建立HIV抗體初篩實驗室的方法

1、 實驗研究與疾病監(jiān)測 建立 HIV 抗體初篩實驗室的方法吉 逵 張永剛 濰坊出入境檢驗檢疫局 (濰坊 261041 摘要 目的 規(guī)范 HI V 抗體初篩實驗室的管理 , 提高檢測質量 。 方法 根據(jù)衛(wèi)生部制定的 全國艾滋病檢測工作規(guī)范 及國家質檢總局的有關文件 , 對 HI V 抗體初篩實驗室的建立的方法進行了研究 。 結果 HI V 抗體初篩實驗室必須通過相應的審批程序 ; 具備人員條件和醫(yī)用設施才能開展 HI V 抗體的檢測工作 。檢測中要嚴格執(zhí)行 HI V 抗體檢測程序 ; 選用敏感性 、 特異性 、 功效率較高的試劑并建立實驗室質量體系 , 才能提高檢測結果的可信度 , 提高實驗室的檢

2、測質量 。 結論 必須按照規(guī)范化的方法建立 HI V 抗體初篩實驗室 , 才能保證初篩實驗室的工作質量 。關鍵詞 HI V 抗體 ; 實驗室 ; 初篩 中圖分類號 R512. 91 文獻標識碼 B 實驗室 HI V 抗體特異性檢測在 HI V 感染和 AI DS 的臨床診斷上起著至關重要作用 。 1997年 9月衛(wèi)生部制定了 全國艾滋病檢測工作規(guī)范 從法制 化的角度對艾滋病的檢測工作加以規(guī)范 。因此 , 在 籌建 HI V 抗體初篩實驗室時 , 必須遵守上述規(guī)范中 的各項規(guī)定 。1 HI V 抗體初篩實驗室的建立 (1 根據(jù)當?shù)?AI DS 防治工作的需要建立 HI V 抗 體實驗室須經(jīng)相應衛(wèi)

3、生部門審批同意 (或系統(tǒng)相應 部門批準 方可建立 。初篩實驗室須經(jīng)相應的衛(wèi)生 行政部門 (或局系統(tǒng)相應部門 組織確認實驗室專家 34人評審 , 經(jīng)審評組審定批準后 , 方能開展 HI V 抗體檢測工作 。(2 初篩實驗室必須具備的條件 人員條件 有 3名以上醫(yī)技人員 , 其中中級 衛(wèi)生技術職稱 1名以上 (供血機構的 HI V -抗體檢 測人員須有技師以上衛(wèi)生職稱 , 從事病毒檢測技術 工作 2年以上 , 并曾在國家或省級 HI V 抗體確認中 心舉辦的 HI V 抗體檢測學習班參加過學習并獲得 合格證書 。 必備設施 有獨立的試驗用房 , 污染區(qū)和清 潔區(qū)要分開 , 必要時建立半污染區(qū)和清潔

4、區(qū) 。設立 專門采血室及消毒室 。按照我國 HI V 抗體檢測工 作要求 , 要按酶聯(lián)免疫吸附試驗 (E LIS A 測定所需配 備試驗器材 , 必須配備酶標讀數(shù)儀和洗板機 、 精確移 液器 、 普通冰箱 、 低溫冰箱 、 離心機及消毒與污物處 理設施 、 安全防護用品和恒溫設備 。(3 開展檢測工作時要嚴格執(zhí)行 HI V 抗體檢測 程序 , 嚴格執(zhí)行國家規(guī)定的各種檢測要求 。 檢測試劑 初篩用的 HI V 抗體檢測試劑必 須是經(jīng)衛(wèi)生部注冊 , 經(jīng)過批檢檢定合格的 HI V12混 合型試劑 , 并在有效期內(nèi)應用 。阿克蘇試劑 (E LIS A 法 、 雅培試劑 (快速紙條法 , 為衛(wèi)生部首選指

5、定試 劑 。 操作嚴格按說明書進行 。 檢測程序a. 血液標本驗收合格后 , 用初篩檢測試劑檢測 如呈陰性反應 , 則作 HI V 抗體無反應陰性報告 。 b. 初篩檢測結果呈陽性反應的標本必須進行重 復檢測 , 在復檢時用另一種不同原理的檢測試劑予 以復檢 , 復檢陽性反應的標本 , 按規(guī)定送確認實驗室 確證 (表 1 。表 1 初篩陽性標本復檢對比表第 1次檢測第 2次原試劑檢測第 2次與第 1次不同原理檢測結果+ 陰性反應 + 陽性反應 +陽性反應 (4 要嚴格遵守保密制度 , 妥善保存各種實驗記 錄 , 不得私自修改或銷毀 。未經(jīng)省衛(wèi)生行政部門許 可不得向無關人員 , 或單位提供任何情

6、況 。初篩檢 測結果不是最終結果 , 不得向受檢者宣布陽性結果 。 (5 要加強 HI V 抗體初篩實驗室的質量管理 。 在技術上要精益求精 , 對實驗室工作人員進 行上崗業(yè)務培訓 。實驗室按照質量保證 、 質量控制 和質量評價方案實施細則開展工作 。 8 1 在平時要按接觸陽性標本做好預防性感染工 作 。實驗室應建立安全操作 、 消毒 、 復核報告等制 度 , 并嚴格執(zhí)行 。 質量保證 是指保證實驗結果正確性的整個 程序 , 是實驗室的最佳工作方式 。它包括可靠的實 驗方法 , 復核實驗記錄的正確性 。 質量控制 對結果可信程度的檢驗 。 每次實 驗必須進行質量控制 , 才能保證結果可靠性

7、。失控 時結果不可靠 , 必須重做 , 并找出失控原因 。 每次實驗都要進行質量監(jiān)控 。 一般采用內(nèi)部 對照及外部對照進行實驗室監(jiān)控 。 最理想的外部對 照設陽性 、 弱陽性臨界值及陰性標本對照可取得正 確可信的結果 , 可信度達到 99%為最佳 。2 HI V 抗體檢測試劑的評價 HI V 抗體特異性實驗室診斷方法發(fā)展的快 , 目 前國內(nèi)外診斷試劑 、 方法數(shù)十種 , 究竟哪一種方法最 好 ? 這是一個重大的研究課題 。 我國國家參比實驗 室為此做了大量科學可靠的選擇工作 , 對全國艾滋 病檢測工作起了重要的指導作用 ; 同時衛(wèi)生部提出 了首選試劑 、 方法的要求 , 各地各部門必須遵照執(zhí)

8、行 。 通常用于評價試劑質量的重要指標有敏感性 、 特異性 、 功效性 、 值 、 可信度 、 預期值等 , HI V 抗體 初篩實驗室工作人員必須熟練地掌握 。2. 1 敏感性 敏感性是指該試劑可以檢出樣本中 特異抗體最小含量的能力 。必須選擇敏感性高 , 在 初感染者血樣標本中含少量的特異抗體時能檢測出 陽性結果 , 對早發(fā)現(xiàn) 、 早治療起到良好的作用 。 使假 陰性率降到最低限度 , 使陽性正確度達到 98%以上 為理想合格試劑 。敏感性 =真陽性 (真陽性 +假陰性 100%。 2 特異性 是指該實驗方法能準確的區(qū)分非感 染團體的能力 , 也就是不產(chǎn)生假陽性反應 。在實驗 過程中選用的

9、方法特異性強 , 可提高檢測結果的可 信度 。 目前 HI V 血清篩選試劑的特異性沒有一種 為 100%, 所以對陽性標本血清要采用另一種原理 的試劑重做試驗 , 以求更高的特異性 。如果檢測試 劑特異性差 , 出現(xiàn)大量的假陽性 , 會使檢測結果不可 信 , 一定要引起初篩實驗室高度重視 。所用試劑特 異性應達 98%以上 , 方可在初篩實驗室使用 。 特異性 =真陰性 (真陰性 +假陽性 100%。 2. 3 功效率 (性 功效率是指能準確的區(qū)分真陽 性和真陰性結果的能力 , 就是說不產(chǎn)生假陽性 、 假陰 性結果 。 功效率是將敏感性與特異性相結合的一種 綜合質量 , 要求功效率達 98%

10、為比較理想的指標 。 功效率 =(真陽性 +真陰性 (真陽性 +假陽性 +真陰性 +假陰性 100%。如 :在 100份血樣中 , 有 5份為感染者 ,95份為 非感染者 , 記實結果 5個陽性 (有 4個為真陽性 95份陰性 (94份真陰性 。計算 :功效率 =(4+94 (4+1+94+1 100% =98%2. 4 值 雖然大多數(shù)試劑用特異性和敏感性指 標進行評價 , 但定量評價為更佳 。 E LIS A 試驗的評 價 OD 值能否接近切點是非常重要的指標 , 陽性 值高表明確認陽性標本能力好 ; 陰性 值高表明確 認陰性能力高 。在測 值時樣品在 50份以上才有 代表性 。2. 5 預

11、期值 預期值是考慮人群中感染率分布因 素 , 分為陽性預期值和陰性預期值 。陽性預期值 (PPV =真陽性 (真陽性 +假陽性 100%。陰性預期值 (NPV =真陰性 (真陰性 +假陰 性 100%。3 建立艾滋病實驗室質量體系 為確保艾滋病實驗室的工作質量 , 確保檢測結 果的正確性 , 公正性 、 科學性 , 按衛(wèi)生部及國家質檢 總局有關文件要求 , 并參照 IS O IEC17025 標準的檢 測實驗室能力的通知要求 , 結合本實驗室實際 , 制 定出質量體系文件 , 指導艾滋病檢測工作 。3. 1 質量方針 科學公正 、 準確及時 、 精益求精 , 要 維護實驗室的正確性和權威性 。

12、3. 2 質量體系 適用于本室的質量控制和質量保 證 。 質量體系基本要素應為 :(1 組織與管理 ;(2 文件控制 ;(3 人員配備 、 培訓及職責分工 ;(4 實驗場所及儀器設備 ;(5 儀器的校準及儀器操作規(guī)程 ;(6 質量控制的建立 ;(7 樣品的管理 ;(8 檢驗結果報告及記錄 。3. 3 保密制度 建立實驗室保密制度 , 加強保密意 識 , 規(guī)定保密范圍 。3. 4 規(guī)章制度 建立實驗室規(guī)章制度 , 使工作制度 化 、 實驗規(guī)范化 。規(guī)章制度的重點 : 9 1 實驗研究與疾病監(jiān)測 合資企業(yè)職工超聲診斷腎臟占位性病變結果分析夏 青 劉 震 青島市中心醫(yī)院 (青島 266001田曉青

13、山東國際旅行衛(wèi)生保健中心 (青島 266001 摘要 目的 評價超聲診斷腎占位性病變的臨床價值 。 方法 用 LOGI Q400型和 A LOK ASS D -1100型灰階超聲診斷儀 , 對進行健康體檢的 4380名合資企業(yè)職工的腎臟行常規(guī)掃查 。 結果 共檢出腎占位性病變 148例 , 檢出率 3. 38%。 其中經(jīng) CT 、 X 線腎盂造影 、 手術及病理證實的 73例 , 誤診 2例 , 漏診 1例 , 準確率為 97. 79%。 結論 超聲檢查對腎占位性病變的診斷正確率高 , 定位準確 , 是既準確可靠又經(jīng)濟的檢查方法 。關鍵詞 腎臟占位性病變 ; 超聲檢查 ; 企業(yè)職工 中圖分類號

14、 R692 文獻標識碼 B 腎臟占位性病變可分為囊性占位和實性占位 2大類 , 前者主要是指腎囊腫 , 后者主要是指腎腫瘤 , 90%以上為惡性 。 為了解合資企業(yè)職工發(fā)生腎占位 性病變的情況 ,1998年 9月2002年 7月 , 青島市 紡織醫(yī)院與山東國際旅行衛(wèi)生保健中心聯(lián)合在對紡 織系統(tǒng)合資企業(yè)職工進行健康體檢時 , 采用超聲診 斷儀進行腎臟常規(guī)掃查 , 現(xiàn)將檢查結果報告如下 :1 對象與方法1. 1 檢查對象 :紡織系統(tǒng)合資企業(yè)職工 , 共計 4380人 。 1. 2 檢查儀器 LOGI Q400型和 A LOK ASS D -1100型灰階超聲診斷儀 , 探頭頻率為 3. 5MHZ

15、。診斷標 準參照周永昌 , 郭萬學主編 超聲醫(yī)學 。1. 3 檢查方法 患者取俯臥位 、 仰臥位 、 或左右側 臥位 , 經(jīng)背部及側腰部位縱 、 橫 、 冠狀切面掃查 。2 結果2. 1 檢出率與準確率 在接受檢查的 4380名合資企 業(yè)職工中 , 共發(fā)現(xiàn)腎占位性病變者 148例 , 檢出率為 3. 38%。 其中有 73例 , 后被 CT 、 X 線腎孟造影、 手術及病 理所證實 ; 誤診 2例 ; 漏診 1例 , 準確率達 97. 97%。 (1 艾滋病實驗室管理制度 ;(2 艾滋病實驗室消毒及污物處理制度 ;(3 艾滋病實驗室個人防護制度 , 清場處理制 度 ;(4 艾滋病實驗室意外事故

16、處理制度 ;(5 艾滋病實驗室重要儀器 , 如 :酶標儀 、 洗板 機 、 高壓滅菌器 、 計算機等操作規(guī)程的建立 ;(6 實驗操作規(guī)程的建立 :HI V 抗體標準操作規(guī) 范 , 血液 (血清 采集及保存操作規(guī)程 ;(7 建立艾滋病實驗室檔案管理辦法 ;(8 建立必要的登記記錄 :低溫冰箱 、 普通冰箱 、 保溫箱及實驗室等溫度記錄卡及儀器使用記錄 , 檢 驗原始記錄及質控記錄及質控圖等主要記錄 。 艾滋病實驗室檢測結果的可信度受到各方面因 素的影響 , 在試驗過程中 , 應注意各個環(huán)節(jié) , 有一個 小問題的疏忽會直接影響檢測結果的可信性 。 在實 驗過程中應提高影響結果可信度的各個因素的可信 度 , 并將其定為每個檢測工作人員的神圣職責 。參 考 文 獻1 中華人民共和國衛(wèi)生部 . 全國艾滋病檢測工作規(guī)范 . 北京 :人民衛(wèi) 生出版社 ,19972 康來儀 . 艾滋病防治手冊 . 上海 :上海醫(yī)科