【圖文】免疫組化、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用比較及常見問題分_第1頁(yè)
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Annexin V-FITC /PI 凋亡檢測(cè)結(jié)果分析 流式細(xì)胞術(shù)常見問題分析 熒光強(qiáng)度/背景過高 一抗/二抗?jié)舛忍?，建議降低一抗/二抗?jié)舛取?封閉不完全，建議增加蛋白封閉時(shí)間。 洗滌不充分，建議增加沖洗次數(shù)與時(shí)間。 信號(hào)弱或無信號(hào) 無目的蛋白或表達(dá)量極少，建議選用表達(dá)量高的細(xì)胞。 細(xì)胞通透性差，建議增加通透劑的作用時(shí)間或濃度。 一抗/二抗?jié)舛忍停ㄗh增大其濃度。 二抗選擇錯(cuò)誤（種屬不匹配），建議選用與一抗種屬相匹配的二 抗。 柱形圖分析時(shí)出現(xiàn)熒光雙峰 抗原本身特性所決定（比如不同時(shí)期的細(xì)胞蛋白表達(dá)量不同） 進(jìn)樣針堵塞，建議清洗管路。 進(jìn)樣速度太快，建議調(diào)低進(jìn)樣速度。 管路系統(tǒng)偏移導(dǎo)致焦距偏離，建議請(qǐng)專業(yè)維修人員校準(zhǔn)。 IHC、IF、FC區(qū)別與聯(lián)系 FC 控制 結(jié)果顯示方式 樣本 細(xì)胞數(shù)量 樣本利用 結(jié)果揭示信息 功能 電腦（客觀） 熒光激發(fā)后被探測(cè)子捕獲 信號(hào) 單細(xì)胞（或顆粒）懸液 （流動(dòng)） 大（上萬個(gè)） 分選后可回收利用 細(xì)胞群體特征分布 可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)參數(shù) IHC/IF 人（主觀） 化學(xué)顯色/熒光通過顯微鏡 觀察拍片 組織切片/細(xì)胞爬片 （靜止） 小 不可回收

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