血漿微量蛋白的測定及臨床意義

1、血漿微量蛋白的測定及臨床意義血漿微量蛋白的測定及臨床意義一、血漿蛋白質(zhì)測定方法的進(jìn)展 比色法：如總蛋白的測定方法：雙縮脲反應(yīng)法；白蛋白的測定方法：溴甲酚綠法。電泳法：是進(jìn)一步分離蛋白質(zhì)的方法。 免疫測定法：是利用抗原抗體反應(yīng)檢測標(biāo)本中微量物質(zhì)的分析方法。 血漿微量蛋白的測定及臨床意義二、免疫測定法的特點(diǎn)特異性好：即某一抗原只與其相應(yīng)的抗體起反應(yīng)。 敏感性高：可檢測出納克（ng）水平的量血漿微量蛋白的測定及臨床意義免疫測定法包括：1、 免疫擴(kuò)散法：敏感度在ug/ml，因此只能用于檢測含量較高的蛋白質(zhì)。且操作繁瑣、時(shí)間長，需18-48小時(shí)。2、 免疫電泳法：是區(qū)帶電泳與免疫擴(kuò)散相結(jié)合的方法。一般不

2、能定量，僅用于檢測異常蛋白成分。3、 免疫濁度法免疫濁度法：基本原理是：當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在二者比例合適，并有一定濃度的電解質(zhì)存在時(shí)，可以形成不溶性的免疫復(fù)合物，即沉淀反應(yīng)。 血漿微量蛋白的測定及臨床意義三、免疫濁度法的分類及原理透射免疫比濁法散射免疫比濁法。 血漿微量蛋白的測定及臨床意義透射免疫比濁法的原理當(dāng)一定波長的光線通過抗原抗體反應(yīng)混合液時(shí)，被形成的免疫復(fù)合物反射、遮擋或吸收而減弱。在一定范圍內(nèi)，吸光度（A）與IC量呈正相關(guān)。因此當(dāng)抗體量固定時(shí)，根據(jù)吸光度可計(jì)算出抗原量。要求形成的IC達(dá)到一定的數(shù)量，而且分子顆粒較大，否則難以精確測定，因此檢測靈敏度相對較低。 血漿微量蛋

3、白的測定及臨床意義散射免疫比濁法的原理光線通過檢測溶液時(shí)，被反應(yīng)形成的抗原抗體復(fù)合物折射而部分偏轉(zhuǎn)，產(chǎn)生散射光，散射光強(qiáng)度（I）與樣本的IC量、散射夾角（）成正比，而與入射光波長成反比。 血漿微量蛋白的測定及臨床意義濾光器濾光器光源光源散射法檢測器散射法檢測器透射法檢測器透射法檢測器反應(yīng)杯反應(yīng)杯血漿微量蛋白的測定及臨床意義散射免疫比濁法分為終點(diǎn)散射比濁法和速率散射免疫比濁法終點(diǎn)散射免疫比濁法：當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)進(jìn)行檢測，通常需10-30min，且靈敏度較低速率散射免疫比濁法：由于抗原與抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物的速度在單位時(shí)間內(nèi)時(shí)不同的，當(dāng)反應(yīng)開始時(shí)，進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測定可以發(fā)現(xiàn)在某一時(shí)間反應(yīng)速度最快，I

4、C形成最多，散射光強(qiáng)度相應(yīng)最大，即所謂速率峰（最大反應(yīng)速率Vmax），Vmax與待測抗原量呈正相關(guān)而獲得測定。 主要優(yōu)點(diǎn)：快速、靈敏、精密度高、檢測范圍廣血漿微量蛋白的測定及臨床意義四、免疫比濁分析的影響因素抗原抗體的比例：抗原抗體的比例是濁度形成的關(guān)鍵因素。免疫比濁法的基本條件是在保持抗體過剩的情況下測定加入的抗原。但抗體過剩又必須適量。一般原則是先確定某一被測物的正常值，以50%作為檢測范圍，抗體在此范圍內(nèi)應(yīng)保持過剩?？贵w的質(zhì)量：要求抗體有很強(qiáng)的特異性，有較高的效價(jià)，以及有高的親和力。一般采用R型抗體。反應(yīng)溶液：一般采用PH在左右的磷酸鹽緩沖液。增濁劑的作用：一般使用濃度為3%-4%的PE

5、G6000血漿微量蛋白的測定及臨床意義五、Array特定蛋白分析儀的簡介 原理：采用速率散射比濁法 測定速度：40-80結(jié)果/小時(shí)，每次可檢測40個(gè)標(biāo)本。特點(diǎn)：具有抗原過剩識(shí)別功能 血漿微量蛋白的測定及臨床意義抗原過剩識(shí)別在抗體量一定的情況下，免疫復(fù)合物生成量隨著抗原量的增加而增多，但抗原量超過一定域值后，免疫復(fù)合物的量卻隨之減少，影響檢測的準(zhǔn)確性。血漿微量蛋白的測定及臨床意義Array360抗原過剩識(shí)別功能工作原理在檢測到抗原抗體反應(yīng)速率峰之后，在反應(yīng)溶液中加入能與過剩抗體反應(yīng)的微量的Ag，若反應(yīng)溶液中有過剩抗體存在，則與加入的Ag反應(yīng)，形成一個(gè)過?？贵w峰；若反應(yīng)溶液中無過?？贵w存在，不能檢

6、測到過?？贵w峰的存在。當(dāng)一個(gè)反應(yīng)，有速率峰和過?？贵w峰同時(shí)存在時(shí)，儀器將確認(rèn)第一次出現(xiàn)的速率峰有效，并將結(jié)果打印出來；而沒有過剩抗體峰存在的反應(yīng)，儀器將重新對標(biāo)本進(jìn)行更高稀釋度的稀釋，然后再測定結(jié)果。血漿微量蛋白的測定及臨床意義速率峰速率峰過?？贵w峰過?？贵w峰ARRAY360的抗原過剩檢測血漿微量蛋白的測定及臨床意義六、部分血漿微量蛋白質(zhì)的臨床意義血漿微量蛋白的測定及臨床意義（一）、防衛(wèi)蛋白免疫球蛋白（Ig）：包括IgG、IgA、IgM IgA臨床意義：（1）低Ig血癥：分先天性和獲得性，獲得性低Ig血癥見于大量蛋白質(zhì)流失的疾病，如腎病綜合癥、淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤等；（2）高Ig血癥：見于感染，自

7、身免疫病、肝臟疾病及M蛋白血癥等、慢性活動(dòng)性肝炎IgG和IgM升高明顯。SLE以IgG、IgA或IgM升高較多見，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎則以IgM增高為主。正常參考值：IgG： IgA： IgM：血漿微量蛋白的測定及臨床意義補(bǔ)體：包括C3、C4補(bǔ)體系統(tǒng)是人體抵抗感染甚至腫瘤的多種天然防御機(jī)制之一，定量檢測各種補(bǔ)體成分有助于診斷免疫功能紊亂臨床意義：補(bǔ)體升高：一般見于各種傳染病、組織損傷、急性炎癥及腫瘤患者；補(bǔ)體降低：多見于自身免疫性疾病、SLE、慢性肝病、腎小球腎炎等。參考值： 血漿微量蛋白的測定及臨床意義和輕鏈（KAP和LAM）用于診斷單克隆-球蛋白病，主要見于多發(fā)性骨髓瘤，除IgG、IgA升高外，

8、可伴有KAP和LAM的過度分泌。參考值：KAP 5.74-12.8 g/L LAM 2.69-6.38 g/L血漿微量蛋白的測定及臨床意義（二）、急性時(shí)相蛋白（APR） 急性時(shí)相蛋白是指一組蛋白，它們的濃度在由外科手術(shù)、高溫、腫瘤、感染或其它原因引起的炎癥過程中明顯升高。 血漿微量蛋白的測定及臨床意義C反應(yīng)蛋白（反應(yīng)蛋白（CRP）：）：C反應(yīng)蛋白（反應(yīng)蛋白（CRP）：）：CRP是最敏感的急性是最敏感的急性時(shí)相蛋白之一，在炎癥及組織損傷發(fā)生時(shí)相蛋白之一，在炎癥及組織損傷發(fā)生6小小時(shí)內(nèi)，即升高，恢復(fù)時(shí)時(shí)內(nèi)，即升高，恢復(fù)時(shí)CRP下降。下降。CRP是非特異性指標(biāo)，主要用于結(jié)合臨床病史監(jiān)測疾?。喝缭u估炎

9、癥性疾病的活動(dòng)度；監(jiān)測系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病和外科手術(shù)后并發(fā)的感染；監(jiān)測腎移植后的排斥反應(yīng)，還可用于細(xì)菌性感染與病毒性感染的鑒別診斷等。 參考值：參考值： 血漿微量蛋白的測定及臨床意義結(jié)合珠蛋白（HP）： Hp是由肝臟合成的，其主要功能是能與紅細(xì)胞中釋放出的游離血紅蛋白游離血紅蛋白結(jié)合，每分子Hp可結(jié)合兩分子Hp不能被重新被利用，溶血后其含量急劇降低，血漿Hp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。 臨床意義：對溶血的診斷：血管內(nèi)溶血時(shí)，由于HP與血紅蛋白結(jié)合，其含量明顯下降；是反映肝功狀態(tài)的敏感指標(biāo)；是一種急性時(shí)相蛋白，炎癥時(shí)增高。 參考值：0.5-2.2 g/L 血漿微量蛋白的測定及臨床意義銅蘭蛋白（

10、CER）是一種含銅的2球蛋白， 95%的血清銅存在于CER中，抑制炎癥時(shí)脂氧及自由基形成 協(xié)助診斷Wilson病（常染色體隱性遺傳?。貉獫{Cp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆?fàn)詈藙t導(dǎo)致豆?fàn)詈俗冃裕ǜ味範(fàn)詈俗冃裕└腥尽?chuàng)傷和腫瘤時(shí)血漿濃度增加。但在營養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝病及腎病綜合征時(shí)下降參考值：21-53mg/dl 血漿微量蛋白的測定及臨床意義1-酸性糖蛋白（AAG） 在肝臟合成，也由白細(xì)胞合成。 AAG主要作為急性時(shí)相反應(yīng)的指標(biāo)，在風(fēng)濕病、惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時(shí)一般增加34倍 隨糖皮質(zhì)激素而增加，包括內(nèi)源性的庫欣綜合征和外源性強(qiáng)的松、地塞米松等藥物治

11、療時(shí)。在營養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害、腎病綜合征以及胃腸道疾病致蛋白嚴(yán)重丟失等情況下AAG降低。血漿微量蛋白的測定及臨床意義1-抗胰蛋白酶（AAT）AAT為白血球吞噬異物時(shí)所釋放的一種可中和溶酶體彈性蛋白酶的蛋白，是血清中主要的蛋白酶抑制劑，占血清中抑制胰蛋白酶活力的91% 臨床意義：炎癥、組織損傷時(shí)AAT增高；慢性阻塞性肺氣腫及嚴(yán)重肝病時(shí)AAT降低。 參考值：血漿微量蛋白的測定及臨床意義前白蛋白（PAB）PAB由肝臟合成的糖蛋白，由于PAB在電泳時(shí)遷移于白蛋白之前，故稱之為前白蛋白。PAB的半衰期很短，只有1天左右。 臨床意義：（1）肝病的診斷：PAB在肝臟合成，半衰期很短，因此可作為早期肝功能損傷

12、的特異性指標(biāo)。（2）可用于營養(yǎng)不良的診斷和監(jiān)測。（3）急性時(shí)相反應(yīng)診斷：是一種負(fù)急性時(shí)相蛋白，炎癥等急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)PAB可迅速降低。如果PAB持續(xù)保持低水平或進(jìn)一步降低，提示預(yù)后不良。 參考值：250-400mg/L 血漿微量蛋白的測定及臨床意義轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF） 由肝臟合成，半衰期8天。主要生理功能為：負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵，以TRF-Fe3+的復(fù)合物形式進(jìn)入骨髓，用于Hb合成，小部分則運(yùn)輸?shù)礁鹘M織細(xì)胞，用于形成鐵蛋白，以及合成肌紅蛋白、細(xì)胞色素等。參考值：血漿微量蛋白的測定及臨床意義轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）的臨床意義1、用于貧血的鑒別診斷： 在缺鐵性貧血中，TRF代償性合成增加 再生障礙性貧血時(shí)，血漿中TRF正常或低下2、負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白：炎癥、惡性病變下降。2、營養(yǎng)狀態(tài)指標(biāo)：在營養(yǎng)不良及慢性肝臟疾病時(shí)下降。血漿微量蛋白的測定及臨床意義急性時(shí)相反應(yīng)蛋白升高的速度不同： CRP和1-抗糜蛋白酶首先升高 在12小時(shí)內(nèi)AAG也升高， 然后AAT、Hp、C4和纖維蛋白原升高 最后是C3和CER升高， 這些APR通常在2-5天內(nèi)達(dá)到最高值。 聯(lián)合檢測APR