無菌培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證方案

1、1、目的：對生產(chǎn)部制劑車間的灌裝機(jī)進(jìn)行培養(yǎng)基無菌灌裝試驗(yàn),通過灌裝后的產(chǎn)品污染程度檢測灌裝工藝能否保證產(chǎn)品的無菌。2、范圍：生產(chǎn)部制劑車間的灌裝生產(chǎn)線。3、責(zé)任：3.1 驗(yàn)證小組3.1.1 設(shè)計(jì)、組織和協(xié)調(diào)驗(yàn)證試驗(yàn)。3.1.2 準(zhǔn)備、檢查和批準(zhǔn)驗(yàn)證方案。3.1.3 準(zhǔn)備驗(yàn)證報(bào)告并且流轉(zhuǎn)批準(zhǔn)。3.1.4 評(píng)估所有的測試結(jié)果。3.1.5 完成此文件規(guī)定的驗(yàn)證報(bào)告。3.1.6 驗(yàn)證小組成員名單姓名職務(wù)總經(jīng)理（驗(yàn)證小組組長）QA經(jīng)理生產(chǎn)部經(jīng)理制劑主管制劑技術(shù)員3.2 生產(chǎn)部3.2.1 對灌裝車間進(jìn)行清掃、消毒，保證環(huán)境清潔。3.2.2 操作灌裝機(jī)。3.2.3 按照規(guī)定的程序進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝。3.2.4

2、進(jìn)行日常清洗、維護(hù)。3.3 QA3.3.1 取樣。3.3.2 進(jìn)行目檢。3.3.3 進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測。3.3.4 檢查和批準(zhǔn)驗(yàn)證方案和報(bào)告。4、描述 制劑車間使用x公司的灌裝流水線，包括：洗瓶機(jī)、隧道烘箱、灌裝機(jī)、軋蓋機(jī)，y公司的凍干機(jī)進(jìn)行凍干。5、程序5.1 使用的設(shè)備及材料5.1.1 洗瓶機(jī)生產(chǎn)廠家型號(hào)安裝地點(diǎn)最大清洗速度制劑洗瓶間133瓶/min5.1.2 隧道烘箱生產(chǎn)廠家型號(hào)安裝地點(diǎn)容量制劑洗瓶間133瓶/min5.1.3 灌裝機(jī)安裝地點(diǎn)最大灌裝速度制劑灌裝間133瓶/min5.1.4 凍干機(jī)生產(chǎn)廠家型號(hào)安裝地點(diǎn)容量制劑凍干機(jī)房5m25.1.5 灌裝材料5.1.5.1 瓶子生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼

3、批號(hào)備注1221020025.1.5.2 膠塞生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼批號(hào)備注2ml1221020205.1.5.3 鋁蓋生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼批號(hào)備注2ml1221020505.1.6 培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號(hào)失效期胰蛋白胨大豆肉湯0105232003.55.1.7 菌種5.1.7.1 枯草桿菌(Bacillus Subtilis) ATCC 66335.1.7.2 白色念珠菌(Candida alblcans) ATCC 102315.1.7.3 廠房環(huán)境分離菌5.2 培養(yǎng)基準(zhǔn)備5.2.1 在10L血清瓶中加入2L的熱注射用水，再加入240g胰蛋白胨大豆肉湯充分?jǐn)嚢?，等溶解后再加?L的熱注射用水，整個(gè)培

4、養(yǎng)基量為8L。5.2.2 將配制好的培養(yǎng)基放到高壓蒸汽滅菌柜中121滅菌30分鐘，滅菌后取出血清瓶，從瓶中取4瓶（50ml/瓶）作為陰性對照，其中2瓶于32±2培養(yǎng)14天，另外2瓶于23±2培養(yǎng)14天。觀察有無微生物污染。5.3 培養(yǎng)基無菌灌裝5.3.1 準(zhǔn)備無菌的灌裝器具(針、硅管、等等)，聯(lián)接到灌裝機(jī)上。硅管一頭放入滅菌培養(yǎng)基中。5.3.2 用的瓶子，膠塞和鋁蓋按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（P-SOP-048,P-SOP-049）進(jìn)行洗滌，滅菌。5.3.3 按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（P-SOP-051）進(jìn)行液量調(diào)節(jié)，按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（P-SOP-050）進(jìn)行灌裝，每瓶灌裝2ml滅菌培養(yǎng)基。5.3

5、.4 使用2個(gè)針頭進(jìn)行灌裝，每瓶2ml。灌裝的速度為70瓶分鐘。5.3.5 灌裝的總瓶數(shù)為3000瓶以上，全部為半壓塞。5.3.6 灌裝時(shí)將瓶子按順序放箱中，給箱編上號(hào)，以便能夠追查出受污染的瓶子灌裝時(shí)狀態(tài)。5.3.7 灌裝結(jié)束后，將半壓塞的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)中，在機(jī)內(nèi)壓塞。5.3.8 加塞結(jié)束后將瓶子轉(zhuǎn)移至軋蓋間進(jìn)行軋蓋。5.3.9 將灌裝好的瓶子倒置于32±2培養(yǎng)7天，然后在23±2培養(yǎng)7天。5.4 環(huán)境檢查5.4.1 按照100級(jí)和10,000級(jí)潔凈級(jí)別檢查項(xiàng)目實(shí)施，下面為實(shí)施項(xiàng)目：5.4.1.1浮游菌測定5.4.1.1.1在灌裝過程中的關(guān)鍵操作點(diǎn)采樣。5.4.1.1

6、.2使用儀器 : FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器()。5.4.1.1.3參照SOP(QA-SOP-112)浮游菌測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。5.4.1.2塵埃粒子測定5.4.1.2.1在灌裝過程中的關(guān)鍵操作點(diǎn)采樣。5.4.1.2.2儀器：光散射塵埃粒子計(jì)數(shù)器（）5.4.1.2.3參照SOP(QA-SOP-106)塵埃粒子測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測。5.4.1.3表面菌測定5.4.1.3.1表面菌采用RODAC培養(yǎng)皿進(jìn)行測定5.4.1.3.2在灌裝中對各測試點(diǎn)進(jìn)行取樣，特別是在離灌裝針頭30cm以內(nèi)的區(qū)域。5.4.1.3.3 對無菌服的袖子和胸部以及操作人員的手套取樣。5.4.1.3.4 參照SOP(Q

7、A-SOP-108)表面菌測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。5.4.1.4 沉降菌5.4.1.4.1培養(yǎng)皿：營養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)平板（90）。5.4.1.4.2參照SOP(QA-SOP-107)沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。5.5 灌裝培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)5.5.1 從灌裝的培養(yǎng)基中每1000瓶抽取20瓶，從每箱中均勻取樣，20瓶接種0.1ml(含約100CFU)枯草桿菌(Bacillus Subtilis) ATCC 6633，20瓶接種(0.1ml約含100CFU)白色念珠菌(Candida alblcans) ATCC 10231。5.5.2 剩下的20瓶用于接種0.1ml(含約100CFU)廠房檢查

8、分離菌。5.5.3 將接種枯草桿菌及廠房環(huán)境分離菌的瓶子放置到32±2的恒溫箱培養(yǎng)7天，將接種白色念珠菌的瓶子放置到23±2的恒溫箱培養(yǎng)7天，觀察菌的生長情況。6、 灌裝培養(yǎng)基的培養(yǎng)及計(jì)算污染度(%)6.1 培養(yǎng)基倒置到32±2的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7天。然后在23±2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天。6.2 進(jìn)行周期性的檢查(7天一次)，檢查受污染的瓶子數(shù)在其箱上編上號(hào)并記錄。6.3 假如受污染的瓶子有破損，在計(jì)算污染度時(shí)應(yīng)將其排除在外。6.4 未受到損傷的瓶子培養(yǎng)共14天。6.5 污染度計(jì)算式 染菌的瓶數(shù)（因瓶子破損染菌的除外） 污染度（%）= -×100%灌裝

9、總瓶數(shù)破損的瓶數(shù)7、合格標(biāo)準(zhǔn)7.1 滅過菌的培養(yǎng)基的陰性對照結(jié)果合格（無菌生長）。7.2 培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)中至少有50%的瓶中有明顯的微生物生長。7.3 環(huán)境檢測符合以下基準(zhǔn)：項(xiàng)目塵埃粒子浮游菌沉降菌表面菌0.5um5um胳膊胸部手套單位個(gè)/m3CFU/m3CFU/皿CFU/25cm2基準(zhǔn)350005137.4 培養(yǎng)基灌裝污染率小于0.1%。注射劑無菌保證工藝研究與驗(yàn)證常見技術(shù)問題（四）解答內(nèi)容注：以下均為2008年度第一期講習(xí)班（注射劑無菌保證工藝研究與驗(yàn)證技術(shù)要求）參會(huì)代表所提問題，本期講習(xí)班講習(xí)組根據(jù)目前的有關(guān)技術(shù)要求，經(jīng)過認(rèn)真梳理、分析、總結(jié)后，現(xiàn)予以發(fā)布，并就相關(guān)問題進(jìn)行討論與交流。

10、    30、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，培養(yǎng)基滅菌后、灌裝前，再經(jīng)濾膜除菌過濾，以觀察濾器在消毒安裝過程中的無菌效果，是否可行？    答：培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)是對包括無菌過濾在內(nèi)的所有步驟的無菌性保證程度的考察，推薦配制培養(yǎng)基后直接用于無菌過濾及隨后的灌裝過程，實(shí)際操作中要注意防止不溶性顆粒堵塞濾器。    31、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)?zāi)甓仍衮?yàn)證每年兩次，每次幾批？    答：對于某個(gè)產(chǎn)品的年度再驗(yàn)證，通常的做法是每年進(jìn)行兩次培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)，每次一批。    32、

11、中國藥典2005年版無菌培養(yǎng)時(shí)間已變?yōu)?4天，培養(yǎng)基模擬灌裝后在兩個(gè)溫度的培養(yǎng)試驗(yàn)是否也需延長？    答：總培養(yǎng)時(shí)間不得少于14天，可以分成兩個(gè)溫度（22.5度和32.5度）各培養(yǎng)至少7天，也可以一個(gè)溫度（22.5度）直接培養(yǎng)。    33、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)置信限為95%，染菌概率0.1%，請具體解釋一下使用哪個(gè)統(tǒng)計(jì)方法，如何計(jì)算查表得出。    答：有關(guān)計(jì)算公式的詳細(xì)說明，可參照國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管司和藥品認(rèn)證管理中心組織編寫的藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（2003）（化學(xué)工業(yè)出版社）一書第2

12、58頁。    有兩種計(jì)算方法。一種是采用泊松分布的近似值計(jì)算公式，即    P（X>0）=1e-Np>0.95    其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，p0.1（污染概率）    另一種計(jì)算方法是更為精確的二項(xiàng)式計(jì)算公式，即    P(X>0)=1（1X）N    其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，X= 0.1（污染概率）    在書中的第259頁，列

13、有“可信限為95%時(shí)一次模擬分裝中模擬分裝量、污染數(shù)量與污染概率關(guān)系表”，可從該表查出模擬分裝數(shù)量與污染數(shù)量的對應(yīng)數(shù)值。    34、在講義72頁第59張片子中提到粉針劑、凍干粉針、小容量注射劑工藝驗(yàn)證的異同點(diǎn)中培養(yǎng)基灌裝程序的差異主要是指什么，具體怎樣做，起始點(diǎn)是哪里，從哪里開始到哪里結(jié)束？    答：對于無菌粉針劑，培養(yǎng)基灌裝的形式有一些特殊性，如要準(zhǔn)備模擬的無菌粉末，分裝后用注射器將液體培養(yǎng)基加入瓶中；或?qū)o菌培養(yǎng)基粉末分裝，結(jié)束后用注射器加入無菌注射用水。但目的仍是考察整個(gè)無菌分裝過程的無菌保證程度。  &

14、#160; 35、如何進(jìn)行容器密封性驗(yàn)證？     答：容器密封性驗(yàn)證常采用物理和微生物學(xué)檢測手段。物理檢測有許多優(yōu)點(diǎn)，如靈敏度較高、使用方便、檢測迅速及低成本等。在產(chǎn)品有效期內(nèi)，均可使用物理檢測方法來確定包裝完整性是否符合規(guī)定要求。進(jìn)行包裝完整性檢測的一個(gè)重要原因是確保無菌產(chǎn)品始終保持無菌狀態(tài)。因此，在產(chǎn)品包裝的研發(fā)階段，應(yīng)考慮采用微生物侵入試驗(yàn)，或采用經(jīng)驗(yàn)證過的并且比微生物檢測更為有效的物理試驗(yàn)方法，來檢測產(chǎn)品包裝的完整性。但是，對效期內(nèi)產(chǎn)品的穩(wěn)定性試驗(yàn)來說，因進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)較為困難，故建議采用物理檢測方法。微生物侵入試驗(yàn)是對最終滅菌容器密封系統(tǒng)完好性的挑

15、戰(zhàn)性試驗(yàn)。在驗(yàn)證試驗(yàn)中，取輸液瓶或西林瓶(小瓶)，灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上壓塞、壓蓋滅菌。然后，將容器密封面浸入高濃度運(yùn)動(dòng)性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入，確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。同時(shí)，需作陽性對照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長能力。    36、在采用微生物浸泡法進(jìn)行容器密封性驗(yàn)證時(shí)，為什么要事先去除鋁蓋，請問除去鋁蓋后，是不是只剩膠塞，那么在試驗(yàn)過程中會(huì)不會(huì)發(fā)生藥液泄露而影響驗(yàn)證結(jié)果？    答：去除鋁蓋是為了造成一個(gè)更為嚴(yán)格的條件，講課中以凍干粉針劑為例，通常容器內(nèi)有較高的真空，不會(huì)造成漏液，試驗(yàn)者可根據(jù)自己產(chǎn)品的特點(diǎn)判斷去除鋁蓋是否適用。    37、密封性驗(yàn)證中，如鋁桶的驗(yàn)證，用培養(yǎng)基驗(yàn)證無法觀察結(jié)果，是否有其他方法？    答：對于無菌原料的容器，建議嘗試物理的方法，如鹽水滲入法。    38、密封性驗(yàn)證一般每次取樣量是多少，再驗(yàn)證的周期是多少？    答：可以從壓蓋線上從開始、中間、結(jié)束各取至少10瓶進(jìn)行試驗(yàn)，起始驗(yàn)證應(yīng)考察有效期內(nèi)不同時(shí)間的密閉性，再驗(yàn)證一般一年可進(jìn)行一次。    39、驗(yàn)證指南中對大輸液產(chǎn)品的密封性驗(yàn)證有相關(guān)的要求，但