新藥的質(zhì)量研究

1、第五章 新藥（化學(xué)藥品）質(zhì)量研究的主要內(nèi)容和技術(shù)要求一、新藥和新藥的分類 新藥：是指未曾在中國境內(nèi)上市銷售的藥品。（藥品注冊管理辦法） 新藥的分類：見新藥注冊管理辦法附件2二、新藥研究的主要內(nèi)容： （一）臨床前研究 1. 藥學(xué)的研究 （1）原料藥的制備工藝研究 （2）原料藥的結(jié)構(gòu)確證研究 （3）制劑的選擇和處方工藝研究 （4）質(zhì)量控制方法研究 （5）穩(wěn)定性試驗 （6）包材的選擇 （7）質(zhì)量標準的建立與修訂 2. 藥理、毒理的研究 （1）主要藥效學(xué)的研究 （2）安全性試驗 一般藥理，急性毒性試驗，長期毒性試驗，過敏性、刺激性試驗，致突變試驗，生殖毒性試驗，致癌試驗，依賴性試驗等。 （3）非臨床藥

2、物代謝動力學(xué)研究 （二）臨床研究 期臨床試驗：初步的臨床藥理學(xué)和人體安全性評價試驗。觀察人體對于藥物的耐受程度和代謝動力學(xué)，為制訂給藥方案提供依據(jù)。 期臨床試驗：治療作用的初步評價階段。初步評價治療作用和安全性，推薦臨床給藥劑量。可采用隨機盲法對照實驗。 期臨床試驗：治療作用的確證階段。進一步驗證對目標適應(yīng)癥患者的治療作用和安全性，最終為藥物注冊申請的審查提供充分的依據(jù)。一般應(yīng)為具有足夠樣本量的隨機盲法對照試驗。 期臨床試驗：新藥上市后的應(yīng)用研究階段。目的是考察在廣泛使用條件下藥物的療效和不良反應(yīng)，評價使用的利益和風險關(guān)系，改進給藥劑量。 新藥（化學(xué)藥品） 質(zhì)量研究的基本要求 一、化學(xué)藥品質(zhì)量

3、研究的基本要求 1. 過程控制和終點控制的統(tǒng)一 過程控制：科學(xué)可行的制備工藝（GMP, SOP）；有效的中間體的質(zhì)量控制方法。 終點控制：藥品質(zhì)量標準 2. 質(zhì)量研究的科學(xué)性和規(guī)范性 是藥物安全性、有效性研究的基礎(chǔ)； 為制定可行的生產(chǎn)工藝提供依據(jù)； 為制定科學(xué)、可行的質(zhì)量標準提供依據(jù)。 3. 把質(zhì)量研究作為藥學(xué)研究的核心 4. 不同注冊分類的藥物，由于認知程度的不同，研究工作有所側(cè)重。 二、質(zhì)量研究用樣品的要求： 批次：至少3批。 代表性：代表相對穩(wěn)定的制備工藝和質(zhì)量。 系統(tǒng)性：小試、中試、工業(yè)化生產(chǎn)。 標準品和對照品：合法來源，或質(zhì)量符合要求。 三、研究內(nèi)容的確定： 根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)和理化特性

4、，制備工藝，劑型特點，處方與工藝，臨床應(yīng)用，參考文獻等。 原料藥質(zhì)量研究的主要內(nèi)容 一、性狀 （一）外觀 聚集狀態(tài)、色澤、臭、味、結(jié)晶性。 是對藥物感觀的一般性描述，一般無法定方法檢查，但仍應(yīng)準確描述。 （二）溶解性 1. 溶劑的選擇 應(yīng)根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，考查藥物在水與常用溶劑中的溶解度。應(yīng)選擇與藥物溶解特性密切相關(guān)的溶劑，配制制劑、制備溶液和精制操作有關(guān)的溶劑，避免使用昂貴的、毒性大的、不常使用的溶劑。 2. 表述方式 用“極易溶解”、“易溶”、“溶解”等術(shù)語來表示(見中國藥典凡例)。 3. 試驗方法按中國藥典凡例的規(guī)定操作。25±2，每隔5分鐘強力振搖30秒鐘，觀察30分鐘內(nèi)

5、的溶解情況。 （三）理化常數(shù) 理化常數(shù)包括：熔點, 餾程, 凝點, 比旋度, 折光率, 黏度, 相對密度, 酸值、碘值、羥值、皂化值，吸收系數(shù)等。 測定物理常數(shù)可以鑒別藥物，也可以反映藥物的純雜程度。注意事項： 應(yīng)按中國藥典附錄 規(guī)定的方法進行測定。測定前應(yīng)按規(guī)定對儀器進行校正。 測定理化常數(shù)的理論值時應(yīng)用精制品進行測定；質(zhì)量標準中規(guī)定的理化常數(shù)范圍，應(yīng)參考理論值并根據(jù)試制藥物的測定值來確定。 固體藥物：熔點、吸收系數(shù)。 液體藥物：餾程、相對密度、黏度、折光率。 油脂類還需測定：酸值、碘值、羥值、皂化值。 有手性中心的藥物：比旋度。 1、熔點 照中國藥典”熔點測定法”測定。 （1）中國藥典使用

6、毛細管法測定熔點，以供試品局部液化的溫度作為初熔的溫度，以全部液化的溫度作為全熔的溫度。 （2）所用的傳溫液、毛細管、升溫速度等對測定結(jié)果有影響，應(yīng)按中國藥典要求進行測定。 （3）應(yīng)使用分浸型的溫度計，溫度計應(yīng)用熔點標準品進行校正。 (4) 應(yīng)用DSC予以佐證。 2、吸收系數(shù)（ 1）測定方法 配制高、低兩種不同濃度的溶液（吸光度在0.30.4和0.60.8之間）各2份，或配制吸光度在0.20.8的系列濃度的溶液，在5臺不同型號的紫外分光光度計上測定，按下式計算吸收系數(shù)。 要求： 應(yīng)使用對照品進行測定。 測定前應(yīng)對容量儀器進行校正。 測定前應(yīng)對紫外分光光度計進行校正。 應(yīng)按干燥品計算。 以平均值

7、作為吸收系數(shù)，RSD應(yīng)小于1.5%。 3、晶型 （1）X射線粉末衍射法（中國藥典 附錄 F）。 X射線衍射法：用一束準直的單色X射線照射單晶或粉末晶體時，便發(fā)生衍射現(xiàn)象，發(fā)生衍射的條件符合布拉格方程： X射線衍射圖譜的橫坐標一般為2，縱坐標為衍射強度。X射線粉末衍射法可以用來對晶型進行考察，也可以用來鑒別藥物，測定含量。（2）熱分析法（DSC、DTA） 不同的晶型，熔點可能不同， DSC圖譜可能不相同。 要求： 固體制劑的原料藥應(yīng)對晶型進行研究，確定藥物的晶型。若藥物有同質(zhì)異晶現(xiàn)象，不同晶型藥物的生物利用度不同，應(yīng)將晶型的檢查列入質(zhì)量標準。 晶型的檢查可采用紅外光譜法或X射線粉末衍射法。 二、

8、鑒別鑒別試驗：是使用化學(xué)的、物理化學(xué)的或生物學(xué)的方法，來辨別藥物的真?zhèn)?。是對取自有標簽容器中樣品的確認。 要求：專屬性強、重現(xiàn)性好、靈敏、簡便。 通常采用 2 種以上不同類型的方法進行研究，從不同角度驗證目標化合物。 常用的方法有： 1、制備衍生物測定熔點 本法較繁瑣、費時，但專屬性強，必要時可使用。 （1）成酯的反應(yīng) 例： 炔雌醇和苯甲酰氯反應(yīng)成酯，炔雌醇苯甲酸酯的熔點為201。 （2）成腙的反應(yīng) 例：異煙肼和香草醛反應(yīng)生成異煙腙，熔點為226。 （3）酯的水解 例: 丙酸睪酮水解為睪酮和丙酸，睪酮的熔點為150156。 （4）與生物堿沉淀劑的反應(yīng) 2呈色反應(yīng)或沉淀反應(yīng) 要求：反應(yīng)機理明確，

9、現(xiàn)象明顯，專屬性強，簡便。（1）一般鑒別試驗： 為一類藥物共有的反應(yīng)，收載在中國藥典 附錄 “一般鑒別試驗”項下。 如：“丙二酰脲類”、“有機氟化物”、“托烷生物堿類”、“乳酸鹽”、“枸櫞酸鹽”、“鈉鹽”、“鉀鹽”、“氯化物”、“硝酸鹽”的鑒別反應(yīng)等。 具有 “一般鑒別試驗”項下鑒別基團的藥物，應(yīng)采用一般鑒別試驗方法對該基團進行鑒別。 例 水楊酸鹽（中國藥典 附錄 第20頁） （1）取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。 （2）取供試品，加稀鹽酸，即顯水楊酸的白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨溶液中溶解。 （2）個別藥物的鑒別試驗 例 芬布芬的鑒別取本品約0.1g，加硫酸2ml，溶液顯橙紅

10、色，加水稀釋后，顏色即消失，并生成白色沉淀。取本品約0.1g，加無水乙醇5ml，加熱使溶解，放冷，滴加三氯化鐵試液，即生成橘黃色沉淀。 3紫外特征吸收 （1）核對光譜的數(shù)據(jù) a規(guī)定吸收光譜峰、谷的位置。b規(guī)定吸收光譜峰、谷處的吸光度、吸收系數(shù)或吸光度比值。 C核對經(jīng)反應(yīng)處理后反應(yīng)產(chǎn)物的吸收特征。 （2）核對紫外吸收光譜 例1 葉酸的鑒別（p.137）取本品，加0.4%的氫氧化鈉制成每1ml中含10g的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在256、283與365±4nm的波長處有最大吸收；在256與365nm波長處的吸光度比值應(yīng)為2.83.0。 例2 苯妥英鈉的鑒別（p.440）取本品約

11、10mg，加高錳酸鉀10mg，氫氧化鈉0.25g與水10ml，小火加熱5分鐘，放冷，取上清液5ml，加正庚烷20ml振搖提取，靜置分層后，取正庚烷提取液，照紫外-可見分光光度法測定，在248nm的波長處有最大吸收。 4紅外分光光度法（中國藥典 附錄 C） 用于原料藥或制劑的鑒別，特別適合于同類藥物用其它理化方法不易區(qū)別者。方法：按要求錄制紅外吸收光譜，與藥品紅外光譜集中的標準圖譜比較，應(yīng)一致。 注意事項：（1）測定前應(yīng)對儀器進行校正（用聚苯乙烯薄膜對儀器的波數(shù)和分辨率進行校正）。 （2）確定制樣的方法。 （3）如果是多晶型的樣品，應(yīng)收載有效的晶型，并應(yīng)提出晶型轉(zhuǎn)化的條件。 （4）制劑的鑒別：一

12、般需提取出藥物后再錄制紅外圖譜進行鑒別。 （5）多組分藥物的鑒別：在指紋區(qū)選擇35個不受干擾的特征峰作為鑒別的依據(jù)。 （6）申報時應(yīng)對圖譜中的主要吸收峰進行解釋。 5色譜法色譜法專屬性強，可用于制劑和原料藥的鑒別。適用于用其他方法不易區(qū)別， 或在檢查和含量測定中已使用了色譜法的情況。方法：取供試品和對照品，在相同的色譜條件下進行色譜分離，要求其 Rf 或 tR 應(yīng)一致。 例1 鹽酸苯海索片的鑒別（p.726） 取本品的細粉適量，加氯仿制成每1ml中含鹽酸苯海索2mg的溶液，濾過，作為供試品溶液，另取鹽酸苯海索對照品，加氯仿制成每1ml中含鹽酸苯海索2mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗

13、，吸取上述溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（91）為展開劑，展開后晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液使顯色。供試品溶液主斑點的位置應(yīng)與對照品溶液主斑點相同。 例2 鹽酸林可霉素的鑒別（p.727）取本品與鹽酸林可霉素對照品，分別加流動相制成每1ml中含2mg的溶液，照含量測定項下的色譜條件進行試驗，供試品與對照品主峰的保留時間應(yīng)一致。6、生物化學(xué)或生物學(xué)方法 四. 檢查 檢查項下包括有效性、均一性、純度要求和安全性四個方面。（一）有效性 有效性是指與療效有關(guān)，但在鑒別、純度檢查和含量測定中不能控制的特殊性質(zhì)的檢查。 如： 結(jié)晶性（利福平）；制酸力（氫氧化鋁）；吸著力（藥用炭 ）；凝

14、凍濃度（明膠）；乙炔基（炔諾孕酮）；含氟量（諾氟沙星） 例 氫氧化鋁制酸力的檢查(p.553)取本品約0.12g，精密稱定，置250ml具塞錐形瓶中，精密加鹽酸滴定液（0.1mol/L）50ml，密塞，在37不斷振搖1小時，放冷后，加溴酚藍指示液68滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，每1g消耗鹽酸滴定液（0.1mol/L）不得少于230ml。 （二）純度的檢查中國藥典（2005年版）附錄新增了“藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則”。指導(dǎo)原則是參照ICH的文本Q3A和Q3B制訂的。適用于化學(xué)合成的或半合成的有機原料藥及其制劑。 1、雜質(zhì)的分類及其在藥品質(zhì)量標準中項目的名稱 （1） 藥物中的雜質(zhì) 雜

15、質(zhì)：影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 雜質(zhì)的來源： 生產(chǎn)過程引入：按規(guī)定工藝、原輔料生產(chǎn)，引入成品的合成的起始物、中間體、副產(chǎn)物、試劑等。稱為工藝雜質(zhì)。 貯存過程引入：經(jīng)穩(wěn)定性試驗確認在貯存過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。 藥品質(zhì)量標準中的雜質(zhì)不包括變更工藝或原輔料時產(chǎn)生的新的雜質(zhì)，也不包括摻入或污染的外來物質(zhì)。 （2） 雜質(zhì)的分類： 按化學(xué)類別和性質(zhì)分類： 有機雜質(zhì)：合成的起始物、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物、試劑、催化劑、配位體等。 無機雜質(zhì)：試劑、催化劑、配位體、重金屬或其他殘留金屬、無機鹽、其他物質(zhì)。 有機揮發(fā)性雜質(zhì)：殘留的有機溶劑。 按毒性分類：毒性雜質(zhì)和普通雜質(zhì)。（3） 雜質(zhì)項目的名稱： 明確為某

16、一物質(zhì)時，以該物質(zhì)的化學(xué)名稱作為項目名稱。如磷酸可待因中的“嗎啡”，阿司匹林中的“游離水楊酸”等。 僅知為某一類物質(zhì)時，用該類物質(zhì)的名稱。如“其他甾體”、“還原糖”、“有關(guān)物質(zhì)”等。 對未知雜質(zhì)，可根據(jù)檢測方法命名。如“雜質(zhì)吸收度”、“易炭化物”、“不揮發(fā)物”等。2、質(zhì)量標準中雜質(zhì)檢查項目的確定 根據(jù)生產(chǎn)和貯存過程可能引入的雜質(zhì)來確定，包括存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)。 (1) 考察產(chǎn)品中是否引入了合成的起始物、中間體、副產(chǎn)物、試劑。 (2) 通過影響因素試驗、加速試驗和長期試驗來確定產(chǎn)品中可能存在的降解產(chǎn)物。 (3) 對可能存在的無機雜質(zhì)進行考察并制定檢查項目。 (4) 有機揮發(fā)性雜質(zhì)：應(yīng)根據(jù)工藝

17、所使用的有機溶劑及殘留情況，確定檢查的項目。 (5) 除降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)外，在原料中已控制的雜質(zhì)在制劑中一般不再控制。 (6) 共存的異構(gòu)體和抗生素多組分一般情況不作為雜質(zhì)檢查項目，作為共存物質(zhì)。 3、要求 （1）在保證用藥安全、有效的前提下，允許有一定量的雜質(zhì)存在。 （2）一般為限量檢查。 （3）檢查項目的確定既要保證藥物的安全性、有效性，又要根據(jù)藥物在生產(chǎn)和貯存中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)來確定。 （4）應(yīng)重點檢查影響藥物療效、危害人體健康或能真實反應(yīng)藥品內(nèi)在質(zhì)量的雜質(zhì)。 （5）限量的確定，要確保藥物的安全性，可參考藥典的慣例，也要考慮生產(chǎn)的實際水平。 雜質(zhì)檢查方法 1. 酸堿度 分為酸度、堿度或酸

18、堿度。 方法：酸堿滴定法、pH值測定法、指示劑法。 2. 溶液的澄清度與顏色（中國藥典 附錄 A, B） （1）溶液的澄清度（中國藥典 附錄 B） 主要用于檢查原料藥中的不溶性雜質(zhì)。 方法：與溶劑或濁度標準液比較。在暗室內(nèi)，于傘棚燈下，照度為1000 lx, 從水平方向觀察、比較。 “澄清”：供試品溶液的澄清度相同于所用的溶劑或不超過0.5號濁度標準液。 （2）溶液的顏色（中國藥典 附錄 A） 檢查樣品中的有色雜質(zhì)。 檢查方法： 第一法：與標準比色液比較 第二法：測定吸光度 第三法：色差計法 3無機雜質(zhì) 主要有氯化物（Cl-）、硫酸鹽（SO42-）、鐵鹽（Fe3+）、重金屬（Pb2+）、砷鹽（

19、AsO43-, AsO33-）、氰化物（CN-）等。 方法：收載于中國藥典 附錄 。如“氯化物檢查法”、“砷鹽檢查法”等。 供試品與對照品在相同條件下比色、比濁，以確定雜質(zhì)的量是否超過限量。 注意： 應(yīng)按照中國藥典附錄的方法進行檢查。注意遵循平行原則。 根據(jù)藥物的性質(zhì)和檢查的方法確定供試品溶液的制備方法。 研究時，應(yīng)考察樣品本身對檢查是否有影響。 可取系列濃度的雜質(zhì)對照品溶液與供試品溶液進行比較，以確定雜質(zhì)含量的范圍。 4.有機雜質(zhì) 有機雜質(zhì)是指殘存在有機藥物中的原料、中間體、副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物等。雜質(zhì)能夠確定的，檢查的項目一般以雜質(zhì)的名稱命名；也可以雜質(zhì)的類別命名；不能確定的原料、中間體、副產(chǎn)

20、物一般稱為“有關(guān)物質(zhì)”。有機雜質(zhì)檢查的要求 (1) 根據(jù)制備工藝和穩(wěn)定性試驗結(jié)果，采用有效的分離分析方法，對實際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進行有效的控制。 （2）雜質(zhì)限度的確定 特定雜質(zhì)：在質(zhì)量標準中規(guī)定了限度、進行控制的雜質(zhì)，特定雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)可能是已知的，也可能是未知的。 非特定雜質(zhì)：在質(zhì)量標準中未單獨列出，僅采用總的限度來控制的雜質(zhì)。 對表觀含量在0.1%以上，或具有強烈生物作用的雜質(zhì)或毒性雜質(zhì)，需定性或確證其結(jié)構(gòu)。ICH關(guān)于有機雜質(zhì)檢查的要求： 報告限度（reporting threshold）：報告的限度。超出此限度的雜質(zhì)應(yīng)在檢驗報告中報告。 鑒定限度（identification thre

21、shold）：鑒定的限度。超出此限度的雜質(zhì)應(yīng)進行定性分析，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 質(zhì)控限度（qualification threshold）：質(zhì)控的限度。質(zhì)量標準中一般允許的限度，超出此限度時應(yīng)有充分的根據(jù)。原料藥的雜質(zhì)限度： ：最大日劑量報告限度鑒定限度質(zhì)控限度2g0.05%0.10%或1.0mg/天0.15%或1.0mg/天> 2g0.03%0.05%0.05%制劑的雜質(zhì)限度：最大日劑量報告限度鑒定限度質(zhì)控限度2g0.05%0.10%或1.0mg/天0.15%或1.0mg/天> 2g0.03%0.05%0.05% 檢查方法： （1）色譜法 紙色譜法 ： 主要用于極性較大的雜質(zhì)的檢查。

22、如地高辛中洋地黃毒苷的檢查（中國藥典（2000年版）。 薄層色譜法： 薄層色譜法分離效率高、簡便、不需要特殊的設(shè)備，有多種檢測的方法，是有關(guān)物質(zhì)檢查中常用的方法。 常用的方法：雜質(zhì)對照品法； 供試品溶液自身稀釋對照法。 方法的建立： 選擇色譜條件：選擇薄層板、展開劑、檢測方法等。應(yīng)能夠分離并檢出存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)。 確定檢查的方法： 方法的類型： 溶液的制備方法： 限度和檢查方法： 方法的驗證： 專屬性：分別點樣合成的起始物、中間體、副產(chǎn)物；作強力破壞試驗。證明主成分和雜質(zhì)能完全分離。 檢測限：分別點不同的量，確定檢測限。 耐用性：考察不同的薄層板、展開劑比例、濕度、溫度的變化等對分離的影

23、響。 溶液的穩(wěn)定性： HPLC（中國藥典 附錄 D） 1. 內(nèi)標法 2. 外標法 3. 加校正因子的主成分自身對照法； 4. 不加校正因子的主成分自身對照法； 5. 峰面積歸一化法。 GC法（中國藥典 附錄 E） 1. 內(nèi)標法 2. 外標法 3. 面積歸一化法 4. 標準加入法方法的建立： 1. 色譜條件的選擇 選擇固定相，流動相，檢測波長。 色譜條件應(yīng)能夠分離并檢出存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)，可用反應(yīng)的起始物、中間體、副產(chǎn)物、粗品、穩(wěn)定性試驗樣品進行試驗；做強力破壞試驗。 方法的驗證： 1. 色譜系統(tǒng)適用性試驗。 2. 測定雜質(zhì)含量: 專屬性、準確度、精密度、定量限、線性、范圍、耐用性。 3.

24、限量檢查：專屬性、檢測限、耐用性。 （2）紫外分光光度法 控制特定波長處的吸光度（雜質(zhì)有吸收，藥物無吸收）， 控制兩波長處吸光度的比值。 （3）化學(xué)法 容量法、比色或比濁的方法。 5. 殘留溶劑測定法: （中國藥典（2010年版）附錄 P） 檢查方法： 溶劑的分類： 6. 干燥失重或水分 干燥失重測定法（中國藥典 附錄 L） 水分測定法（中國藥典 附錄 M）： 第一法：費休氏法（Karl Ficher法）； 第二法：甲苯法。 7. 熾灼殘渣（中國藥典 附錄 N） （三）安全性的檢查 熱原或細菌內(nèi)毒素 異常毒性 降壓物質(zhì) 無菌 五含量測定 1重量法 用適當?shù)姆椒▽⒈粶y組分與樣品中的其他組分分離，

25、轉(zhuǎn)化為一定的稱量形式，用稱量來測定該組分含量的方法。 特點：精確，但操作繁瑣，費事。必要時采用。 例如：苯妥因鈉的含量測定（中國藥典 2005年版 p323） 順鉑的含量測定（中國藥典 2005年版 p440） 2. 容量法 容量法是將一種已知、準確濃度的試劑溶液滴定液滴加到供試品溶液中，至化學(xué)反應(yīng)按劑量關(guān)系反應(yīng)完全，根據(jù)滴定反應(yīng)的化學(xué)計量關(guān)系以及消耗滴定液的體積和濃度來計算測定組分含量的方法。 特點：精確，簡便，一般不需要對照品，是原料藥含量測定的首選方法。 常用的方法：中和滴定法，沉淀滴定法，配位滴定法，碘量法，溴酸鉀法，溴量法，高錳酸鉀法，鈰量法，亞硝酸納法，非水溶液滴定法等。 方法的建

26、立： 方法的選擇： 應(yīng)根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)選擇適當?shù)姆椒ǎ?方法的建立：作滴定曲線，以考察突躍的范圍，并確定終點時指示劑顏色的變化；確定滴定反應(yīng)的摩爾比和滴定度。 方法的考察：準確性（作對照實驗、回收試驗）、精密度（重復(fù)性）。 ICH關(guān)于容量法驗證的指南 1. 線性和范圍 稱取至少7份樣品，如標示量的20%、35%、50%、65%、80%、100%、120%，分別測定，記錄消耗滴定液的體積，以體積（ml）對樣品量作線性回歸，得線性方程： V =b m + a r = 2. 比例系統(tǒng)誤差（Proportional system error ） 電位滴定：0.3% 指示劑： 0.5% 3. 附加系

27、統(tǒng)誤差（Additional systematic error） 電位滴定：0.4% 指示劑： 0.6% 4. 精密度（pricision） 電位滴定：0.3% 指示劑： 0.5% 5. Repeatability 重復(fù)測定6份，計算RSD,一般要求小于0.3%。3紫外分光光度法（中國藥典 附錄 A） 特點：靈敏，簡便、較準確。 測定方法：（1）吸收系數(shù)法 配制一定濃度的供試品溶液，測定吸光度，按吸收系數(shù)計算含量。 （g/100ml） 特點：不需要對照品，但測定條件應(yīng)符合要求。 (2) 對照品比較法 配制一定濃度的供試品溶液和對照品溶液，測定吸光度，按下式計算含量。 特點：需要對照品，但可以克

28、服測定條件對結(jié)果的影響，使提倡的方法。 例如：注射用硫噴妥鈉的含量測定（p367）,甲硝唑片的含量測定（p124）。(3) 計算分光光度法 方法的建立： 選擇測定波長：應(yīng)選擇最大吸收波長； 選擇溶劑：易于溶解樣品，吸收度值穩(wěn)定，無毒、價廉。 確定供試品溶液的制備方法和濃度（吸光度應(yīng)在0.30.7之間）。 方法的考察：專屬性，線性和范圍，準確度，精密度。 4色譜法 GC 和HPLC(1) 內(nèi)標法 校正因子 含量 （2) 外標法 含量 方法的建立（1）色譜條件的選擇 根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)選擇色譜條件 HPLC 首選C18柱、硅膠柱，檢測器首先選擇紫外-可見檢測器。 GC 首先選擇通用性的固定相甲基聚硅氧烷（SE-30, OV-1）、5%苯基甲基聚硅氧烷(SE-54)、聚乙二醇2萬(PEG-20M) ；檢測器首先選擇FID。 （2）確定測定方法： 溶液的配制，測定的方法。 （3） 色譜系統(tǒng)適用性試驗 柱效（n），分離度（R），拖尾因子（T），重復(fù)性等。 （4） 方法的考察 專屬性，線性和范圍，精密度