交叉配血凝聚胺法

1、交叉配血(凝聚胺法)1 .原理凝聚胺(polymatching)法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，促進血清(漿)中的抗體與紅細胞相應抗原結合，再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細胞表面的負電荷，縮短細胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。2 .標本采集：2.1 標本種類：抽取靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將細胞配成5%鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細胞懸液。2.2 標本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗

2、凝血主張用EDTAK2(mg/dz)抗凝標本應無溶血，切標簽齊全。3 .標本儲存：急診標本30分鐘內(nèi)完成操作，標本應至4c冰箱保存7天。4.標本運輸：室溫運輸。5. 標本拒收標準：細菌污染。溶血標本，標簽不齊全不能作測定。6. 試劑：6.1 試劑名稱：凝聚胺試劑(polymatching)6.2 試劑生產(chǎn)廠家：(臺資)珠海貝索生物技術有限公司。6.3 試劑組成：試齊I1.低離子介質(zhì)(LowLonicMedium,LIM).試劑打開使用后，可置室溫貯存，未開封者2-25度貯存，有效期為2年。試劑2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).貯存及有效期同上。試齊3.重懸液(Resuspe

3、ndingSolution).貯存及有效期同上。試齊4.8.5%生理鹽水。7. 儀器：7.1 血型血清離心機：80-2型離心機江蘇金壇市大地自動儀器廠7.2 離心機：江蘇金壇市大地自動儀器廠7.3 電熱恒溫水箱：江蘇金壇市醫(yī)療器械廠7.4 顯微鏡：XSZ-H3（中國）8. 操作步驟及結果判斷：8.1 供受者紅細胞用生理鹽水配成3-5的細胞懸液。加樣量均為：血清2滴，紅細胞懸液1滴。主管：受血者血清+供者紅細胞懸液;次管：受者紅細胞懸液+供者血清;（陰陽對照管另設）。8.2 各管分別加低離子介質(zhì)0.65ml混勻置室溫1分鐘。加凝聚胺溶液2滴，混勻，置室溫15秒。8.31000 g（3400rpm

4、），離心10秒，棄上清液，管底保留約0.1ml液體。輕搖試管，目測紅細胞有無凝集。如無凝集，則重做前面試驗。8.31001 加入2滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結果。8.31002 凝塊在1分鐘內(nèi)分散，試驗結果為陰性，供受者血液配合;反之，如依照為不同強度的凝塊，試驗結果判為陽性，供受者血液不配合。實驗結果必須在3分鐘內(nèi)判讀。9. 操作性能：快速簡便，特異性強，靈敏度較高，重復性好。10. 超出范圍結果處理：10.1 細胞自凝：在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導致交叉配血假陽性;遇此現(xiàn)象可用37-40生理鹽水洗滌紅細胞并置37水溶中輕輕搖動，觀察結果。10.2 若病人血清（血漿）含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。10.3 紅細胞懸液為5為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當，反應不明顯易誤判。10.4 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應的抗體。11. 方法局限性：11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。11.2 操作方法應按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。