.In addition，the expression of RANTES protein in synovial fluid was also markedly increased compared with that in serum of patients with RA.Conclusion All the results suggest that the pathological arthrosis

6、are the main positions to produce RANTES.  Key Words RANTES;MCP-1;rheumatoid arthritis;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）的病理特點(diǎn)為大量炎性細(xì)胞在滑膜的浸潤和在滑液的滲出，滑膜增生、血管翳形成，及由此造成的軟骨破壞。研究發(fā)現(xiàn)趨化因子在RA關(guān)節(jié)的炎性細(xì)胞關(guān)節(jié)浸潤中起著極為重要的作用  1 。調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（regulated on activation normal T cell expressed and secreted，RANT

7、ES）及單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocytechemoattracta protein1，MCP-1）均為炎癥 性趨化因子，具有調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞分化的功能。在炎癥條件下，MCP-1和RANTES增多能募集包括活化的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞進(jìn)入組織的炎癥損傷部位執(zhí)行免疫應(yīng)答功能 2 。本研究對RA患者血清和病變膝關(guān)節(jié)滑液中RANTES和MCP-1水平進(jìn)行檢測，并與外傷截肢者對照，旨在探討其在RA發(fā)病中的作用。   1材料和方法   1.1研究對象 實(shí)驗(yàn)組血清及膝關(guān)節(jié)滑液取材于2002年至2005年杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院及浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕科初診RA病人，共27

8、例，均符合1987年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組血清及膝關(guān)節(jié)滑液均來源于以上兩家醫(yī)院因外傷截肢患者（一般檢查均正常）共18例。   1.2標(biāo)本收集抽取空腹外周靜脈血5ml，以2500r/min離心15min，取上清，置于-20備檢。細(xì)針抽取關(guān)節(jié)滑液2ml，置于-80備檢。  1.3RANTES及MCP-1的檢測方法 RANTES及MCP-1的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），操作按照R&D試劑盒（RNATES cat#DY278，MCP-1cat#DY279）說明書進(jìn)行。其主要步驟為:分別向包被鼠抗人RANTES單抗和M

9、CP-1單抗的微孔內(nèi)加入50l的RANTES、MCP-1標(biāo)準(zhǔn)品或檢測血清、按1:3稀釋的關(guān)節(jié)滑液，將96孔板蓋上薄膜置于室溫中孵育2h，孵育后洗滌3次。分別加入50l酶聯(lián)復(fù)合物，顯色，全自動(dòng)酶標(biāo)儀分別讀取RANTES及MCP-1濃度，標(biāo)本均行復(fù)孔檢測，均值為終濃度。   1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以 ±s表示，兩組間比較采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件作t檢驗(yàn)。P0.05為結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。   2結(jié)果   2.1 RA及對照組血清及滑液RANTES水平的比較 RANTES檢測結(jié)果見表1，從表1可見RA患者血清及關(guān)節(jié)滑液RNAT

10、ES的水平顯著高于對照組，且RA組內(nèi)關(guān)節(jié)滑液中的含量較血清中明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。  2.2RA及對照組血清及滑液MCP-1水平的比較MCP-1檢測結(jié)果見表1，RA患者血清及關(guān)節(jié)滑液MCP-1的水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），但RA組內(nèi)關(guān)節(jié)滑液中的MCP-1含量與血清比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1血清及滑液RANTES、MCP-1的水平（略）注:組內(nèi)滑液與血清水平比較， * P0.01;對照組比較， # P0.01         3討論  

11、; 趨化因子是對白細(xì)胞起特異性趨化吸引作用的小分子細(xì)胞因子，按其N2端半胱氨酸殘基的相鄰位置，可將趨化因子分為4個(gè)亞族，既CXC、CC、CX3C和C亞族趨化因子 3 。其中CXC和CC亞族趨化因子為最常見的2個(gè)亞類，CC亞族趨化因子的前2個(gè) 半胱氨酸相互緊鄰，這類趨化因子主要有RANTES、MCP1及MIP-1a、MIP-1等，它們主要對單個(gè)核白細(xì)胞等起趨化作用 4 。   RA是一種病變部位以CD4+的Thl細(xì)胞浸潤為主的自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)以關(guān)節(jié)滑膜炎和可累及全身各個(gè)器官的血管炎癥病變?yōu)樘卣鳌Ｓ醒芯孔C實(shí)， 5，6 RANTES通過與細(xì)胞表面相應(yīng)的CC亞族趨化因子受

12、體（CCR1、CCR3和CCR5）結(jié)合，特異吸引CD4+/CDRO45+T細(xì)胞進(jìn)入炎性部位，并對嗜堿和嗜酸粒細(xì)胞具有激活作用，而在免疫及炎性反應(yīng)、HIV感染等方面起著極為重要的作用。而MCP-1受體CCR2是一類表達(dá)于不同類型細(xì)胞（單核細(xì)胞、記憶T淋巴細(xì)胞、嗜堿性白細(xì)胞等）上的含有7個(gè)跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體MCP-1與CCR2結(jié)合后，受體變構(gòu)并與G蛋白結(jié)合，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，發(fā)揮生物學(xué)作用，使各種炎性細(xì)胞尤其是單核細(xì)胞向病變部位聚集。近年來，大量研究表明MCP-1在治療炎癥疾病、免疫疾病中發(fā)揮了重要的作用，已經(jīng)成為人們治療這些疾病的新的靶點(diǎn)。   本文通過采用ELISA方法

13、檢測RA患者血清及關(guān)節(jié)液的RANTES、MCP-1水平，并與外傷截肢者對照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清和滑液中RANTES、MCP-1水平均顯著高于對照組，且RA患者關(guān)節(jié)液RANTES水平升高更為明顯（P0.01）。而RA患者血清MCP-1水平與滑液相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。   由于RANTES在RA患者外周單個(gè)核白細(xì)胞的表達(dá)與正常人無差異  6 ，本實(shí)驗(yàn)中RA患者關(guān)節(jié)液RANTES水平升高與血清相比更為明顯，提示RA患者血清增高的RANTES主要來自于病變關(guān)節(jié)部位。以上結(jié)果也進(jìn)一步表明患者血清及滑液中MCP-l和RANTES水平的升高、RA患者血清MCP

14、-1水平與滑液相比差異無顯著性可能與其體內(nèi)Th1/Th2細(xì)胞比例失衡及炎癥部位Th1細(xì)胞浸潤有關(guān)。   總之，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種慢性炎癥性疾病，最終發(fā)展至軟骨破壞及骨侵蝕，上述病理過程的發(fā)生發(fā)展目前認(rèn)為與血液中單核及淋巴細(xì)胞浸潤滑膜組織有關(guān)  7 。相關(guān)研究表明單核及淋巴細(xì)胞表面存在多種趨化因子受體，而關(guān)節(jié)局部可產(chǎn)生多種高濃度趨化因子，依濃度梯度可趨化單核及淋巴細(xì)胞進(jìn)入關(guān)節(jié)滑膜組織  8 ，浸潤于滑膜組織的細(xì)胞在激活狀態(tài)下又可分泌多種細(xì)胞因子其中也包括大量的趨化因子 9 ，如MCP-1、MIP-1a、MIP-1、RANTES等，它們之間的相互作用可進(jìn)一步

15、增加炎癥細(xì)胞在滑膜組織中的浸潤，從而使炎癥反應(yīng)周而復(fù)始的發(fā)生。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示MCP-1、RANTES在RA的發(fā)生、發(fā)展中均起著重要作用。   參考文獻(xiàn)   1Szekanecz Z，Szucs G，Szanto S，et al.Chemokines in rheumaticdiseasesJ.Curr Drug Targets，2006，7（1）:91-102.  2Klimiuk PA，Sierakowski S，Latosiewicz R，et al.Histological  patterns of synovi

16、tis and serum chemokines in patients with  rheumatoid arthritisJ.J Rheumatol，2005，32（9）:1666-1672.   3黃向陽，朱平.CC亞族趨化因子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展J.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2001，5（2）:119-122.   4Zlotnik A，Yoshie O.Chemokines:a new classification system  and their role in immunityJ.Immunity，2000，12（2）:1

17、21-127.   5朱平，王彥宏，樊春楊.趨化因子受體CCR5及其配體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑液及滑膜中的表達(dá)J.中華醫(yī)學(xué)雜志，2001，81（17）:1038-1041.   6Hosaka S，Akahoshi T，Wada C，et al.Expression of the  chemokine su2perfamily in rheumatoid arthritisJ.Clin ExpImmunol，1994，97（3）:451-457.   7Henneken M，Dorner T，Burmester GR，et al.Differential ex-pression of chemokine receptors on peripheral blood B cells from patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythemato-susJ.Arthritis Res Ther，2005，7（5）:R1001-R1013.   8Matthias Mack，Hilke Bruhl，Rudi Gruber，et al.Predominance  o