高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方替硝唑醇溶液中兩組分含量

1、    高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方替硝唑醇溶液中兩組分含量        摘要目的：建立同時(shí)測(cè)定復(fù)方替硝唑醇溶液中替硝唑和氯霉素含量的高效液相色譜法。方法：采用YWG-C18柱，以甲醇-水-冰醋酸(35650.1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果：替硝唑和氯霉素在20120g.ml-1的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。兩者的平均回收率分別為100.6%±0.5%和99.5%±0.5%，日內(nèi)及日間RSD<3%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、靈敏，適用于復(fù)方替硝唑醇

2、溶液的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞高效液相色譜法；復(fù)方替硝唑醇溶液；替硝唑；氯霉素中分類號(hào)R927.2 DETERMINATION OF TINIDAZOLE AND CHLORAMPHENICOL IN COMPOUND TINIDAZOLE TINCTURE BY HPLCXia Dongya,Ma Yan,Guo Tao,Zong Wentao（Department of Pharmacy,General Hospital of Shenyang Military Region,Shenyang110015）AbstractAIM To simultaneously determine tinida

3、zole and chloramphenicol in compound tinidazole ticture by HPLC.METHODS The YWG-C18 cloumn was used and the mixture of methanol-water-acetic acid glacial(35650.1)was used as mobile phase with the detection wavelenth of 290 nm.RESULTS The linear curve range of tinidazole and chloramphenical was 20120

4、g.ml-1.The average recovery of tinidazole and Chloramphenicol was 100.6%±0.5% and 99.5%±0.5%,respectively.The RSD of inter-day and intra-day was less than 3%.CONCLUSION The method is simple,accurate and suitable for the qualify control of the two components in compound tinidazole ticture.K

5、ey wordsHPLC;compound tinidazole tincture;tinidazole;chloramphenicol復(fù)方替硝唑醇溶液是我院研制的一種外用制劑，經(jīng)皮膚科臨床試用，治療痤瘡、酒渣鼻等療效較好。該制劑主要含替硝唑和氯霉素，在研制過程中，為控制制劑質(zhì)量，我們建立了同時(shí)測(cè)定復(fù)方替硝唑醇溶液中替硝唑和氯霉素含量的高效液相色譜法。1材料與方法1.1儀器藥品和試劑Waters高效液相色譜儀系統(tǒng)：M510泵，486型可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，U6K進(jìn)樣器，746型數(shù)據(jù)處理機(jī)(美國(guó)Waters公司)。復(fù)方替硝唑醇溶液(本院制劑室，批號(hào)見表1，規(guī)格100ml含替硝唑1.0g，氯霉素1.

6、0%g)；替硝唑精制品(湖北廣濟(jì)藥業(yè)有限公司)；氯霉素精制品(東北制藥總廠)；苯甲酸(鎮(zhèn)江化工廠)，甲醇為色譜醇(山東省禹王實(shí)業(yè)總公司化學(xué)試劑廠)；水為亞沸蒸餾水，其余試劑為分析純。1.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制精密稱取替硝唑精制品、氯霉素精制品及苯甲酸適量，分別用無水乙醇溶解后定容，配成濃度為1.00mg.ml-1的儲(chǔ)備液，替硝唑置避光處，氯霉素及苯甲酸置冰箱4保存。1.3色譜條件色譜柱為YWG-G18 10m，5mm×150mm(中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理所)；流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸(35650.1)，流速1.2ml.min-1；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，靈敏度0.01AUFS；進(jìn)樣量10l。

7、1.4樣品測(cè)定精密量取復(fù)方替硝唑醇溶液5.0ml，置100ml量瓶中，用75%乙醇稀釋至刻度，混勻。再精密量取上述稀釋液5.0ml置25ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液5.0ml，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算樣品峰與內(nèi)標(biāo)峰的面積比，分別按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算替硝唑和氯霉素的含量。2結(jié)果2.1色譜行為在上述色譜條件下，替硝唑、氯霉素與內(nèi)標(biāo)峰得到良好分離，空白制劑對(duì)測(cè)定無干擾。替硝唑、氯霉素及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為4.0min、8.6min和12.3min,見1。1復(fù)方替硝唑醇溶液色譜A 空白制劑；B 樣品；1 替硝唑，2 氯霉素，3 內(nèi)標(biāo)2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白制劑7份，分別加入不同量的替硝唑標(biāo)

8、準(zhǔn)液和氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，再加入內(nèi)標(biāo)液各5.0ml，用無水乙醇稀釋并定容至50ml，使替硝唑及氯霉素濃度分別為0、20、40、60、80、100、120g.ml-1。進(jìn)樣測(cè)定以樣品峰對(duì)內(nèi)標(biāo)峰的面積比As/Ai為橫坐標(biāo)，樣品濃度C(g.ml-1)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為替硝唑C=27.917 0As/Ai+0.259 2,r=0.999 8;氯霉素C=27.113 3 As/Ai+1.243 4,r=0.999 7。2.3回收率實(shí)驗(yàn)取替硝唑標(biāo)準(zhǔn)液和氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，按處方比例配制成含有復(fù)方替硝唑醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)樣品5份，按照“樣品測(cè)定”項(xiàng)下操作，測(cè)定回收率。替硝唑和氯霉素的平均回收率分別為100.

9、6%±0.5%和99.5%±0.5%。2.4精密度實(shí)驗(yàn)取替硝唑標(biāo)準(zhǔn)液和氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液按處方比例配制成標(biāo)準(zhǔn)樣品，按照“樣品測(cè)定”項(xiàng)下操作。日內(nèi)重復(fù)測(cè)定5次，日間重復(fù)測(cè)定5次。測(cè)得替硝唑和氯霉素的日內(nèi)RSD分別為0.5%和0.6%；日間RSD分別為0.8%和2.7%。2.5樣品測(cè)定取5個(gè)批號(hào)的樣品，分別按照“樣品測(cè)定”項(xiàng)下操作，結(jié)果見表1。表1復(fù)方替硝唑醇溶液含量測(cè)定結(jié)果(±s，n=3)批號(hào)相當(dāng)標(biāo)示量(%)替硝唑氯霉素97071498.0±1.6100.7±1.997071599.3±0.8101.3±1.397071698.9&

10、#177;0.2102.0±0.8970717100.0±1.1102.2±0.2970718100.4±1.8102.8±2.03討論3.1替硝唑制劑的含量測(cè)定有分光光度法1和高效液相色譜法2。替硝唑和氯霉素的UV max分別為317nm和287nm，可分別用分光光度法測(cè)定含量。同時(shí)測(cè)定兩組分含量時(shí)，因替硝唑在287nm處，氯霉素在317nm處有吸收，吸收峰相互重疊而干擾。為此，我們采用高效液相色譜法，有關(guān)替硝唑復(fù)方制劑含量測(cè)定的高效液相色譜法未見報(bào)道。3.2復(fù)方替硝唑醇溶液處方中替硝唑和氯霉素的含量相等，通過對(duì)替硝唑和氯霉素吸收光譜曲線的分

11、析，選擇替硝唑和氯霉素吸收度相等的290nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，以使兩組分的檢測(cè)靈敏度一致。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相中甲醇與水的比例對(duì)保留時(shí)間和分離度有影響，當(dāng)甲醇比例大于45%時(shí)兩組分不能完全分離，降低甲醇比例，可改善分離度，但保留時(shí)間延長(zhǎng)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，我們選擇甲醇-水(3565)，替硝唑、氯霉素及內(nèi)標(biāo)之間的分離度均大于2，分離效果滿意，且色譜分析時(shí)間約15min。3.3本文所建立的方法可同時(shí)測(cè)定復(fù)方替硝唑醇溶液中的替硝唑和氯霉素含量。方法回收率高，測(cè)得的回收率>99%；精密度好，日內(nèi)RSD<1%，日間RSD<3%。方法簡(jiǎn)便，樣品無需特殊處理，故適用于復(fù)方替硝唑醇溶液的質(zhì)量控制。作者簡(jiǎn)介：夏東亞，男，副主任藥師，全軍臨床藥理專