婦科栓劑的質(zhì)量標準研究

1、婦科栓劑的質(zhì)量標準研究袁捷1,2，李婧1，黃松1,2*， 陳吉航1（1廣州中醫(yī)藥大學，廣東 廣州 510006；2東莞廣州中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院，廣東 東莞 523808）摘要： 目的 研究婦科栓劑的質(zhì)量標準,以更好控制產(chǎn)品質(zhì)量。方法 建立黃連、黃柏、苦參、蛇床子的薄層色譜法(TLC)和龍膽苦苷的高效液相色譜含量測定方法。 結(jié)果 TLC法可檢出黃連黃柏、苦參、蛇床子，斑點清晰，陰性對照無干擾專屬性強。龍膽苦苷在0.6886.880g范圍內(nèi)線性良好（r=0999 9），平均加樣回收率為l 0191，RSD為2.00(n=6)。結(jié)論 試驗方法定性、定量方法簡單、可靠、準確，可用于該制劑的質(zhì)

2、量控制。關(guān)鍵詞：婦科栓劑；薄層鑒別；龍膽苦苷；高效液相色譜法Study on the Quality Standard of Fuke suppositoryYUAN Jie， LI Jing， HUANG Song， CHEN Ji-hang， HUANG Meng-qiu( 1. Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou, 510006, China; 2. Dongguan Mathematical Engineering Academy of Chinese Medicineand Guangzhou University

3、of Traditional Chinese Medicine, Dongguan, 523808, China )Abstract: Object To study the qualitative standard of Fuke suppository, so as to better control the quality of this product. Method To establish the Thin Layer Chromatography(TLC) for Rhizoma Coptidis，Cortex Phellodendri Chinensis，Radix Sopho

4、rae Flavescentis，F(xiàn)ructus Cnidii, and determination method for gentiopicrin by the High Performance Liquid Chromatography(HPLC). Result The TLC method can well identify Rhizoma Coptidis，Cortex Phellodendri Chinensis，Radix Sophorae Flavescentis，F(xiàn)ructus Cnidii, with clear spots , non-interference of ne

5、gative controls and good specificity. A satisfactory linearity of the gentiopicrin is obtained, ranging from 0.6886.880g, with a good correlation coefficient(R=0.999 9). The average recovery is 101.91%, RSD as 2.00%(n=6). Conclusion This method is simple for qualitative and quantitative, reliable an

6、d precise, can be used for qualitative control of this preparation.Key words: Fuke suppository; TLC; gentiopicrin; HPLC婦科栓劑為廣州中醫(yī)藥大學新藥開發(fā)中心研制的復方中藥栓劑，該制劑由湖南某中醫(yī)院臨床驗方開發(fā)而成，該方在臨床上使用多年, 具有清熱解毒，消炎止痛，殺蟲止癢，消腫止痛之功效，對治療霉菌性，滴蟲性，細菌性陰道炎，宮頸炎，外陰瘙癢，濕疹等病癥效果十分顯著，并對淋病具有輔助治療作用。本試驗建立了龍膽的主要成分龍膽苦苷的含量測定方法以及黃連、黃柏、苦參、蛇床子的薄層鑒別方法

7、。1 儀器與試藥1.1 儀器SHIMADZU 高效液相色譜儀(日本島津公司)，LC20AT泵，SIL-20A自動進樣器，SPD-20A 紫外可見光檢測器，Aquapro艾科浦u系列純水機， CP225D十萬分之一電子天平（德國sartorius公司），硅膠G，硅膠GF254（青島海洋化工廠生產(chǎn)）。1.2 試藥黃柏（121510-200501），黃連（120913-200407），苦參（121019-200304），蛇床子（121030-200405），鹽酸小檗堿 (批號110713200208)，苦參堿 (批號110805200306)，龍膽苦苷（110770-200611），蛇床子素（110

8、822-200305）均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙腈（色譜純，德國默克公司），其余試劑均為分析純，婦科栓劑為廣州中醫(yī)藥大學新藥開發(fā)研究中心的中試樣品。2 方法與結(jié)果2.1 薄層鑒別2.1.1 黃連黃柏的薄層鑒別 取三個批號的本品各4.5g，加稀鹽酸溶液100mL，加熱使溶解，超聲30min，靜置過濾，取濾液20mL，水浴蒸干，加甲醇2 mL使溶解。濾液作為供試品溶液。另取黃連黃柏對照品藥材各0.1g，同法制成對照藥材溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。再取去黃連黃柏的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述六種

9、溶液各1L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇（6：3：2：1.5）為展開劑加入雙槽展開缸中，另一槽內(nèi)加入等體積的濃氨試液，預飽和15分鐘，展開,取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。2.1.2 苦參的薄層鑒別取三個批號的栓劑樣品3g，加蒸餾水3.0mL水浴溶解，加濃氨溶液0.3mL混勻，用等量遞增法加10g硅藻土充分分散，并于水浴上揮干，移至具塞錐形瓶，用70mL氯仿洗蒸發(fā)皿，超聲30min，靜置，濾過，蒸干，加5mL無水乙醇溶解作為供試品溶液。另取苦參對照藥材粉末0.5g，加濃氨試液0

10、.3mL、三氯甲烷25mL，超聲處理20分鐘，靜置，濾過，蒸干，殘渣加乙醇0.5mL 使溶解，作為對照藥材溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。再取去苦參的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述四種溶液各8L ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2：3：4：0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與對照品色譜相應的位置上，也顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。2.1.3 蛇床子的薄層色譜鑒別取三個批

11、號的栓劑樣品3.0g，加乙醇5.0mL，使溶解，超聲處理5分鐘，冰箱里（10以下）放置30分鐘，取上清液并濃縮至2mL作為供試品溶液。另取蛇床子對照藥材粉末0.3g，同法制成對照藥材溶液。另取蛇床子素對照品，加乙醇制成每1mL 含1mg 的溶液，作為對照品溶液。再取去蛇床子的模擬處方，照供試品溶液制備方法制成陰性樣品。吸取上述六種溶液各2L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯正己烷(3：3：2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。1 2 3 4

12、5 62.2 龍膽苷的含量測定2.2.1 色譜條件采用Kromasil 100-5C18色譜柱(250 mm4.6 mm，5 m)；以甲醇：水（3:7）為流動相；檢測波長為270nm；流速1.0 mLmin-1；柱溫：室溫（25C）。2.2.2 龍膽苦苷對照品溶液的制備精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1mL 含龍膽苦苷6.88mg的對照品溶液。2.2.3 供試品溶液的制備取本品10粒,精密稱定，平均2.49125g/粒，切碎，研勻取約2 g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加入甲醇20.0 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率100 kHz)30 min,放置至室溫

13、，再稱定重量，用甲醇補足失去重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液,即得。2.2.4 專屬性試驗按處方比例和工藝，同法制成全方缺龍膽的陰性樣品，按樣品供試品溶液的制備方法制備。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 L，按“2.2.1”項下色譜條件，注入效液相色譜儀，記錄色譜圖。陰性樣品在龍膽苦苷出峰處無色譜峰，說明處方中的其他成分對測定結(jié)果無影響。龍膽苦苷對照品、供試品、和陰性對照品的HPLC圖譜分別見圖4。 A B C圖4 HPLC圖譜A栓劑樣品圖 B龍膽苦苷對照品圖 C缺龍膽陰性供試品2.2.5 線性關(guān)系考察精密量取2.2.2項下對照品溶液1，3，5，7，10mL，置10mL容量瓶中

14、，加甲醇定容至刻度，制成不同濃度對照品溶液，精密吸取10L，分別進樣，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，分別記錄峰面積積分值，測定，以峰面積為縱坐標，進樣量（g）為橫坐標繪制標準曲線。得回歸方程為Y=1041999.071711X+22688.51639，線性范圍為0.6886.880g，r=0.999 9；表明龍膽苦苷在0.6886.880g內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2.6 精密度試驗 精密吸取龍膽苦苷對照品溶液10 L，連續(xù)進樣6次，以峰面積計算龍膽苦苷的RSD為1.10%；將龍膽苦苷對照品溶液在7日內(nèi)連續(xù)測定6次，以峰面積計算龍膽苦苷的RSD為2.05%。結(jié)果表明日內(nèi)精密度和日間精密度均良

15、好。2.2.7 重復性試驗 取同一批樣品(批號中試1)，按“3.2.2”項下方法制成供試品溶液共5份，分別測得龍膽苦苷含量平均值分別為0.89mgg-1，RSD為1.57%。結(jié)果表明重復性良好。2.2.8穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液(批號中試1)，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h進樣測定。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，龍膽苦苷峰面積的RSD(n=8)分別為1.43%。2.2.9加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號中試1)，切碎，研勻，取約1.0 g，共6份，精密稱定，每份樣品分別加入精密稱取的龍膽苦苷對照品。按“2.2.3”項下方法制備溶液，分別進樣測定，計算平均回

16、收率為101.91%，RSD=2.00%。結(jié)果見表1。表 1 加樣回收率測定結(jié)果取樣量（g）樣品中龍膽苦苷含量（mg）加入龍膽苦苷量（mg）測得龍膽苦苷總量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）1.0230.911.021.98104.86101.912.001.0530.941.102.07102.980.9940.881.041.95102.441.0150.900.981.8798.641.0300.920.961.89101.391.0430.931.072.01100.942.2.10 樣品的測定對3批婦科栓劑中試樣品進行含量測定，每批樣品取5份，用外標法計算，結(jié)果三批樣品

17、中龍膽苦苷平均含量分別為0.89 mgg-1、0.92 mgg-1、0.95 mgg-1，RSD分別為1.57%、1.35%、1.49%。3 討論3.1 黃連和黃柏中都含有鹽酸小檗堿，單獨鑒別時產(chǎn)生相互干擾，因此采用2味藥材同時鑒別，結(jié)果薄層色譜中斑點分離良好，陰性樣品無干擾。在鹽酸小檗堿的鑒別中，提取樣品時選用稀鹽酸而不用常規(guī)的甲醇進行提取，是因該婦科栓劑的基質(zhì)不溶于水而極易溶于甲醇等極性大的有機溶劑里。薄層層析時，經(jīng)過多次試驗，總結(jié)了濕度對鹽酸小檗堿的分離影響大，本實驗得出最佳的分離濕度是42%。3.2 在苦參的鑒別中，先參考藥典1（2005版）里的展開劑進行展開，同時參考唐曉2、張濤3等人文獻資料，兩者進行比較，結(jié)果表明用一個展開劑甲苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2：3：4：0.4）進行一次性展開就可得到良好