全自動(dòng)的HPV核酸檢測(cè)新技術(shù)新項(xiàng)目申報(bào)表

1、附件 1:大理州醫(yī)療衛(wèi)生新技術(shù)新項(xiàng)目申報(bào)表大理州衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)制、項(xiàng)目基本情況申報(bào)單位項(xiàng)目名稱完成科室.完成人姓名..9.領(lǐng)先地位國內(nèi)口省內(nèi)口州內(nèi)口項(xiàng)目分類基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)口藥學(xué)口臨床醫(yī)學(xué)口預(yù)防醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生學(xué)口中醫(yī)學(xué)與中藥學(xué)口項(xiàng)目起止時(shí)間年月-年月項(xiàng)目開展科室意見：項(xiàng)目開展協(xié)同科室意見：蓋章蓋章年月日年月日單位審核意見：縣市衛(wèi)計(jì)局審核意見：蓋章蓋章年月日年月日、項(xiàng)目詳細(xì)內(nèi)容項(xiàng)目完成人基本情況姓名技術(shù)職稱工作單位參加項(xiàng)目時(shí)間承擔(dān)責(zé)任與分工聯(lián)系人：聯(lián)系電話：項(xiàng)目綜述(主要技術(shù)內(nèi)容、特點(diǎn)、開展情況、效益和價(jià)值、起止時(shí)間，應(yīng)用數(shù)量、應(yīng)用情況、參考文獻(xiàn)等內(nèi)容?？闪砀?/p>

2、頁。)1.主要技木內(nèi)容：本項(xiàng)目用于體外定性檢測(cè)女性宮頸脫落上皮細(xì)胞樣本中 24種基因型(6,11,16,18,31,33,35,39,42,43,44,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,81,82,83)人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus,HPV)的核酸。 并可鑒別病毒基因亞型。采用 PCR 體外擴(kuò)增和 DNA 反向斑點(diǎn)雜交法相結(jié)合的 DNA 芯片技術(shù)，檢測(cè) 24 種人乳頭瘤病毒核酸亞型。本項(xiàng)目中采用北京博暉生產(chǎn)的 HPV 核酸檢測(cè)試劑盒和核酸芯片檢測(cè)儀（型號(hào) BHF-VI）配套使用。將待測(cè)樣本加入到 HPV檢測(cè)芯片加樣孔后，在微泵的驅(qū)動(dòng)下，分別進(jìn)行

3、目的 DNA 的提取、針對(duì)目的 DNA 進(jìn)行的 PCR 擴(kuò)增和反向斑點(diǎn)雜交。根據(jù) HPV 特定基因設(shè)計(jì)的特異性引物， 可以擴(kuò)增由 24 種 HPV 基因型的目的片段， 儀器將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到芯片的檢測(cè)區(qū)，在檢測(cè)區(qū)雜交膜上包被有 HPV24 種亞型的檢測(cè)探針，如果擴(kuò)增產(chǎn)物中含有目的基因則能夠被芯片上的探針捕獲，再加入酶液和顯色液后在雜交膜的特定位置由現(xiàn)藍(lán)色的斑點(diǎn)，可判斷由感染人乳頭瘤病毒核酸及感染的亞型，如果不含目的基因，則在特定的位置不會(huì)由現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)。項(xiàng)目檢測(cè)原理：PCR 體外擴(kuò)增和 DNA 反相斑點(diǎn)雜交法相結(jié)合的 DNA 芯片技術(shù)；檢測(cè)情況：全部手工操作僅需 2 分鐘，全自動(dòng)分子檢測(cè)平臺(tái)，一鍵

4、式操作，完成“從樣本到結(jié)果”的全程檢測(cè)；DNA矩陣與微流控芯片產(chǎn)品一體化，真正實(shí)現(xiàn)了核酸提取、純化、擴(kuò)增和基因分型檢測(cè)的全程自動(dòng)化；每個(gè)測(cè)試平均耗用時(shí)間：12 分鐘/人份；通量：4-24通道；樣本量：宮頸脫落細(xì)胞，200ul;可以實(shí)現(xiàn)：一個(gè)樣本，多重檢測(cè)，24 亞型：18 種高危型，6 種低危型對(duì)高危16、18 亞型進(jìn)行加強(qiáng)，防止漏檢。18 種高危 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、型 56、58、59、66、68、73、82、836 種低危 6、11、42、43、44、81型2 特點(diǎn)該項(xiàng)目應(yīng)用反向斑點(diǎn)雜交 PCR 方法， 快速靈敏檢測(cè) HPV24 種亞型分型檢測(cè)。一

5、臺(tái)芯片控制儀+一次性試劑盒+一次性芯片，實(shí)現(xiàn)了全部分子診斷實(shí)驗(yàn)室的功能，節(jié)省了實(shí)驗(yàn)室空間，降低了分子診斷的應(yīng)用門檻。多重檢測(cè)，精確分型，便于對(duì)患者進(jìn)行分層管理。采用世界上獨(dú)特的微流控技術(shù)進(jìn)行基因分型檢測(cè)。操作者無需專業(yè)知識(shí)，只要將芯片、樣本和試劑盒置于控制儀內(nèi)，檢測(cè)過程全自動(dòng)一鍵操作。無需專業(yè)培訓(xùn)即可上手。a.檢測(cè)時(shí)全封閉，在整個(gè)檢測(cè)過程中，樣本、核酸、檢測(cè)用試劑和廢液均封閉保留在芯片內(nèi)；極大減少了生物廢物污染；從開始檢測(cè)到結(jié)束，控制器一直關(guān)閉，最大限度避免了內(nèi)/外界污染；b.三維運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)：X、Y、Z 軸在運(yùn)動(dòng)范圍內(nèi)誤差不超過土 0.25mm；c.信息采集：全自動(dòng)攝像進(jìn)行結(jié)果采集；d.檢測(cè)限：

6、能穩(wěn)定檢由的 HPV 的病原體最小拷貝數(shù)為 1000copies/ml;e.質(zhì)控：球蛋白（GB 點(diǎn)）質(zhì)控樣本的采集及核酸提取過程，SP點(diǎn)質(zhì)控反向雜交過程，在全自動(dòng)檢測(cè)的條件下保證了結(jié)果的可追溯性。f.數(shù)據(jù)管理：樣品管上的條形碼可被芯片控制儀自動(dòng)識(shí)別，連接醫(yī)院 LIS 系統(tǒng)，輕松實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的自動(dòng)化存儲(chǔ)與調(diào)用。g.降低人員要求，只需在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行槍頭檢查，試劑、芯片、樣本倉的安放即可。3 .開展情況4 .效益和價(jià)值a.HPV 檢測(cè)作為初篩手段可濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，比通常采用的細(xì)胞學(xué)檢測(cè)更有效。對(duì)細(xì)胞學(xué)和 HPV 檢測(cè)均為陰性者，可將篩查間隔延長到 3-5 年。細(xì)胞學(xué)陰性而高危型 HPV 陽性者，應(yīng)定期

7、隨訪。如間隔一到兩年，前后兩次 HPV 檢測(cè)為同一高危HPV 型別，則可以界定為是高危 HPV 持續(xù)感染，該人群需進(jìn)行密切隨訪和診治。b,對(duì)于未明確診斷意義的不典型鱗狀細(xì)胞（ASC-US）和鱗狀上皮內(nèi)低度病變（LSIL）的分層管理，HPV 檢測(cè)是一種有效的再分類方法。NCCN子宮頸癌篩查臨床實(shí)踐指南（源自英文版 V1.2009 脂由：對(duì)發(fā)生在成年人的 ASC-US 和 LSIL 有 3 個(gè)可供選擇的處理方案，可選擇 HPV-DNA 檢測(cè)將患者分流、6 個(gè)月復(fù)查細(xì)胞學(xué)或立即陰道鏡檢查。可以減少陰道鏡過度診治。而重復(fù)的細(xì)胞學(xué)檢查，依然會(huì)有 25%失訪率。采用 HPV 檢測(cè)將患者分流是很好的風(fēng)險(xiǎn)管控

8、路徑。c.HPV 分型檢測(cè)可以用于陰道鏡適應(yīng)癥。2009 年，美國陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(huì) （簡稱 ASCCP） 發(fā)布了 HPV 基因分型檢測(cè)指南， 明確指由：30 婦女，細(xì)胞學(xué)未見上皮內(nèi)病變和惡性細(xì)胞，HPV16,18 陽性建議陰道鏡； 其他 HPV 高危型陽性， 則在 12 個(gè)月后重復(fù) HPVDNA 檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查。d.用于手術(shù)后的追蹤，治療后的隨訪，提供給病人和醫(yī)生豐富的臨床信息。消融或切除治療后6個(gè)月HPV檢測(cè)鑒別復(fù)發(fā)和持續(xù)性CIN的敏感性達(dá)90%,而且保持這種水平到 24 個(gè)月。與此相比，細(xì)胞學(xué)的敏感性大約為 70%o在治療或手術(shù)前先進(jìn)行一次 HPV 分型檢測(cè)，術(shù)后或治療后的 6 個(gè)月

9、再行 HPV 分型檢測(cè)。e.通過對(duì) HPV 基因分型檢測(cè)，可以將不同 HPV 型別感染與宮頸病變的關(guān)系研究的更深入，同時(shí)還可應(yīng)用到 HPV 分子流行病學(xué)的研究中。HPV 感染基因型和宮頸病變的級(jí)別存在一定關(guān)系，表明各個(gè)型別對(duì)宮頸上皮致病力不同。研究表明，HPV的多重感染與宮頸癌之間，不存在顯著性的關(guān)系。對(duì)于在 CIN2 以上高級(jí)別病變中，多重感染并不常見，而以單一感染為主。HPV 感染除了可以導(dǎo)致宮頸癌之外，還可導(dǎo)致其他癌癥。f.指導(dǎo) HPV 疫苗的研究及使用。g.可用于對(duì)宮頸癌治療方法選擇的研究。5.起止時(shí)間6.應(yīng)用數(shù)量7.應(yīng)用情況8.殄英文獻(xiàn)：1. Berkhof,J.,deBruijne

10、,M.C.,Zielinski,G.D.,Meijer,C.J.,2005.Naturalhistoryandscreeningmodelforhigh-riskhumanpapillomavirusinfection,neoplasiaandcervicalcancerinTheNetherlands.Int.J.Cancer115,268275.2. vandenBrule,A.J.,Pol,R.,Fransen-Daalmeijer,N.,Schouls,L.M.,Meijer,C.J.,Snijders,P.J.,2002.GP5+/6+PCRfollowedbyreverseline

11、blotanalysisenablesrapidandhigh-throughputidentificationofhumanpapillomavirusgenotypes.J.Clin.Microbiol.40,779-787.3. 趙銀鈴，耿曉星.高危 HPV 檢測(cè)在宮頸癌篩查防治及判斷預(yù)后中的意義J.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志.2008,22(5),497.同類技術(shù)之比較微流控芯片法雜父捕狀法導(dǎo)流雜交檢測(cè)特點(diǎn)1.占地面積?。簩⑷齾^(qū)或四區(qū)的PCR實(shí)驗(yàn)室整合于一個(gè)芯片上，整個(gè)操作臺(tái)只需要/、到2平米的面積。1.手工操作繁瑣，會(huì)造成交叉污染。2.只檢測(cè)13種高危，不具體分型，且不包含中國人常見的型1.全手

12、工操作，工序繁瑣，容易造成交叉污染2.不能監(jiān)控采樣效果3.人力物力消耗大。2.操作簡單：DNA提取、擴(kuò)增和雜交均在同一封閉芯片上進(jìn)行。3.所有的廢液均排放與芯片中的廢液池中，一方面可避免氣溶膠污染，另一方面可減少醫(yī)用垃圾的二次污染。4.全自動(dòng)封閉系統(tǒng)，人為零干預(yù)，樣本進(jìn)，結(jié)果出05.磁珠提取法，純度局 , 不 容 易 發(fā) 生PCR卬制反應(yīng)導(dǎo)致假陰性。6.人力物力消耗少。7.防 污 染 ： 加 入U(xiǎn)NGB,可防止假陽性。實(shí)驗(yàn)人員要求無特殊要求，大即可上崗別。3.成本大。4.人力物力消耗大。5.廢液造成醫(yī)療廢物污染。6.對(duì)抗體捕獲信號(hào)的放大，假陰性率局；交叉污染，易誤判。4.廢液造成醫(yī)療廢物污染。

13、5.占地回積大： 需要嚴(yán)格的三區(qū)或四區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室06.煮沸法提取DNA,純度不高，會(huì)導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。7.無防污染體系。1.培訓(xùn)時(shí)間長，一周左右才可1.需要PCR上崗證。實(shí)驗(yàn)流程時(shí)間1.磁珠提取時(shí)間：1h2.擴(kuò)增：1.5h3.雜交時(shí)間：1h儀器不間斷操作，全程時(shí)間/、到4h既可完成。后期維護(hù)1,用84擦拭儀器。2.紫外線定期照射消毒上崗操作。2.實(shí)驗(yàn)人員實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)要求Mi。2.學(xué)習(xí)時(shí)間長，需要一周左右時(shí)間才可上崗。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀需要豐曷操作經(jīng)驗(yàn)，否則會(huì)出現(xiàn)人為判讀錯(cuò)誤現(xiàn)象。4.對(duì)操作人員要求較高，否則會(huì)產(chǎn)生交叉污染。1.裂解時(shí)間：45min2.雜交：1h3.捕狀：1h4.信號(hào)放大：30min5.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)：15min由于是手工操作，全程時(shí)間為5h左右。1.煮沸法DNA提?。?.5h2.擴(kuò)增：2h3.雜交：1h由于人工操作誤差，則全程時(shí)間約為56h1.84消毒液擦拭所有儀器和移液槍進(jìn)行消毒。2,酒精擦拭操作臺(tái)面。3.每天紫外線1.84消毒液擦拭所有儀器和移液槍進(jìn)行消毒。2,酒精擦拭操作臺(tái)面。3.每天紫外線照射進(jìn)行消毒。4.定期通風(fēng)，防止氣溶膠污染。照射進(jìn)行消毒。4.定期通風(fēng)，防止氣溶膠污染。科學(xué)依據(jù)和解決的關(guān)鍵技術(shù)問題細(xì)胞學(xué)和 HPV 聯(lián)合篩查做為推薦篩查方案，但存在 TCT 檢測(cè)專業(yè)人員缺乏，同時(shí)缺乏專業(yè) PCR 實(shí)驗(yàn)室的困難，在基層醫(yī)院尤其突生。博暉微流