保健食品中9種脂溶性維生素的測(cè)定BJS201717

1、41附件 5保健食品中9種脂溶性維生素的測(cè)定BJS 2017171 范圍本方法規(guī)定了營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑類保健食品中維生素A 、維生素 A 醋酸酯、維生素 D2、維生素D3、維生素 E、維生素 E 醋酸酯、維生素 Ki、維生素 K禺胡蘿卜素含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 測(cè)定方法。本方法適用于營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑類保健食品中維生素A、維生素 A 醋酸酯、維生素 D2、維生素D3、維生素 E、維生素 E 醋酸酯、維生素 Ki、維生素 K2、3胡蘿卜素含量的測(cè)定。2 原理試樣經(jīng)混合溶液（異丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80, v:v:v）提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有規(guī)定，

2、本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 甲醇：質(zhì)譜級(jí)。3.1.2 乙腈：質(zhì)譜級(jí)。3.1.3 異丙醇：色譜純。3.1.4 丙酮。3.1.5 二氯甲烷 。3.1.6 提取溶液（異丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80 , v:v:v）:取異丙醇 50mL、二氯甲烷 50mL ,用甲醇稀釋至 500 mL ,混勻。3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1 mL 用水稀釋至 1 000 mL ,用濾膜（3.4）過(guò)濾后備用。3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸 1 mL 用甲醇稀釋至 1000mL ,用濾膜（3.4）過(guò)濾后備用。3.2 標(biāo)準(zhǔn)品維生素

3、A、維生素 A 醋酸酯、維生素 D2、維生素 D3、維生素 E、維生素 E 醋酸酯、維生素 維生素 K2、3胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見(jiàn)附錄 A 表 A.1，純度 98%3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 卩 g/mL423.3.1.1 維生素 Ki標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取 0.01 g （精確至 0.000 1 g）的維生素 Ki標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）,加入 5mL 丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇轉(zhuǎn)移并定容于100 mL 棕色容量瓶中。3.3.1.23胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取3胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品（3.2） 0.01 g （精確至 0.000 1 g）

4、,用二氯甲烷（ 3.1.5）溶解，轉(zhuǎn)移并定容至100 mL 棕色容量瓶中。3.3.1.3 維生素 A、維生素 A 醋酸酯、維生素 D2、維生素 D3、維生素 E、維生素 E 醋酸酯、維生 素 K2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別稱取 0.01 g （精確至 0.000 1 g）的維生素 A、維生素 A 醋酸酯、維生素 D2、維生素 D3、維生素 E、維生素 E 醋酸酯、維生素 K2標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）,用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移并定容 至 100 mL 棕色容量瓶中。3.3.2空白基質(zhì)溶液的配制取空白試樣按照試樣制備方法 （5.2）操作。3.3.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液配制準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）適量，用空白基質(zhì)溶液稀

5、釋。此溶液中維生素A、維生素 A 醋酸酯、 維生素 D2含量為 0.01 卩 g/mL 0.02 卩 g/mL 0.05 卩 g/mL 0.1 卩 g/mL 0.5 卩 g/mL,維生素 D3含量為 0.02 卩 g/mL0.05 卩 g/mL 0.1 卩 g/mL 0.5 卩 g/mL 1 卩 g/mL 維生素 E、維生素 E 醋酸酯 含量為 0.1 卩 g/mL0.5 卩 g/mL1 卩 g/mL5卩 g/mL 10 g/mL,維生素 K1、維生素 K2含量為 0.005 卩 g/mL 0.01g/mL0.05 g/mL0.1 卩 g/mL0.25 卩 g/mL3胡蘿卜素含量為 0.05

6、卩 g/mL0.1 卩 g/mL0.5g/mL 1ig/mL 2.51g/mL 臨用時(shí)配制。注： 操作過(guò)程應(yīng)在避光環(huán)境下進(jìn)行。3.4 微孔濾膜：0.221,有機(jī)相。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有大氣壓化學(xué)離子源。4.2 超聲波清洗器。4.3 分析天平：感量分別為 0.01 g 和 0.000 1 g。5 分析步驟5.1 試樣制備將 20 粒片劑或膠囊試樣粉碎后混勻,液體試樣混合均勻。5.2 試樣提取準(zhǔn)確稱取混合均勻的試樣2g （精確至 0.01 g）于 50 mL 棕色容量瓶中，加入 40 mL 提取溶液（3.1.6）,超聲 20 min，冷卻至室溫，用提取溶液（3.1

7、.6）定容至刻度，搖勻，上清液經(jīng)微孔濾膜（ 3.4）過(guò)濾,供液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。注： 操作過(guò)程應(yīng)在避光環(huán)境下進(jìn)行。5.3 儀器參考條件5.3.1 色譜條件43a） 色譜柱： Ci8柱，1.7 財(cái) 100 mm 5020501020 93 0 $6 Jt ?KlTi mmAAcquksjiion Time (mm)* MlRM (269.0 93 0) s6 2 dxlO?81匚1100b41,5225Acquis tied iTf? (m n)3.796 min.圖 B.1 維生素 A 色譜圖-MRM (397.0 - 69 Q s6-2 .d3 5圖B.2 維生素 A 醋酸酯色譜圖*

8、 MRM (3S5 0 - 367 Q) *6-2 dGlunoo2 1 o_!XS1J3OO07-Acqus tion 1TBnn i0 A0 S-04-Acqi tiun FirriL vmin)圖B.3 維生素 D2色譜圖MRM (41,0 - 1G5 0 sG-2 d圖Ac qis tit?H l ime (mm)B.4 維生素 D3色譜圖47-1-i- 廠1i3234338 44244Acqix Tien Tirrift；m r圖 B.8 維生素 a 色譜圖A-quis tiori I Fre (rir圖 B.9B胡蘿卜素色譜圖本方法負(fù)責(zé)起草單位：中國(guó)食品藥品檢定研究院。驗(yàn)證單位：山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、武漢市食品化妝品檢驗(yàn)所、天津市藥品檢驗(yàn)所、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所、廈門(mén)市藥品檢驗(yàn)研究院。主要起草人：寧霄、金紹明、曹進(jìn)、王聰、孔璇、賈艾玲圖 B.5 維生素 E 色譜圖* MRM 451.0 * 1B7.0) *6-2 d*1022 25-2