烯紫杉醇脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究

1、烯紫杉醇脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究    【摘要】     目的探討多烯紫杉醇脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)代謝過(guò)程。方法優(yōu)化色譜條件，以萃取濃集法處理生物樣品，內(nèi)標(biāo)法測(cè)定樣品中藥物含量；SD大鼠尾靜脈給藥后測(cè)定設(shè)定時(shí)間點(diǎn)體內(nèi)藥物濃度，用2.0版DAS軟件分析藥物體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果經(jīng)優(yōu)化色譜條件，在0.0525 g/ml濃度范圍內(nèi)，多烯紫杉醇線性關(guān)系良好。藥物體內(nèi)過(guò)程符合雙室模型，主要藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)均值為：分布半衰期(T1/2)為2.374 min；消除半衰期(T1/2)為299.038 min；清除率(CL)為

2、0.026 L/(min·mg)；表觀分布容積(V1)為0.219 L/kg。結(jié)論該研究為開發(fā)多烯紫杉醇脂質(zhì)體提供體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參考。     【關(guān)鍵詞】  多烯紫杉醇； 脂質(zhì)體； 藥物代謝動(dòng)力學(xué)； 大鼠    Pharmacokinetics Study on Docetaxel Liposome in RatsLIU Ruiying,WANG Shengmin,SONG Qingguo（School of Pharmacology,Southwest Jiaotong University, E

3、meishan,Sichuan 614202,China;Cridet Chemwerth Pharmaceutical Co.,Ltd，Chengdu,Sichuan 610041, China）Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for in vivio docetaxel determination and do some research on pharmacokinetics of docetaxel liposomes in rats. MethodsHPLC method was optimized and samples

4、were concentrated via ether extraction and determined with inner-standard method. Docetaxel liposome was given intravenously at 10 mg/kg to SD rats and blood sample was taken at chosen time interval and docetaxel conentration was determined, according to which pharmacokinetic parameters were gained

5、via DAS 2.0.ResultsThe chosen mobile phase was methonol: water(4555) and wavelength was 233nm. Within the range of 0.0525 g/ml there was an excellent linear correlation and the regression equation of peak area ratio to concentration was  Y =0.396 8 X +0.680 8 ( r = 0.999 4). The pharmacokinetic

6、 result revealed it a double-department model and the kinetic parameters were T1/2=2.374min, T1/2=299.038 min, CL=0.026 L/(min·mg)and Vl=0.219 L/kg.ConclusionThe study focused on kinetic properties of docetaxel liposome in order to provide theoratical support for clinical researches.Key words：D

7、ocetael;  Liposome;  Pharmacokineties;  Rats    紫杉醇和多烯紫杉醇在腫瘤預(yù)防、治療方面的作用，國(guó)內(nèi)外許多研究已經(jīng)證實(shí)1，但受其理化性質(zhì)的制約，現(xiàn)上市的一些制劑不能有效發(fā)揮其臨床療效2。而脂質(zhì)體靶向給藥技術(shù)研究日益成熟，使開發(fā)多烯紫杉醇新制劑成為可能。目前，紫杉醇脂質(zhì)體制劑已上市，并取得了良好的療效，而國(guó)內(nèi)多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑研究未見報(bào)道。為此，本研究探討該藥物制劑大鼠體內(nèi)代謝過(guò)程，以期為開發(fā)多烯紫杉醇脂質(zhì)體提供體內(nèi)動(dòng)力學(xué)參考。1  儀器與試藥1.1  儀器 高效液相色

8、譜儀（LC-20AT泵，SPD-20AC檢測(cè)器，AT-330柱溫箱，CBM-102）； TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。1.2  藥品與試劑 紫杉醇及多烯紫杉醇對(duì)照品（中國(guó)藥品與生物制品檢定所），多烯紫杉醇脂質(zhì)體（四川大學(xué)華西藥學(xué)院提供），乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；純凈水，其余試劑均為分析純。1.3  動(dòng)物 健康雄性SD大鼠5只，體重180220g，四川大學(xué)華西動(dòng)物中心提供。2  方法與結(jié)果2.1   色譜條件3，4色譜柱為Hypersil ODS C18（4.0mm×200 mm，5 m

9、）；流動(dòng)相為乙腈水(4555，加磷酸調(diào)pH至4.5)，流速1 ml/min；柱溫35；檢測(cè)波長(zhǎng)233 nm，內(nèi)標(biāo)為1 g/ml紫杉醇甲醇溶液。2.2    實(shí)驗(yàn)方案 健康雄性SD大鼠5只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，給藥前編號(hào)并稱重，按10 mg/kg分別尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑（1 mg/ml），給藥后5，10，15，30，60，120，240，480 min，斷尾取血0.5 ml，分離血漿，-20保存待測(cè)。2.3    溶液配制2.3.1   標(biāo)準(zhǔn)溶液精密稱取多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置100

10、ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，搖勻得 100 g /ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，4避光保存。精密吸取適量，用甲醇稀釋配成濃度分別為0.1，0.3，0.5，1.0，10.0，50.0 g/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.3.2    內(nèi)標(biāo)溶液精密稱取紫杉醇對(duì)照品適量，甲醇溶解并稀釋，制成濃度為1 g/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。2.4    血漿樣品處理 取大鼠血漿100 l，加入醋酸緩沖液10 l，充分混勻，加入內(nèi)標(biāo)液100 l、甲醇100 l、乙醚1 ml，旋渦混合5min，離心（5 000 r/min）10 min。精密吸取上清液0.8 ml，置于1 ml尖底離心

11、管中，氮?dú)饬鲹]干，殘?jiān)?0 l甲醇溶解，離心（10 000 r/min）10 min，待測(cè)。2.5  色譜專屬性考察以“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白血漿及血漿樣品，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。圖中基線平穩(wěn)，峰形銳利，說(shuō)明血漿中內(nèi)源性成分對(duì)測(cè)定成分無(wú)干擾。圖1  標(biāo)準(zhǔn)溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白血漿及血漿樣品色譜圖（略）2.6   標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系 取大鼠空白血漿100 l，共6份，分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液100 l，制成含標(biāo)準(zhǔn)溶液分別為0.05，0.15，0.25，0.5，5，25 g/ml的質(zhì)控樣品，按“2.4” 項(xiàng)下操作，10 l進(jìn)樣測(cè)定，記錄色

12、譜圖，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（g/ml）為橫坐標(biāo)，樣品峰面積（As）與內(nèi)標(biāo)峰面積（Ai）的比值（As/Ai）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=0.396 8X+0.680 8（r=0.999 4），表明多烯紫杉醇在0.0525 g/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.7    精密度考察取大鼠空白血漿100 l，按“2.6”項(xiàng)，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10 g/ml）的質(zhì)控樣品，每一濃度5個(gè)樣品，連續(xù)測(cè)定3 d，并做隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算日內(nèi)精密度（n=5）RSD分別為4.36%，3.78%，4.21%，日間精密度（n=15）RSD分別為5.48%，5.21

13、%，4.72%，表明該方法符合生物樣品分析要求。2.8    萃取回收率測(cè)定 取大鼠空白血漿100 l，按“2.6”項(xiàng)，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10g/ml）質(zhì)控樣品，每一濃度5個(gè)樣品，按“2.4”項(xiàng)下，10 l進(jìn)樣測(cè)定，以萃取后多烯紫杉醇的峰面積與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積之比（As/Ai），考察萃取回收率，3種濃度樣品萃取回收率分別為87.23%，91.46%，88.27%，表明采用乙醚做萃取溶劑，藥物回收率良好。2.9  藥物動(dòng)力學(xué)研究 取單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑的血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下，10l進(jìn)樣測(cè)定，每天做隨行標(biāo)準(zhǔn)

14、曲線，5只大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑后，平均藥-時(shí)曲線（見圖2、表1），采用2.0版DAS軟件處理表1數(shù)據(jù)，進(jìn)行模型擬合。結(jié)果見表2。圖2  單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后血藥濃度平均藥-時(shí)曲線（略）表1  單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)（略）表2  黃芩苷對(duì)SMMC7721細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響（略）3     討論    本研究首次以多烯紫杉醇脂質(zhì)體為對(duì)象，探討其在大鼠體內(nèi)的代謝過(guò)程。研究表明該方法線性關(guān)系良好，萃取回收率、方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度均較高，符合生物樣品分析要求5。    大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后，采用2.0版DAS軟件分析不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度，表明血漿藥-時(shí)曲線符合雙指數(shù)線性動(dòng)力學(xué)模型。    目前國(guó)內(nèi)有關(guān)紫杉醇脂質(zhì)體新制劑研究較多，而多烯紫杉醇脂質(zhì)體研究尚未見報(bào)道，因此本研究探討大鼠體內(nèi)行為，為促進(jìn)多烯紫杉醇在臨床中的應(yīng)用研究，提供一定的理論基礎(chǔ)及科學(xué)依據(jù)。    【參考文獻(xiàn)】  1 張先林.抗腫瘤藥多烯紫杉醇制劑的應(yīng)用