8-1藥物的抗菌試驗(yàn)

1、遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)第8章 藥物制劑的微生物學(xué)檢查1.掌握藥物的體外試菌試驗(yàn)方法（瓊脂擴(kuò)散法和系列稀釋法），了解藥物的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)。2.掌握一般滅菌制劑的無菌檢查方法和原理，熟悉特殊藥品的無菌檢查法。3.掌握非滅菌藥物的微生物總數(shù)測(cè)定方法，熟悉藥品的大腸桿菌檢查方法。4.了解一般藥品的沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和破傷風(fēng)桿菌的檢查方法。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)第1節(jié) 藥物的抗菌試驗(yàn) 藥物的體外抗菌試驗(yàn)包括用于區(qū)別藥物是抑菌或殺菌藥物的抑菌試驗(yàn)；測(cè)定藥物殺菌活性的殺菌試驗(yàn)；以及檢查兩種藥物聯(lián)合作用的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)等。一般抑菌藥物只能抑制微生物生長(zhǎng)，不能殺死微

2、生物，抑菌藥物被除去，微生物又可以恢復(fù)繼續(xù)生長(zhǎng)。殺菌藥物能殺死微生物，殺菌藥物除去后，微生物仍然不能生長(zhǎng)。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)藥物的抑菌作用或殺菌作用是在一定條件下相對(duì)而言的。在我們檢測(cè)時(shí)，藥物的作用受到用藥時(shí)培養(yǎng)基的組成、溫度、PH值及所用的菌種、菌量等各個(gè)因素有關(guān)。雖然說體外抗菌試驗(yàn)有很多優(yōu)點(diǎn)，但是由于體外抗菌試驗(yàn)沒有復(fù)雜的體內(nèi)因素影響，因此藥物體外抗菌試驗(yàn)和體內(nèi)抗菌試驗(yàn)可能會(huì)出現(xiàn)不一致的結(jié)果。所以，一般我們?cè)隗w外對(duì)藥物進(jìn)行測(cè)試后，有效的藥再要進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，如果體內(nèi)試驗(yàn)再次證實(shí)此藥有效的話，才能推薦應(yīng)用到臨床。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)第一節(jié)第一節(jié) 藥物的體

3、外抑菌試驗(yàn)藥物的體外抑菌試驗(yàn)一、藥物的體外抑菌試驗(yàn)（一）體外抑菌試驗(yàn)（一）體外抑菌試驗(yàn)藥物的體外抑菌試驗(yàn)是常用抗菌試驗(yàn)方法，其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴(kuò)散法。 稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法（斜面法）兩種。這兩種方法都可以用來測(cè)定藥物的最小抑菌濃度（MIC）：是指該藥物能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度，通常用gml或U/ml表示。具體的液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法見書本（P138圖8-1），固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法，又可分為平板法平板法和斜面法。斜面法。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)2. 2.2. 2.瓊脂擴(kuò)散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散，并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的原理進(jìn)行的

4、。一般用于細(xì)菌和酵母菌的藥敏試驗(yàn)。1. 濾紙片法（紙碟法）濾紙片法（紙碟法）濾紙片法是最常用的方法，適用于新藥的初篩試驗(yàn)（初步藥物是否有抗菌作用）及臨床的藥敏試驗(yàn)（細(xì)菌藥物第三性試驗(yàn)、以便選擇用藥）。濾紙片分濕、干兩種，可以在試驗(yàn)時(shí)用無菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面，也以預(yù)先做成一定濃度的干燥紙片。一般來說預(yù)先做成的干燥紙片實(shí)用一些而且準(zhǔn)確一些。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)至于干燥紙片的制備方法：選用吸水力強(qiáng)而且質(zhì)地均勻的濾紙，用打洞機(jī)制成6mm直徑的圓紙片，120干燥滅菌2小時(shí)。然后把配制好的各種適宜濃度的抗生素溶液，每100張紙片加入0.5ml藥液，使它均勻浸潤(rùn)，放在無菌平

5、皿中，37，使它干燥，分裝小瓶中，封口，4保存。如果是內(nèi)酰胺類抗生素還要放在-20保存。這就制成了干燥的含藥液的紙片。 一般藥敏試驗(yàn)常采用濾紙片法，我們可以根據(jù)抑菌圈的大小，來判斷菌種對(duì)藥物的敏感性，是敏感，中度敏感還是耐藥。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下根據(jù)抑菌圈大小來判斷，比如：抗生素或化療藥物 抑菌圈直徑（mm） 耐藥 中敏 敏感氯霉素 12 13-17 18紅霉素 13 14-17 18四環(huán)素 14 15-18 19卡那霉素 13 14-17 18遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.1. 打洞法打洞法在含菌瓊脂

6、平板上打洞（一般打6個(gè)孔，4個(gè)小孔加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，另外2個(gè)小孔加血清樣品，放在37，12-18小時(shí)，測(cè)定其抑菌圈直徑。所以說微量法適于藥物血濃度的監(jiān)測(cè)。優(yōu)點(diǎn)是微量（血清用量少）敏感，操作簡(jiǎn)便。除此之外還有管碟法、直接滴加法和挖溝法：適用于測(cè)試一種藥物對(duì)幾種細(xì)菌的抗菌作用。方法是先制備普通瓊脂平板，并在平板上挖直溝，在溝內(nèi)滴加藥液，在溝側(cè)接種細(xì)菌。經(jīng)過培養(yǎng)以后觀察家細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。我們可以根據(jù)溝和細(xì)菌間的抑菌距離的長(zhǎng)短，來判斷該藥物對(duì)這些細(xì)菌的抗菌能力。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)一）、一）、 體外體外殺菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)是用來評(píng)價(jià)藥物對(duì)微生物的致死活性的。1.1. 最低殺菌濃度（MB

7、C）（最小致死濃度MLC）的測(cè)定按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測(cè)了藥物的MIC。然后把未長(zhǎng)出菌的各個(gè)試管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上，培養(yǎng)后凡是平板上無菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度就是最小致死濃度（MLC）。如果是細(xì)菌的話可以稱為最小殺菌濃度（MBC）。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.活菌計(jì)數(shù)法將定量的試驗(yàn)菌加入到一定濃度的定量藥物中，作用一定時(shí)間后，取樣進(jìn)行活菌數(shù)計(jì)數(shù)，從存活的微生物數(shù)量計(jì)算出藥物對(duì)試驗(yàn)菌的致死率，從而判斷藥物的殺菌能力?；罹?jì)數(shù)一般是將定量的藥物與試驗(yàn)菌作用后混合液稀釋后，混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板，培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù)，由于一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的，所以可以用菌數(shù)乘

8、以稀釋倍數(shù)，計(jì)算出混合液中存活的細(xì)菌數(shù)?；蛘咭部梢杂梦⒖诪V膜過濾藥物與試驗(yàn)菌的混合液，洗凈藥液，將濾膜放在平板上培養(yǎng)后數(shù)菌落數(shù)。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.酚系數(shù)測(cè)定（石炭酸系數(shù)測(cè)定）酚系數(shù)是以酚為標(biāo)準(zhǔn)，將待測(cè)的化學(xué)消毒劑與殺菌效力相比較，所得的就是殺菌效力的比值。由于各種化學(xué)消毒劑殺菌原理各不相同，因而這種方法僅僅適用于酚類消毒劑殺菌效力的測(cè)定。具體的測(cè)定方法說是分別將酚及待測(cè)化學(xué)消毒劑按不同比例稀釋，各取5ml放到試管中，再加入經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后的菌懸液各0.5ml，混勻后放入 20水浴中，5、10、15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另一支5 ml的肉湯培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)24小

9、時(shí)記錄生長(zhǎng)情況。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)（三）、（三）、 聯(lián)合抗菌試驗(yàn)聯(lián)合抗菌試驗(yàn)主要用于測(cè)定兩種抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的相互影響。兩種抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抗菌作用加強(qiáng)的稱為協(xié)同作用；抗菌作用減弱的稱為拮抗作用；相互無影響的稱為無關(guān)。常用的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的方法有以下幾種。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)意義意義目的在于：治療混合性感染；目的在于：治療混合性感染； 預(yù)防或推遲細(xì)菌抗生素耐預(yù)防或推遲細(xì)菌抗生素耐 藥性的發(fā)生；藥性的發(fā)生； 聯(lián)合用藥可以減少劑量以聯(lián)合用藥可以減少劑量以 避免達(dá)到毒性劑量；避免達(dá)到毒性劑量； 聯(lián)合用藥比單一用藥時(shí)效聯(lián)合用藥比單一用藥時(shí)效 果更好。果更好。 遼陽

10、職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)出現(xiàn)出現(xiàn)4 4種結(jié)果：種結(jié)果：無關(guān)作用小，兩種藥物聯(lián)合作用的活性無關(guān)作用小，兩種藥物聯(lián)合作用的活性 等于其單獨(dú)活性；等于其單獨(dú)活性；桔抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于桔抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于 單獨(dú)抗菌活性；單獨(dú)抗菌活性；累加作用，兩種藥物聯(lián)合作用時(shí)的活性累加作用，兩種藥物聯(lián)合作用時(shí)的活性 等于兩種單獨(dú)抗菌活性之和；等于兩種單獨(dú)抗菌活性之和；協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于 其單獨(dú)作用的總和。其單獨(dú)作用的總和。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)棋盤稀釋法是常用的定量方法，首先棋盤稀釋法是常用的定量方法，首先分別測(cè)

11、定擬聯(lián)合的抗菌藥物對(duì)檢測(cè)菌分別測(cè)定擬聯(lián)合的抗菌藥物對(duì)檢測(cè)菌的的MICMIC。藥物最高濃度為藥物最高濃度為MICMIC的的2 2倍，對(duì)倍，對(duì)倍稀釋。兩種藥物的稀釋分別在方陣的倍稀釋。兩種藥物的稀釋分別在方陣的縱列和橫列進(jìn)行，這樣在每管（孔）中縱列和橫列進(jìn)行，這樣在每管（孔）中可得到不同濃度組合的兩種藥物混合液?？傻玫讲煌瑵舛冉M合的兩種藥物混合液。接種菌量為接種菌量為5 5105105CUFCUFmlml，3535孵育孵育1818h h后觀察結(jié)果。計(jì)算部分抑菌濃度后觀察結(jié)果。計(jì)算部分抑菌濃度（FICFIC）指數(shù)。指數(shù)。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)FICFIC指數(shù)指數(shù) 0 0 5 5為協(xié)

12、同作用；為協(xié)同作用；0 05 51 1為相加為相加 作用；作用； 1 12 2為無關(guān)作用；為無關(guān)作用；2 2為拮抗為拮抗 作用。作用。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)棋盤棋盤法的設(shè)計(jì)棋盤棋盤法的主要優(yōu)點(diǎn)在于甲、乙兩藥的每個(gè)藥物濃度都有單獨(dú)的和與另一個(gè)藥物不同濃度的聯(lián)合，因此能精確測(cè)定兩種抗菌藥物在適當(dāng)濃度的比例下所產(chǎn)生的相互作用。在進(jìn)行棋盤棋盤法之前應(yīng)先測(cè)定兩種抗菌藥物單獨(dú)對(duì)受試菌的MIC，然后以兩藥MIC的8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC的1/2、1/4、1/8濃度（或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4濃度）分別進(jìn)行聯(lián)合?？梢娕e例，如表1的青霉素G與鏈霉素聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)和表2的TMP+SM

13、Z的聯(lián)合作用。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)藥物及濃度 青霉素G(IUm1) 鏈霉素單藥對(duì)照 4 2 1 0.5 0.25鏈霉素（gml） 64 - - - - - - 32 - - - - - - 16 - - - - - - 8 - - - + + + 4 - - - + + +青霉素G單藥對(duì)照 - - - + + 細(xì)菌對(duì)照-：無細(xì)菌生長(zhǎng) +：有細(xì)菌生長(zhǎng)FIC指數(shù)=11+1616=2無關(guān)遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué) 2.紙條試驗(yàn)在含菌平板上垂直放兩條浸有不同藥液的濾紙條，培養(yǎng)后觀察兩藥形成的抑菌區(qū)的圖形來判斷兩藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，是無關(guān)、協(xié)同還是拮抗作用。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥

14、微生物微生物與藥學(xué)3.3. 紙條梯度平板試驗(yàn)將瓊脂培養(yǎng)基倒入平皿，平皿斜放凝固后制成斜面培養(yǎng)基。將平皿放平加入含抗菌藥物的瓊脂培養(yǎng)基，這樣在制成的雙層瓊脂平板中含有梯度濃度的抗菌藥物。要求其最小抑菌濃度的位置約處于平板的一半。然后將試驗(yàn)菌液均勻涂布在平板表面。取紙條浸透另一待檢藥液，按梯度中藥物濃度遞減的方向置于平板表面，培養(yǎng)后觀察形成的抑菌區(qū)的圖形以判斷兩種藥物之間的相互作用。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)二、二、藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn) 藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)又稱為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)治療試驗(yàn)或保護(hù)力試驗(yàn)。當(dāng)抗菌藥物進(jìn)入機(jī)體后，其效力的發(fā)揮要受體內(nèi)各種因素的影響。如血液及組織內(nèi)的蛋白質(zhì)

15、或磷脂、膿汁內(nèi)的核酸均與藥物結(jié)合，降低藥物的活性；壞死組織內(nèi)的酸性環(huán)境也能影響藥物的活性。機(jī)體內(nèi)的微生物，代謝活動(dòng)較低，對(duì)藥物的敏感性降低，有時(shí)還可形成細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌，對(duì)某些藥物不敏感。機(jī)體內(nèi)各組織中藥物的吸收，分布不同，使藥物的濃度難以恒定。因此在評(píng)定新藥的藥效時(shí)除做體外抗菌試驗(yàn)外還需要做體內(nèi)的抗菌試驗(yàn)。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)三、影響抗菌試驗(yàn)的因素 1. 菌種在抗菌試驗(yàn)中所用到的菌種，必需是國(guó)家衛(wèi)生部生物制品檢定所菌各保藏中心專門提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。在特殊情況下，也可以采用臨床新分離的并經(jīng)過鑒定、純化及合理保藏的菌株。而且我們要用到的試驗(yàn)菌種應(yīng)該選擇是對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的菌。因?yàn)槟菚r(shí)

16、菌種生命力最旺盛，這對(duì)于我試驗(yàn)測(cè)定的結(jié)果也會(huì)準(zhǔn)確些。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1. 培養(yǎng)基試驗(yàn)所有到的培養(yǎng)基應(yīng)按各試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)要求進(jìn)行配制，嚴(yán)格控制各種原料、成分的質(zhì)量及培養(yǎng)基的配制過程。要注意當(dāng)有些藥物具有抗代謝作用時(shí)，培養(yǎng)應(yīng)不能存在代謝物，否則抑菌作用將會(huì)被消除。培養(yǎng)基內(nèi)如果含有血清等蛋白質(zhì)時(shí)，有可能與某些抗菌藥物結(jié)合，使抗菌藥物失去，所以就要避免培養(yǎng)基混進(jìn)這類營(yíng)養(yǎng)物。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1. 抗菌藥物藥物的物理狀態(tài)、濃度、稀釋方法等都會(huì)直接影響抗菌試驗(yàn)的結(jié)果，必需精確配制。如果是固體藥物，必需使藥物溶解或使藥物呈均勻懸液。PH值應(yīng)調(diào)至中性，以確保藥物的穩(wěn)定

17、性和不影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。中草藥因?yàn)橛蓄伾秃绪焚|(zhì)，結(jié)果的判斷，應(yīng)特別注意。2. 對(duì)照試驗(yàn)為確保試驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行各種對(duì)照試驗(yàn)。試驗(yàn)菌對(duì)照：在無藥情況下，應(yīng)能在培養(yǎng)基內(nèi)正常生長(zhǎng)。溶劑及稀釋液對(duì)照：配制抗菌藥物時(shí)所用的溶劑及稀釋液均應(yīng)無抗菌作用。已知藥物對(duì)照：應(yīng)使已知抗菌藥物對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株出現(xiàn)抗菌效應(yīng)。 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)復(fù)習(xí)題：復(fù)習(xí)題：1. 藥物體外抑菌試驗(yàn)常用的方法有哪幾種？具體的試驗(yàn)操作方法？ 2. 如何測(cè)定藥物的最小致死濃度？ 3. 聯(lián)合抗菌試驗(yàn)常用的方法有哪些？ 4. 藥物體內(nèi)抗菌試驗(yàn)的方法？ 5. 抗菌試驗(yàn)的影響因素有哪些？ 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥

18、微生物微生物與藥學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 細(xì)菌對(duì)藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)細(xì)菌對(duì)藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)（藥敏片擴(kuò)散法）（藥敏片擴(kuò)散法） 掌握藥敏片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)的一般方法掌握藥敏片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)的一般方法體會(huì)藥敏實(shí)驗(yàn)在臨床用藥上的指導(dǎo)意義體會(huì)藥敏實(shí)驗(yàn)在臨床用藥上的指導(dǎo)意義 藥敏片是含有抗生素的濾紙片，將其置于涂滿待藥敏片是含有抗生素的濾紙片，將其置于涂滿待測(cè)菌的固體培養(yǎng)基上，抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)測(cè)菌的固體培養(yǎng)基上，抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)。根據(jù)抑菌環(huán)散，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)。根據(jù)抑菌環(huán)的大小可以判定細(xì)胞對(duì)此藥物的敏感度。的大小可以判定細(xì)胞對(duì)此藥物的敏感度。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院

19、制藥微生物微生物與藥學(xué)藥敏片：含各種抗生素的市售產(chǎn)品藥敏片：含各種抗生素的市售產(chǎn)品培養(yǎng)基平板：普通牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基平板：普通牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，待檢細(xì)菌的培養(yǎng)物。檢細(xì)菌的培養(yǎng)物。眼科鑷、無菌棉拭子、酒精燈等。眼科鑷、無菌棉拭子、酒精燈等。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)抗菌藥物紙片含藥量（ug）抑菌環(huán)直徑（mm）耐藥中度敏感敏感丁胺卡那霉素30 415-16 7頭孢唑啉3014 15-1718先鋒霉素I75 1521 頭孢噻吩3014 15-1718 頭孢噻甲羧肟3014 15-1718 氯霉素3012 13-1718 紅霉素15

20、13 13-1518 慶大霉素1012 13-1415 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)v無菌檢查的基本原則1.嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作2.正確進(jìn)行樣品采集v無菌檢查用培養(yǎng)基1.需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 2.真菌培養(yǎng)基3.選擇性培養(yǎng)基v陰性對(duì)照及陽性對(duì)照1.陰性對(duì)照2.陽性對(duì)照v抑菌試驗(yàn)v檢查法v結(jié)果判斷遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué) (藥品、敷料按中國(guó)藥典收載的無菌檢查法的規(guī)定進(jìn)行，生物制品應(yīng)按照生物制品制造及檢定規(guī)程中有關(guān)規(guī)定進(jìn)行)各種注射劑：用于肌肉、皮下和靜脈的各種針劑，包括注射用的無菌水、輸 液、注射劑 原液等。眼用及外傷用制劑：用于眼科手術(shù)、角膜創(chuàng)傷及一般創(chuàng)傷、

21、潰瘍和燒傷等外科用藥制劑。外科用的敷料、器材：如外 科手術(shù)用的脫脂棉、紗布、縫合線及一次性注射器與一次性無菌手術(shù)刀片、輸血袋等。植入劑：用于包埋于人體內(nèi)的藥物制劑，如不溶于水的激素、免疫藥物及抗腫瘤藥物等無菌的制劑?？晌盏闹寡?jiǎng)喝缒傅扔糜谥寡⒖杀唤M織吸收的各種藥物制劑。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)每批產(chǎn)品數(shù)量每種培養(yǎng)基最低檢驗(yàn)量注射劑注射劑10010%或最少4個(gè)100-50010瓶（支）5002%或最多30個(gè)眼用及其他非眼用及其他非注射產(chǎn)品注射產(chǎn)品4每個(gè)容器2005%或最少2個(gè)20010個(gè)桶裝固體原料桶裝固體原料5-5020%或最少4個(gè)502%或最少10個(gè)遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制

22、藥微生物微生物與藥學(xué)v需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基(硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基)v (中國(guó)藥典2000年版及中國(guó)生物制品規(guī)程一部1995年版配方)v成分：酪胨(胰酶水解) 15gv葡萄糖 5gvL胱氨酸 0.5gv硫乙醇酸鈉 0.5gv(或硫乙醇酸 ) 0.3mlv酵母浸出粉 5gv氯化鈉 2.5gv新鮮配制的0.1%刃天青溶液 1.0mlv（或新鮮配制的0.2%亞甲藍(lán)溶液) 0.5mlv瓊脂 0.5-0.7gv水 1000ml遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)l成分：l胨5gl酵母浸出粉2gl葡萄糖20gl磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1gl硫酸鎂(MgSO47H

23、2O)0.5gl蒸餾水1000ml遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)對(duì)氨基苯甲酸(PABA)培養(yǎng)基：用于磺胺類藥物磺胺類藥物的無菌檢查 照需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基處方及制法，各加對(duì)氨基苯甲酸0.125g，溶解后，搖勻，分裝，滅菌。聚山梨酸培養(yǎng)基：用于油劑油劑藥品藥品的無菌檢查 照需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基處方及制法，每 1000ml培養(yǎng)基中各加10ml聚山梨酸-80，搖勻后，分裝，滅菌。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)需氧菌陽性對(duì)照菌：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003或藤黃八疊球菌CMCC(B)28001厭氧菌陽性對(duì)照菌：生孢梭狀芽胞桿菌CMCC(B)64941真

24、菌陽性對(duì)照菌：白色念珠菌CMCC(F)98001或曲霉菌ATCC16404遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.直接接種法：直接接種法：適用于非抗菌作用藥物檢查2.薄膜過濾法：薄膜過濾法：適用于有抗菌作用的或大容量的供試藥物檢查 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)供試品裝供試品裝量量每管每管接種量接種量直接接種法直接接種法培養(yǎng)基量培養(yǎng)基量薄膜過濾法薄膜過濾法接種培養(yǎng)基量接種培養(yǎng)基量取供試品數(shù)取供試品數(shù)(瓶、支瓶、支)1或1以下全量15112-5以下半量15115-20以下2151120-50以下5401150-100以下(靜脈)全量-1005100-500全量-1005500以上500

25、-1005無菌粉針劑11無菌粉末原料6份各0.5g遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)培養(yǎng)基種培養(yǎng)基種類類培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)間d培養(yǎng)基數(shù)量培養(yǎng)基數(shù)量試驗(yàn)管試驗(yàn)管（支）（支）陽性陽性對(duì)照對(duì)照（支）（支）陰性陰性對(duì)照對(duì)照（支）（支）需氧菌需氧菌30-355211厭氧菌厭氧菌30-365211真菌真菌20-257511遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)供供試試品品需氧需氧菌菌厭氧厭氧菌菌真真菌菌對(duì)照試驗(yàn)對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果判定判定備注備注陽性陽性陰性陰性4_ _ _ _+_合格2+_ _ _+_不合格重新取樣復(fù)試2次仍有菌生長(zhǎng)，判不合格3_ _+_ _+_不合格4_ _ _+_不合

26、格5_ _ _ _重做按特殊藥品檢查6+_ _+培養(yǎng)基染菌或操作不嚴(yán)格更換培養(yǎng)基，重檢并嚴(yán)格無菌操作遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)l微生物限度檢查項(xiàng)目?jī)?nèi)容：l染菌量的檢查l細(xì)菌數(shù)l霉菌數(shù)l酵母菌數(shù)l控制菌的檢查l大腸埃希氏桿菌(大腸桿菌)l金黃色葡萄球菌l沙門氏菌l銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)l破傷風(fēng)桿菌l活螨的檢驗(yàn)遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)編號(hào)劑型細(xì)菌數(shù)霉菌、酵母菌數(shù)大腸桿菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌1片劑1000100-2酊劑100100-3膠囊劑1000100-4軟膏劑100100-5一般眼膏劑100-6一般滴眼劑100-7丸劑(滴丸、糖丸等)1000100-8氣霧劑10

27、010-9糖漿劑100100-遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)編號(hào)劑型細(xì)菌數(shù)霉菌、酵母菌數(shù)大腸桿菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌10膜劑 100/10cm2100/10cm2-11顆粒劑 1000100-12口服溶液劑、混懸劑、乳劑100100-13散劑外用散劑1000100100-14滴耳劑10010-15滴鼻劑10010-16洗劑100100-17搽劑100100-18凝膠劑100100-遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.目的細(xì)菌數(shù)測(cè)定我們是為了考察每克或每毫升供試品所污染的活細(xì)菌數(shù)，來判明供試品被細(xì)菌污染的程度。霉菌與酵母菌數(shù)的測(cè)定是考察每克或每毫升供試品所污染的活的霉菌和酵母

28、菌數(shù)，以此來判明供試品被真菌污染的程度。2.測(cè)定的方法細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基 +0.001%三苯四唑氯化物（TTC） 霉菌總數(shù)的測(cè)定 玫瑰紅鈉（馬丁）培養(yǎng)基 遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)編號(hào)各稀釋度菌落數(shù)比值 菌落數(shù)報(bào)告數(shù)1 101 1021 1031136516420164001600022760295461.6377503800022890271602.227100270003239202351.727600280003236196422.119600200004不可計(jì)465051351300051000042419122402405不可計(jì)30512305003000

29、060.500510遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)1.口服制劑中不能檢出大腸桿菌2.臟器口服制劑不得檢出沙門氏菌和大腸桿菌3.一般外用藥和眼科制劑不得檢出金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌4.用創(chuàng)傷、潰瘍、止血、深部組織的藥材藥粉制劑不得檢出破傷風(fēng)桿菌。遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)l供試品供試液膽鹽乳糖增菌液麥康凱（MacC）或曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂（EMB）平板，常用的針對(duì)大腸桿菌的選擇培養(yǎng)基，進(jìn)行分離培養(yǎng)純培養(yǎng)染色鏡檢IMVC試驗(yàn)、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)l 顯微鏡下的大腸桿菌 透射電鏡下的大腸桿菌遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物微生物與藥學(xué)曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂染色鏡檢