白細胞計數(shù)實驗報告

1、白細胞計數(shù)和分類目的：掌握血涂片制備的操作要領(lǐng)、瑞氏染色方法、正常外周血五種白細胞形態(tài)特點、原理：各種白細胞必須經(jīng)過染色，才易于區(qū)分其類別。常用者為瑞氏（ Wright s）染色法和姬姆薩 (Giemsa) 染色法。測定外周血液中各種白細胞的相對比值，以觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量變化，通過顯微鏡觀察染色血涂片，計算血液中各類白細胞的百分率，稱為白細胞分類計數(shù)。利用白細胞總數(shù)和各類白細胞的百分率，即可計算每 mm3血液中各類白細胞的絕對值。實驗器材：香柏油、蓋玻片、推片、采血針或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.46.8 磷酸鹽緩沖液、蒸餾水、計數(shù)板及專用蓋片、針1ml 刻度移液管、 1m

2、lEP管、光學顯微鏡。 20ul 刻度移液管、推片實驗步驟白細胞分類1血片制作：取一滴血，滴于潔凈無油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取邊緣光滑的另一玻片作為推片。將推片邊緣置于血滴前方，然后向后拉，當與血滴接觸后，血即均勻附在二玻片之間。此后以二玻片約呈30 45 度的角度平穩(wěn)地向前推至玻片另一端。推時角度要一致，用力應均勻，即推出均勻的血膜（血膜不可過厚、過?。⒅坪玫难科栏?，不可加熱。注：（ 1）良好涂片標準：關(guān)： )呈頭、體、尾舌形1）血滴大小 )血膜厚薄適宜2）推片與玻片之間角度 )兩邊留有空隙3）推片速度（ 2）涂片好壞與下列因素有2、血涂片的染色步驟：（1）用蠟筆在血膜兩端

3、各劃一道線，以免染料外溢，置涂片于染色架上。（2）滴加瑞氏染液，共計七八滴數(shù)，以蓋滿血膜為度，靜置1 分鐘。（3）再滴加等量的磷酸緩沖鹽溶液，輕輕搖動，并輕吹液體使染色液與緩沖液混合均勻，靜置15 分鐘。（4）用清水沖洗。切勿先傾去染液再沖洗，否則沉淀物附于血膜上不宜出去。沖洗后斜置血涂片于空氣中干燥。或先用濾紙吸取水分迅速干燥，即可鏡檢。3、白細胞分類計數(shù)：先用低倍鏡檢查涂片及染色是否均勻。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均勻處（一般在體尾交界處），在油鏡下由此處開始按其形態(tài)特征進行分類計數(shù)，計數(shù)移動時避免重復。根據(jù)所見到的100 個白細胞，記錄各種白細胞所占的百分數(shù)。4、各類白細胞的形態(tài)特征嗜中

4、性白粒細胞：圓形，胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細小顆粒（染色不佳時則看不清楚）。核為藍紫色。嗜酸性白細胞：大小、形態(tài)與中性白細胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒。核多數(shù)為兩葉。嗜堿性白細胞：大小、形態(tài)與中性白細胞大體相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍色，常遮蓋在核上。核分葉不明顯淋巴細胞：分大小兩種，小淋巴細胞圓形，核染成深紫色，圓形或腎形，胞漿很少，常呈一小片月牙狀，染成藍色。大淋巴細胞，核圓形或腎形，胞漿相對較多，染成天藍色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。單核細胞：核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則。胞漿較多，染成淺灰藍色白細胞計數(shù)加稀釋液用吸管吸取白細胞稀釋液0.

5、38ml 于小試管中。吸取血液 用微量吸管吸取新鮮全血或末梢血 20ul ，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細胞稀釋液的底部， 輕輕放出血液， 并吸取上層白細胞稀釋液清洗吸管 2-3 次混勻 將試管中血液與稀釋液混勻，待細胞懸液完全變?yōu)樽睾稚珱_池 再次將小試管中的細胞懸液混勻。用滴棒蘸取細胞懸液1 滴，充入改良Neubauer 計數(shù)板的計數(shù)池中，室溫靜置2-3min ，待白細胞完全下沉。計數(shù)計算在低倍鏡下計數(shù)四角 4 個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)白細胞總數(shù) =4 大格白細胞數(shù)（ N） /4 × 10 ×20×106= N÷20×109/L注：計

6、數(shù)板上下各一個計數(shù)池計數(shù)區(qū)域分為9 個大方格，四角的大方格各劃分為16 個中方格，中央大方格劃分為25 個中方格。四角的大方格為白細胞計數(shù)區(qū)，大方格四邊壓線細胞計左不數(shù)右，計上不數(shù)下實驗結(jié)果白細胞總數(shù)白細胞 =(35+42+39+37) /20*109=7.65*109/L中性粒細胞65 個, 占 65%單核細胞 5 個, 占 5%淋巴細胞:27個, 占27%嗜酸性粒細胞3個,占2%嗜堿性粒細胞 1 個, 占 1%注意事項1、. 采血時針刺深度必須適當， 不能過度擠壓， 防止組織液滲入或采血時間太長引起血液凝固。2、白細胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)， 大方格間的細胞數(shù)不得相差 10 個以上，兩次重復計數(shù)誤差不得超過