《病原微生物檢驗(yàn)》教學(xué)大綱

1、病原微生物檢驗(yàn)教學(xué)大綱供衛(wèi)生檢驗(yàn)專業(yè)用一、課程基本信息課程名稱：病原微生物檢驗(yàn)（Experime ntal Pathoge nic Biology Tech ni qu課程號：課程屬性：專業(yè)課先修課程：病毒學(xué)檢驗(yàn)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)學(xué) 分：3學(xué) 時(shí)：72理論學(xué)時(shí)：0 實(shí)驗(yàn)（實(shí)踐）學(xué)時(shí)：72二、教學(xué)目的要求病原微生物檢驗(yàn)是病毒學(xué)檢驗(yàn)和細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的配套實(shí)驗(yàn)課程，是衛(wèi)生檢驗(yàn)重要的專業(yè)課程之一，也是衛(wèi)生檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生必修的考試課程。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括病毒 學(xué)檢驗(yàn)和細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的基本技能、分離培養(yǎng)及鑒定技術(shù)、血清學(xué)技術(shù)，以及分子 生物學(xué)技術(shù)。通過實(shí)際操作訓(xùn)練，使學(xué)生加深對細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)和病毒學(xué)檢驗(yàn)基本理 論、基本技能、檢驗(yàn)方

2、法、研究手段的理解和掌握，加深對常用分子生物學(xué)技術(shù) 的認(rèn)識和把握。在教學(xué)過程中，注重對學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范性培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié) 果分析能力的培養(yǎng)，以及實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫能力的培養(yǎng)，全面提高學(xué)生分析和解決實(shí) 際問題能力。三、實(shí)驗(yàn)方式及基本要求實(shí)驗(yàn)方式：整個(gè)實(shí)驗(yàn)課程要學(xué)生自己完成，每 2 個(gè)學(xué)生為一個(gè)實(shí)驗(yàn)單位，共 同完成所有的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。基本要求：熟悉實(shí)驗(yàn)步驟，掌握實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)和影響因素，能正確的判斷和分 析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，?shí)驗(yàn)原理，主要試劑和儀器，實(shí)驗(yàn)步驟，結(jié)果，結(jié)論，討論。五、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目與內(nèi)容提要實(shí)驗(yàn) 1 動物接種技術(shù)及動物標(biāo)本采集1、動物接種：小鼠的腹腔接種、尾靜脈接種、腦內(nèi)接

3、種以及灌胃2、動物標(biāo)本采集：胸腺、肝臟、脾臟、摘眼球取血要求：熟悉動物實(shí)驗(yàn)常用的接種途徑和標(biāo)本的采集 實(shí)驗(yàn) 2 雞胚培養(yǎng)、原代細(xì)胞培養(yǎng) 1、原代細(xì)胞培養(yǎng)：選用 10 日齡的雞胚，進(jìn)行雞皮成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。 2、病毒的雞胚培養(yǎng)：選用 910 日齡的雞胚，采用尿囊腔途徑接種病毒。 要求：熟悉原代細(xì)胞培養(yǎng)及尿囊腔接種病毒的操作要點(diǎn)及影響因素。實(shí)驗(yàn) 3 傳代細(xì)胞培養(yǎng)選擇生長良好的 MDCK 細(xì)胞，通過消化、分散、分裝后進(jìn)行培養(yǎng)。要求：熟悉傳代細(xì)胞培養(yǎng)的操作、要點(diǎn)。實(shí)驗(yàn) 4 流感病毒分離培養(yǎng)在長成單層的 MDCK 田胞上，接種病毒后進(jìn)行培養(yǎng)，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，及細(xì) 胞病變的類型。要求：熟悉病毒的

4、細(xì)胞培養(yǎng)的操作、要點(diǎn)，以及判斷病毒感染細(xì)胞的程度。實(shí)驗(yàn) 5 血凝試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)包括一個(gè)單位血凝素的滴定、一個(gè)單位血凝素的確定和正式試驗(yàn)。 要求：掌握血凝效價(jià)、 血凝抑制效價(jià)的判斷， 熟悉實(shí)驗(yàn)的影響因素和操作要 點(diǎn)。實(shí)驗(yàn) 6 RT-PCR 檢測流感病毒利用 RT-PCR 技術(shù)檢測致病微生物致病基因，通過凝膠電泳觀察結(jié)果。 要求：熟悉 RT-PCR 技術(shù)的操作要點(diǎn)、影響因素及凝膠電泳的結(jié)果觀察。 實(shí)驗(yàn) 7 病毒學(xué)檢驗(yàn)討論利用所學(xué)病毒學(xué)檢驗(yàn)知識對病毒性感染的案例進(jìn)行分組討論。要求：了解突發(fā)公共衛(wèi)生事件的相關(guān)知識，熟悉判斷疾病的病原的要點(diǎn)。實(shí)驗(yàn) 8 抗菌藥物最小抑菌濃度測定完成某抗菌藥物最

5、小抑菌濃度的測定。要求：熟悉抗菌藥物最小抑菌濃度測定的操作步驟、 試驗(yàn)結(jié)果的判斷以及試 驗(yàn)的注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn) 9 消毒劑的定量殺菌試驗(yàn)完成某消毒劑定量殺菌的最小殺菌濃度和最小殺菌時(shí)間的測定。要求：熟悉消毒劑定量殺菌試驗(yàn)操作技術(shù)及結(jié)果計(jì)算方法。實(shí)驗(yàn) 10 細(xì)菌質(zhì)粒的提取與鑒定從細(xì)困中提取質(zhì)粒，并用瓊脂糖凝膠電泳檢測提取出來的質(zhì)粒， 在凝膠成像 分析儀中成像，分析。要求：熟悉質(zhì)粒的概念，掌握堿裂解法提取質(zhì)粒的原理、步驟和注意事項(xiàng)， 熟悉瓊脂糖凝膠電泳，學(xué)會使用凝膠成像分析儀。實(shí)驗(yàn) 11 病原性球菌分離鑒定以金黃色葡萄球菌或溶血性鏈球菌為病原性球菌的代表，從模擬污染樣品開 始，完成細(xì)菌的增菌、分離、生

6、化鑒定全過程。要求：熟悉病原性球菌分離鑒定的操作步驟，以及結(jié)果判斷。實(shí)驗(yàn) 12 致病性腸道桿菌分離鑒定以沙門菌或志賀菌為致病性腸道桿菌的代表，從模擬污染樣品開始，完成細(xì) 菌的增菌、分離、生化鑒定和血清學(xué)分型。要求：熟悉致病性腸道細(xì)菌分離鑒定的操作步驟，玻片凝集試驗(yàn)的基本要領(lǐng)，以及結(jié)果判斷。實(shí)驗(yàn) 13 霍亂弧菌快速檢驗(yàn)以水弧菌代替霍亂弧菌，完成細(xì)菌快速檢驗(yàn)，包括：動力觀察、制動試驗(yàn)、 染色鏡檢等。要求：熟悉霍亂弧菌快速檢驗(yàn)的目的和操作步驟。實(shí)驗(yàn) 14 腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌的分離鑒定從模擬污染樣品開始，完成腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌的增菌、 分離、生化鑒定和 毒素檢測。要求：熟悉腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌的菌落特征

7、、 生化特性和毒素檢測，掌握判 斷依據(jù)。附：學(xué)時(shí)分配實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目學(xué)時(shí)數(shù)動物接種技術(shù)與動物標(biāo)本米集4雞胚培養(yǎng)、原代細(xì)胞培養(yǎng)6傳代細(xì)胞培養(yǎng)4流感病毒分離培養(yǎng)6血凝試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)4RT-PCR 檢測流感病毒6病毒學(xué)檢驗(yàn)討論4抗菌藥物最小抑菌濃度的測定4消毒劑的疋量殺菌試驗(yàn)4細(xì)菌質(zhì)粒的提取與鑒定4病原性球菌分離鑒定6致病性腸道桿菌的分離鑒定8霍亂弧菌快速檢驗(yàn)4腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌的分離鑒定8總計(jì)72六、教材1. 李洪源主編：病毒學(xué)檢驗(yàn)，人民衛(wèi)生出版社，2006。2.張朝武主編：細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，人民衛(wèi)生出版社， 2006。七、參考書目1. 張朝武主編：現(xiàn)代衛(wèi)生檢驗(yàn)，第一版，人民衛(wèi)生出版社，2005。2. 余倩、許欣主編：衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)學(xué)細(xì)菌學(xué)分冊，四川科技出版社，2003。3. 王秀茹主編：預(yù)防醫(yī)學(xué)微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，2002。八、成績