臨床微生物室常用培養(yǎng)基的制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件

1、臨床微生物室常用培養(yǎng)基的制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件1、營(yíng)養(yǎng)瓊脂（普通瓊脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏湯）100毫升瓊脂（視天氣，瓊脂質(zhì)量而定）制法：將上物加熱溶解，補(bǔ)足水，調(diào)ph至7.6,過(guò)濾分裝121C,高壓滅菌15分鐘。用途：作普通瓊脂平皿。2、血瓊脂平板（BA）制法：取營(yíng)養(yǎng)瓊脂（PH7.6）,加熱使其溶解待冷至45-50C,以滅菌操作于每100毫升營(yíng)養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升，輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩Ｓ猛荆?.一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。2.尿液，膿液3.分離細(xì)菌標(biāo)本用。3、基礎(chǔ)培養(yǎng)基（肉膏湯BB）成份：蛋白月東10克牛肉膏5克氯化鈉5克水1

2、000毫升制法：將以上各物稱(chēng)好，加水煮沸溶解，用1NNOH$正PH至7.6,過(guò)濾分瓶，121c高壓滅菌，20分鐘備用。用途：1作耐藥試驗(yàn)，增菌用分裝小管。4作普通瓊脂斜面。4、血液培養(yǎng)基（大管肉湯培養(yǎng)基）成份：1新鮮牛肉浸液1000毫升2 PABA（對(duì)氨基苯甲酸相當(dāng)于10mg/毫升）1g%1毫升3 MgSO4相當(dāng)于0.493/100毫升49.3%1毫升4枸椽酸鈉3g制法：1將1號(hào)，4號(hào)混合液，2號(hào)，3號(hào)液分裝高壓滅菌。2取滅菌1,4號(hào)混合液用無(wú)菌法加入PABAMgSO4再分管，行無(wú)菌試驗(yàn)三天方可使用。用途：作血，骨髓培養(yǎng)用。5、腸道桿菌培養(yǎng)基（伊紅美蘭瓊脂）成份：蛋白月東10克乳糖10克0.5

3、%美蘭溶液20毫升1000毫升使溶解，校正PH7.4過(guò)濾，補(bǔ)足失水,加入2%尹紅溶液20毫升，0.5峨蘭溶液20毫升,右傾注平板，凝固后存冰箱備用。（高壓以后方可再加乳糖）用途：用作分離沙門(mén)氏，志賀氏菌屬,6、羅文斯坦培養(yǎng)基成份：磷酸二氫鉀2.4克枸椽酸鈉0.6克純甘油（丙三醇）12毫升馬鈴薯粉30克2%孔雀綠水溶液20毫升制法：1除雞蛋外（還有孔雀綠）?？蓪⑵渌锲贩Q(chēng)好，放入大三角瓶包扎好，高壓滅菌。2雞蛋用75%酉精泡30分鐘， 滅菌法打蛋， 倒入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)充分將雞蛋搖散。3將各成份按比例配好，分裝每管約5毫升。4間歇滅菌第一次90C1小時(shí)，第二次80c半小時(shí)，第三次80c

4、半小時(shí)（或放85C烤箱內(nèi)連續(xù)二次）。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1滅菌試驗(yàn)合格。氯化鈉5克瓊脂25（22）克水1000毫升2%伊紅溶液20毫升制法：將蛋白月東，氯化鈉瓊脂稱(chēng)好，加水（115C高壓20分鐘），冷卻至50c左也作菌群調(diào)查。硫酸鎂0.24克天門(mén)冬素3.6克水600毫升雞蛋1000毫升（約3公斤）2接種結(jié)核桿菌要求兩星期生長(zhǎng)良好。用途：作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)用。7、結(jié)核半固體培養(yǎng)基成份：磷酸氫二鈉19克動(dòng)物血清100毫升瓊脂1.5克（80小時(shí)用甲醇去脂）加動(dòng)物血清100毫升制法：1除血清外將上述藥品均稱(chēng)好，放入煮沸溶解，調(diào)PH7。22分管（每管約10毫升）包扎好，高壓，121c半小時(shí)滅菌。3待冷后無(wú)菌法加無(wú)

5、菌血清（綿羊血或兔血）每管約1毫升備用。4去除瓊脂方法：取瓊脂若干或于三角燒瓶中加甲醇于瓊脂1毫升用塞密封，放37C溫浴80小時(shí)，每天搖動(dòng)一次，冷卻后到時(shí)取出用濾紙過(guò)濾，待瓊脂自然冷卻后備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1無(wú)菌實(shí)驗(yàn)合格。2瓊脂硬度合適而清亮。3接種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌用，強(qiáng)度合適即可用。用途：培養(yǎng)結(jié)核桿菌用。8、亞硫酸鉀血瓊脂平板成份：瓊脂基礎(chǔ)100毫升10%葡萄糖2毫升1%亞硫酸鉀4.5毫升綿羊血10毫升制法：1將瓊脂基礎(chǔ)溶解好，加入羊血。2馬上加熱使成咖啡色后，稍冷再加入10%t萄糖2毫升與1%亞硫酸4.5毫升混合后倒入無(wú)菌平板，凝固后存冰箱備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：接種白喉?xiàng)U菌生長(zhǎng)良好，其它革蘭氏陰性菌均抑

6、制生長(zhǎng)。用途：供培養(yǎng)及鑒別白喉?xiàng)U菌用。9、米培養(yǎng)基磷酸二氫鉀2.5克天門(mén)冬素5克1%孔雀綠1.5克甘油20毫升吐溫80（10%5毫升水1000毫升1%孔雀綠0.78毫升吐溫80（10%5毫升成份：白米20克水1000毫升瓊脂20克吐溫8010毫升制法：1將20克米加水200毫升煮沸45分鐘，煮時(shí)將容器蓋好。2用紗布過(guò)濾，只要米湯，不要飯，加水至1000毫升。3加瓊脂20克，吐溫-8010毫升煮溶，分裝中型管（每管約3毫升）121c半小時(shí)，消毒備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1滅菌。2要求清亮。3接種白色念珠菌17-24小時(shí)生長(zhǎng)良好，并產(chǎn)生厚膜抱子。用途：培養(yǎng)白色念珠菌用。10、蛋白月東水培養(yǎng)基成份：蛋白月東1

7、克氯化鈉0.5克水加至100毫升PH調(diào)至7.8制法：把以上各物稱(chēng)好溶于水，調(diào)節(jié)PH7.6分裝消毒備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1放置37c無(wú)菌生長(zhǎng)。2接種大腸桿菌24小時(shí)生長(zhǎng)良好。3可作中國(guó)蘭平板基礎(chǔ)液?？勺鞯寤|(zhì)基礎(chǔ)液（作此試驗(yàn)需要色氨酸蛋白月東）。0.5%PABA104升酵母浸液10毫升0.2克（2%濾）*酚紅0.4%6毫升水1000毫升*:作大BB,小BB時(shí)，不要加酚紅和瓊脂。制法：1、除PABA硫酸鎂、酚紅外均稱(chēng)好煮化調(diào)PH7.4,包扎好，高壓,11、血培養(yǎng)基成份：蛋白月東10克氯化鈉5克枸椽酸鈉3克牛肉膏5克葡萄糖3克MgSO4。7H2O20毫升2、調(diào)好PH后再加酚紅。3、硫酸鎂、PABM外無(wú)菌再

8、加入（亞細(xì)，小BB）12、沙氏培養(yǎng)基成份：蛋白月東1克水100毫升瓊脂1.5克（瓊脂粉1克為葡萄糖或麥芽糖4克制法：1將上述物質(zhì)稱(chēng)好，放入水中煮沸溶解（不必調(diào)PH即有5左右）分中號(hào)試管（約4毫升）包扎，高壓115c20分鐘。2趁熱斜好，凝固備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：1無(wú)菌試驗(yàn)合格。2接種霉菌比在其它培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，其它菌生長(zhǎng)不好。用途：作分離培養(yǎng)霉菌用。注意：1接種臨床新鮮標(biāo)本可先加1-2滴70%酉精讓干后再接種于含12.5嗑（霉素沙氏斜面關(guān)H二I.o2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麥芽糖。13、肉渣培養(yǎng)基成份：牛肉渣牛肉浸液（牛肉膏）制法：將做牛肉浸液的牛肉渣，裝入試管，高約3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏

9、湯（PH7.6）約5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高約0.5厘米（不加也可），121C高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內(nèi)備用。用途：用于厭氧菌培養(yǎng)。注意：如無(wú)肉渣也可用牛、羊血等代替，將血塊先放入水內(nèi)煮沸，取出成小塊，血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。14、單糖發(fā)酵管培養(yǎng)基（半固體）成份：PH7.6-7.8蛋白月東水1000毫升（0.3克/100毫升）1.2%酚紅液0.4毫升瓊月旨0.4-0.5克10%糖或醇10毫升制備：把蛋白月東水，瓊脂加熱溶解，然后加1.2嫩紅液0.4毫升，10%t10毫升，混勻，分裝試管，每管約2-3毫升，經(jīng)115c高壓滅菌20分鐘后，分置于試管架上，貼上各

10、類(lèi)糖或醇類(lèi)標(biāo)簽備用。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌發(fā)酵糖類(lèi)或醇而產(chǎn)生酸，能使培養(yǎng)基PH改變，指示劑由紅變黃色，如因發(fā)酵產(chǎn)生氣體則半固體內(nèi)產(chǎn)生氣泡，如有動(dòng)力則半固體由清亮變混濁。15、明膠培養(yǎng)基成份：肉浸液1000毫升（牛肉浸膏5克）明膠12克制法：100毫升肉浸液中，加入明膠12克，隔水加熱煮化，校正PH7.2,分裝小號(hào)試管，用阿諾氏間歇滅菌80c30分鐘，連續(xù)3日，或者108c高壓20分鐘，冷卻，貯存?zhèn)溆谩?5-1、堿性蛋白月東水成份：蛋白月東20克氯化鈉5克硝酸鉀0.1克結(jié)晶碳酸鈉（NaclCO3.12H2Q0.2克水1000毫升制法：將蛋白月東，Nacl,硝酸鉀，結(jié)晶碳酸鈉稱(chēng)好，溶于1000DWK校正P

11、H8.4分裝試管,121C高壓滅菌15分鐘后備用。用途：用于霍亂弧菌培養(yǎng)。16、葡萄糖蛋白月東水（MV用）成份：蛋白月東5克葡萄糖5克K2HPO45克水1000毫升制法：將上述稱(chēng)好溶解分裝試管，調(diào)PH7.4高壓滅菌115c滅菌20分鐘，或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管標(biāo)準(zhǔn)：滅菌試驗(yàn)合格。接種大腸桿菌VP陰性，M陽(yáng)性；接種產(chǎn)氣桿菌VP陽(yáng)性，M陰性。用途：作鑒別腸道桿菌用。17、枸椽酸鹽培養(yǎng)基成份：磷酸二氫鏤0.1克硫酸鎂0.02克磷酸氫二鉀0.1克枸椽酸鈉0.23-0.5克（0.36）氯化鈉0.5克瓊脂1.5克0.5峨麝香草酚蘭2毫升（調(diào)PH6.8再加）制法：將上述稱(chēng)好，放入水中煮沸溶解，調(diào)PH6.

12、8,然后分裝中號(hào)試管，高壓滅菌，趁熱倒呈斜面，凝固后備用。標(biāo)準(zhǔn)：1、滅菌試驗(yàn)合格，培養(yǎng)基呈果綠色適宜。2、接種大腸桿菌，培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，也不變色。3、接種產(chǎn)氣桿菌，培31?呈深蘭色。用途：作鑒別大腸桿菌用。18、雙糖鐵培養(yǎng)基成份：下層：蛋白月東1克氯化鈉0.5克葡萄糖0.2克瓊脂0.3-0.5克水100毫升將上述物質(zhì)混勻調(diào)PH7.6后加1.2%B紅0.4毫升上層：蛋白月東1克氯化鈉0.5克乳糖1克硫代硫酸鈉0.03克硫酸亞鐵0.02克瓊脂1克水100毫升制法：1將下層配好，分裝中號(hào)試管（1毫升），塞好包扎，15磅高壓滅菌半小時(shí)，使凝固后備用。2制上層時(shí)，先將蛋白月東水制好，加入硫酸亞鐵，硫代硫

13、酸鈉，加熱溶解PH8.1,再加入酚紅分瓶，（每瓶300毫升，稱(chēng)取瓊脂包扎滅菌，趁熱加入乳糖隔水煮沸30分鐘或112c消毒15分鐘）。3取已制的下層管，每管用無(wú)菌法倒入上層液約1。5毫升，邊斜放置使成斜面，凝固后備用。標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)菌試驗(yàn)合格，接種大腸桿菌下層產(chǎn)酸產(chǎn)氣，上層產(chǎn)酸。19、尿素培養(yǎng)基成份：蛋白月東0.1克氯化鈉0.5克磷酸二氫鉀0.2克尿素0.2克（或10%2毫升）葡萄糖0.01克（或10%t萄糖0.1毫升）H2O100毫升酚紅（0.2%）0.4毫升制法：1除葡萄糖，尿素外把其它藥品稱(chēng)好放入水中煮沸，使溶解，調(diào)PH7.2過(guò)濾,15磅高壓滅菌15分鐘.2配制尿素（滅菌）液：每100毫升基液內(nèi)加2毫升.3配制10%W萄糖（滅菌）每100毫升加0.1毫升.4分裝小試管待用.標(biāo)準(zhǔn)：1滅菌試驗(yàn)合格.2接種變形桿菌24小時(shí)呈紅色.用途：鑒定變形桿菌用.20、膽鹽中性紅瓊脂制法:將膽鹽，對(duì)氨基苯甲酸，乳糖趁熱加入已滅菌之蛋白月東瓊脂中，待冷至50-60C時(shí)，加入1對(duì)性紅液2.5毫升，混合后即傾注平皿，凝固待用.*:1%沖性紅：1克中性紅加酒精60毫升，加水40毫升21、丙二酸鹽培養(yǎng)基（縮蘋(píng)果酸鈉）成份：丙二酸鈉0.3克酵母浸膏0.1克