感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷

1、 感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷 Laboratory Diagnosis of Infectious DiseasesLaboratory Diagnosis of Infectious Diseases 目的要求目的要求1 1掌握感染性疾病常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目及其臨床意掌握感染性疾病常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目及其臨床意義和評(píng)價(jià)義和評(píng)價(jià)2 2熟悉引起血流、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、胃腸道、熟悉引起血流、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、胃腸道、泌尿系統(tǒng)感染的常見(jiàn)病原體與常見(jiàn)疾病及病原學(xué)檢查泌尿系統(tǒng)感染的常見(jiàn)病原體與常見(jiàn)疾病及病原學(xué)檢查3 3了解當(dāng)今感染病的特點(diǎn)、感染類(lèi)型了解當(dāng)今感染病的特點(diǎn)、感染類(lèi)型

2、 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述n感染性疾?。焊腥拘约膊。翰≡w病原體 宿主宿主 疾病疾病n病原體病原體（細(xì)菌細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲(chóng)、真菌、病毒、寄生蟲(chóng) ）一、當(dāng)今感染病的特點(diǎn)一、當(dāng)今感染病的特點(diǎn)1 感染性病原體的種類(lèi)不斷發(fā)生變遷感染性病原體的種類(lèi)不斷發(fā)生變遷2 2 宿主的免疫防御能力下降宿主的免疫防御能力下降3 3 內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加二、二、 感染類(lèi)型感染類(lèi)型（一）按病原體分類(lèi)（一）按病原體分類(lèi) 1. 傳統(tǒng)病原體感染傳統(tǒng)病原體感染 細(xì)菌：細(xì)菌： 病毒：病毒： 真菌：真菌： 寄生蟲(chóng)寄生蟲(chóng) 2. 2. 新發(fā)病原體：新發(fā)病原體： SARSSARS冠狀病毒冠

3、狀病毒 新甲型新甲型H1N1流感病毒流感病毒 高致病性禽流感病毒高致病性禽流感病毒( (二）按疾病特征分類(lèi)二）按疾病特征分類(lèi)1. 1. 病原體被清除病原體被清除2. 2. 隱性感染隱性感染(covert infection)(covert infection)，亦稱(chēng)亞臨床感染，亦稱(chēng)亞臨床感染 一般占人群的一般占人群的9090或以上或以上 3. 3. 顯性感染顯性感染(overt infection)(overt infection)又稱(chēng)為臨床感染又稱(chēng)為臨床感染 發(fā)病快慢和病程長(zhǎng)短：急性感染和慢性感染發(fā)病快慢和病程長(zhǎng)短：急性感染和慢性感染 感染部位及性質(zhì)：局部感染和全身感染感染部位及性質(zhì)：局部感

4、染和全身感染 全身感染：全身感染： 菌血癥菌血癥 敗血癥敗血癥 毒血癥毒血癥 膿毒血癥膿毒血癥( (三）按病原體來(lái)源三）按病原體來(lái)源外源性感染外源性感染內(nèi)源性感染內(nèi)源性感染三、感染性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷三、感染性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷（一）一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè)（一）一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè) WBCWBC常規(guī)檢查常規(guī)檢查 C-C-反應(yīng)蛋白（反應(yīng)蛋白（CRPCRP） 血清降鈣素原（血清降鈣素原（PCTPCT） 器官功能改變的檢測(cè)器官功能改變的檢測(cè)（二）病原學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷（二）病原學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷 臨床病原體檢查目的臨床病原體檢查目的 明確感染病原體明確感染病原體 指導(dǎo)治療，預(yù)防，判斷預(yù)后指導(dǎo)治療，預(yù)防，判斷預(yù)后第二節(jié)第二節(jié) 感染性疾病的常用

5、病原學(xué)檢測(cè)感染性疾病的常用病原學(xué)檢測(cè)病原學(xué)檢測(cè)基本程序病原學(xué)檢測(cè)基本程序 正確、規(guī)范正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)本 顯微鏡對(duì)標(biāo)本或組織中的病原體的顯微鏡對(duì)標(biāo)本或組織中的病原體的形態(tài)學(xué)形態(tài)學(xué)檢查檢查 病原體的病原體的分離培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)和鑒定 用免疫學(xué)技術(shù)對(duì)病原體用免疫學(xué)技術(shù)對(duì)病原體抗原或相應(yīng)抗體抗原或相應(yīng)抗體的檢測(cè)的檢測(cè) 用分子生物學(xué)方法對(duì)病原體用分子生物學(xué)方法對(duì)病原體特異性基因特異性基因的檢測(cè)的檢測(cè)一 、臨床標(biāo)本的采集與處理 （一）標(biāo)本采集的一般原則一）標(biāo)本采集的一般原則 1.1.早期早期 病程早期、急性期或癥狀典型時(shí)病程早期、急性期或癥狀典型時(shí) 使用抗生素前使用抗生素前 2.2.

6、無(wú)菌采集無(wú)菌采集 應(yīng)無(wú)污染，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作應(yīng)無(wú)污染，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作 采集的標(biāo)本均應(yīng)盛于無(wú)菌容器內(nèi)采集的標(biāo)本均應(yīng)盛于無(wú)菌容器內(nèi) 3.3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集 4.4.適量標(biāo)本適量標(biāo)本, ,不同病程采集不同部位標(biāo)本不同病程采集不同部位標(biāo)本 5.5.安全采集安全采集做好標(biāo)記做好標(biāo)記（二）標(biāo)本的處理 原則：保持病原體活力，保持標(biāo)本不被污染，也不污染環(huán)境原則：保持病原體活力，保持標(biāo)本不被污染，也不污染環(huán)境1.1.盡快送檢盡快送檢 對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌應(yīng)保溫立即送檢對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌應(yīng)保溫立即送檢, ,其他所有采集后最好在其他所有采集后最好在2 2小時(shí)內(nèi)送檢小時(shí)內(nèi)

7、送檢, ,不能及時(shí)送檢不能及時(shí)送檢, ,應(yīng)注意保存應(yīng)注意保存2. 2. 必須注意安全防護(hù)必須注意安全防護(hù), ,切勿污染環(huán)境切勿污染環(huán)境3.3.厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專(zhuān)門(mén)的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專(zhuān)門(mén)的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送 二、二、 檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法n查病原體：形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查查病原體：形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查 分離培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)和鑒定n檢測(cè)病原體成分（抗原和核酸）檢測(cè)病原體成分（抗原和核酸）n檢測(cè)患者血清中特異性抗體檢測(cè)患者血清中特異性抗體n代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物 （生化試驗(yàn)）（生化試驗(yàn)）n毒素：外毒素、內(nèi)毒素毒素：外毒素、內(nèi)毒素（一）直

8、接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查（形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查）（形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查） 1. 染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法n染色標(biāo)本：了解病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體染色標(biāo)本：了解病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體n臨床意義：臨床意義： 1.1.鏡檢可以了解有無(wú)病原體及大致的量鏡檢可以了解有無(wú)病原體及大致的量 2.2.根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對(duì)病原體的初步識(shí)別和分類(lèi)根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對(duì)病原體的初步識(shí)別和分類(lèi) 3.3.通過(guò)形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，對(duì)臨床早期診斷和治療疾病有通過(guò)形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，對(duì)臨床早期診斷和治療疾病有 一定的參考意義一定的參考意義 如如CSF

9、CSF找到抗酸桿菌，應(yīng)初步考慮結(jié)核分枝桿菌感染找到抗酸桿菌，應(yīng)初步考慮結(jié)核分枝桿菌感染 革蘭陽(yáng)性革蘭陽(yáng)性 革蘭陰性革蘭陰性 抗酸染色 培養(yǎng)在McCoy細(xì)胞的沙眼衣原體 吉姆薩染色的McCoy細(xì)胞，含大衣原體包涵體，使部分細(xì)胞核不清楚。（吉姆薩染色,放大1000倍） 狂犬病毒可于細(xì)胞漿中可形成嗜酸性包涵體 新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）革蘭染色革蘭染色 墨汁負(fù)染墨汁負(fù)染 2. 2.不染色標(biāo)本不染色標(biāo)本 1) 1) 檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況2 2） 螺旋體由于不易著色并有形態(tài)特征螺旋體由于不易著色并有形態(tài)特征 對(duì)某些病原菌作出初步鑒定，如霍亂弧菌對(duì)某

10、些病原菌作出初步鑒定，如霍亂弧菌 常用方法常用方法 壓片法壓片法( (壓滴法壓滴法) )或懸滴法或懸滴法 暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查體癬皮屑可見(jiàn)關(guān)節(jié)孢子體癬皮屑可見(jiàn)關(guān)節(jié)孢子HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy HAV形態(tài)電鏡圖糞便標(biāo)本負(fù)染 X200000 3. 直接電鏡檢測(cè)直接電鏡檢測(cè)EM 免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)IEM（二）（二）分離培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)和鑒定 分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)臨

11、床意義：臨床意義：1.1.明確感染病原體明確感染病原體2.2.為臨床提供體外抗微生物藥物敏為臨床提供體外抗微生物藥物敏 感試驗(yàn)結(jié)果感試驗(yàn)結(jié)果藥物敏感試驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn)培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征形態(tài)特征形態(tài)特征生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)毒力試驗(yàn)毒力試驗(yàn)1. 細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定培培養(yǎng)養(yǎng)特特征征細(xì)菌學(xué)診斷細(xì)菌學(xué)診斷形態(tài)特征形態(tài)特征血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定大腸埃希菌大腸埃希菌對(duì)照-吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)枸椽酸鹽利用試驗(yàn)枸椽酸鹽利用試驗(yàn)大腸埃希菌大腸埃希菌甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)VP試驗(yàn)試驗(yàn)大腸埃希菌大腸埃希菌大腸埃希菌大腸埃希菌對(duì)照-對(duì)照+對(duì)照+生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)一）病毒分離培養(yǎng)一）病毒分離培養(yǎng)

12、1 1動(dòng)物接種動(dòng)物接種（二）（二） 病毒的分離與鑒定病毒的分離與鑒定 2雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種尿囊接種及羊膜腔接種尿囊接種及羊膜腔接種敏感動(dòng)物合適部位敏感動(dòng)物合適部位3組織細(xì)胞培養(yǎng)：組織細(xì)胞培養(yǎng)： 目前培養(yǎng)病毒應(yīng)用最廣的方法目前培養(yǎng)病毒應(yīng)用最廣的方法 （1）原代和次代細(xì)胞培養(yǎng) （2）二倍體細(xì)胞培養(yǎng) （3）傳代細(xì)胞培養(yǎng) 識(shí)別病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖識(shí)別病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖 病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo) 1）細(xì)胞病變）細(xì)胞病變: 細(xì)胞病變效應(yīng)（細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、包涵體）、包涵體 2）紅細(xì)胞吸附（）紅細(xì)胞吸附（hemadsorp

13、tion） 細(xì)胞病變效應(yīng)（細(xì)胞病變效應(yīng)（CPECPE）：）： 病毒感染細(xì)胞后引起的細(xì)胞病變，可出現(xiàn)細(xì)胞圓縮、裂解或細(xì)胞病毒感染細(xì)胞后引起的細(xì)胞病變，可出現(xiàn)細(xì)胞圓縮、裂解或細(xì)胞 腫大、數(shù)個(gè)細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞等。腫大、數(shù)個(gè)細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞等。二）病毒鑒定二）病毒鑒定Cytopathic effect (CPE) of primary severe acute respiratory syndromeassociated coronavirus strain48h72h36hN病毒學(xué)診斷病毒學(xué)診斷 常用常用鑒定鑒定試驗(yàn)：試驗(yàn)： 中和實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn) 血凝抑制實(shí)驗(yàn)血凝抑制實(shí)驗(yàn)virus 紅細(xì)胞凝集抑

14、制（紅細(xì)胞凝集抑制（HI）試驗(yàn)）試驗(yàn)原理：原理： 病毒病毒 病毒（特異性抗體）病毒（特異性抗體） + + + + 紅細(xì)胞紅細(xì)胞 紅細(xì)胞紅細(xì)胞 凝集凝集 不凝集不凝集 血凝現(xiàn)象血凝現(xiàn)象 血凝抑制現(xiàn)象血凝抑制現(xiàn)象 Confocal image showing a macrophage in the lung of a mouse infected with SARS-corona virus. Double immunofluorescence labels the macrophage in red with antibodies against Mac-2 and viral protein

15、in green with antibodies against spike. （三）真菌的分離培養(yǎng)（三）真菌的分離培養(yǎng) 常用培養(yǎng)基常用培養(yǎng)基 沙保（沙保（Sabourud）培養(yǎng)基）培養(yǎng)基 真菌的菌落有兩種：酵母型菌落和絲狀菌落真菌的菌落有兩種：酵母型菌落和絲狀菌落酵母型菌落酵母型菌落絲狀菌落絲狀菌落新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）（三）鑒定（三）鑒定1.1.糖糖( (醇醇) )類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn) 3737孵育，觀察糖發(fā)酵情況。孵育，觀察糖發(fā)酵情況。2.2.同化碳源試驗(yàn)同化碳源試驗(yàn) 含菌生理鹽水與已融化的固體同化碳含菌生理鹽水與已融化的固體同化碳源培養(yǎng)基源培養(yǎng)基(45)(45)混合，然后在

16、培養(yǎng)基上分別加糖，置混合，然后在培養(yǎng)基上分別加糖，置2525孵育觀察結(jié)果。若孵育觀察結(jié)果。若24h24h后無(wú)變化可重復(fù)加糖。如能后無(wú)變化可重復(fù)加糖。如能同化周?chē)猩L(zhǎng)圈，否則無(wú)生長(zhǎng)。同化周?chē)猩L(zhǎng)圈，否則無(wú)生長(zhǎng)。 3.3.同化氮源試驗(yàn)同化氮源試驗(yàn) 同化碳源試驗(yàn)相同，但需用無(wú)氮源的同化碳源試驗(yàn)相同，但需用無(wú)氮源的培養(yǎng)基，不要加糖類(lèi)，而加入硝酸鉀。培養(yǎng)基，不要加糖類(lèi)，而加入硝酸鉀。（三）病原體抗原與抗體的檢測(cè)（三）病原體抗原與抗體的檢測(cè)n病原體抗原成分的檢測(cè)：病原體抗原成分的檢測(cè)： 早期診斷早期診斷 現(xiàn)癥感染現(xiàn)癥感染n特異性特異性 IgMIgM： 早期診斷早期診斷 現(xiàn)癥感染現(xiàn)癥感染n特異性特異性

17、IgGIgG： 雙份血清的滴度呈雙份血清的滴度呈4 4倍或倍或4 4倍以上升高，倍以上升高，考慮病原體現(xiàn)癥感染考慮病原體現(xiàn)癥感染 * *排除交叉反應(yīng)的影響排除交叉反應(yīng)的影響夾心夾心ELISA( 檢測(cè)抗原）檢測(cè)抗原）間接間接ELISA ( 檢測(cè)抗體）檢測(cè)抗體）（四）病原體核酸檢測(cè)（四）病原體核酸檢測(cè) 1 1核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù) 通過(guò)已知序列的探針與病原體的核苷酸雜交，通過(guò)已知序列的探針與病原體的核苷酸雜交，用以了解病原體的有無(wú)用以了解病原體的有無(wú)。 SouthernSouthern印跡雜交（印跡雜交（Southern blotSouthern blot） NorthernNorthern印跡

18、雜交（印跡雜交（Northern blotNorthern blot） 斑點(diǎn)雜交（斑點(diǎn)雜交（dot blotdot blot） 原位雜交（原位雜交（in situ hybridization,ISHin situ hybridization,ISH） 2 2PCRPCR擴(kuò)增病原體微生物特異的擴(kuò)增病原體微生物特異的DNADNA或或 RNARNA片段片段 常用于檢測(cè)不能在體外培養(yǎng)或目前的培養(yǎng)技術(shù)不敏感、常用于檢測(cè)不能在體外培養(yǎng)或目前的培養(yǎng)技術(shù)不敏感、 費(fèi)用高昂或耗時(shí)長(zhǎng)的病原體費(fèi)用高昂或耗時(shí)長(zhǎng)的病原體 genomeprobe32P 35S 3H 125I 生物素生物素 地高辛地高辛 酶酶genome

19、genomegenomeprobeprobeprobe檢測(cè)方法：放射自顯影檢測(cè)方法：放射自顯影 底物顯色底物顯色 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光2 2PCR PCR 3. 3. 生物芯片技術(shù)生物芯片技術(shù) 核酸檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)核酸檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)n檢測(cè)病原體微生物最靈敏的方法檢測(cè)病原體微生物最靈敏的方法n早期診斷早期診斷n現(xiàn)癥感染現(xiàn)癥感染n假陽(yáng)性與假陰性假陽(yáng)性與假陰性 （五）細(xì)菌毒素的檢測(cè)（五）細(xì)菌毒素的檢測(cè) 1. 1. 內(nèi)毒素的測(cè)定內(nèi)毒素的測(cè)定 常用方法：鱟試驗(yàn)常用方法：鱟試驗(yàn)（limulus tests） 內(nèi)毒素與鱟試劑接觸時(shí)，可激活凝固酶原，使可溶內(nèi)毒素與鱟試劑接觸時(shí)，可激活凝固酶原，使可溶 性的凝固蛋白原變成

20、凝膠狀態(tài)的凝固蛋白性的凝固蛋白原變成凝膠狀態(tài)的凝固蛋白 內(nèi)毒素內(nèi)毒素(鱟試劑鱟試劑 ) 凝固酶原凝固酶原 凝固酶凝固酶 凝固蛋白原凝固蛋白原 凝固蛋白凝固蛋白(凝膠凝膠)2. 2. 外毒素的測(cè)定外毒素的測(cè)定（1 1）體內(nèi)毒力試驗(yàn)）體內(nèi)毒力試驗(yàn) 細(xì)菌外毒素對(duì)機(jī)體的毒性作用，可被相應(yīng)抗毒素中和，細(xì)菌外毒素對(duì)機(jī)體的毒性作用，可被相應(yīng)抗毒素中和，若先給動(dòng)物注射抗毒素，然后再注射外毒素，則動(dòng)物若先給動(dòng)物注射抗毒素，然后再注射外毒素，則動(dòng)物不產(chǎn)生中毒癥狀。不產(chǎn)生中毒癥狀。 （2 2）體外毒力試驗(yàn)）體外毒力試驗(yàn) 以細(xì)菌外毒素的特異性免疫血清為抗體與被檢細(xì)菌外毒素以細(xì)菌外毒素的特異性免疫血清為抗體與被檢細(xì)菌外

21、毒素( (抗抗原原) )進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，來(lái)檢測(cè)外毒素，從而鑒定細(xì)菌是否產(chǎn)生進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，來(lái)檢測(cè)外毒素，從而鑒定細(xì)菌是否產(chǎn)生該種毒素。該種毒素。 白喉棒狀桿菌的白喉棒狀桿菌的ElekElek平板毒力測(cè)定平板毒力測(cè)定 （) ) 免疫學(xué)方法：免疫學(xué)方法：如如ELISAELISA法法 葡萄球菌腸毒素、腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌葡萄球菌腸毒素、腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌LTLT及及STST等的測(cè)定等的測(cè)定 （4 4）分子技術(shù)）分子技術(shù) Elek平板試驗(yàn)Elek Test沉淀線(xiàn)(陽(yáng)性)含白喉抗毒素濾紙片白喉?xiàng)U菌菌苔標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)毒株(六）體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)六）體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)常用方法常用方法n紙片擴(kuò)散法（紙片擴(kuò)散法（

22、Kirby-Bauer test）n稀釋法（稀釋法（dilution test）nE試驗(yàn)法（試驗(yàn)法（E test） n殺菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)n體外聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)體外聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn) 第三節(jié)第三節(jié) 常見(jiàn)感染性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷常見(jiàn)感染性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷一、血流感染一、血流感染（一）引起血流感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病（一）引起血流感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病n常見(jiàn)微生物常見(jiàn)微生物革蘭陽(yáng)性球菌：葡萄球菌、革蘭陽(yáng)性球菌：葡萄球菌、 鏈球菌、腸球菌鏈球菌、腸球菌革蘭陰性桿菌：大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷革蘭陰性桿菌：大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、沙門(mén)菌伯菌、沙門(mén)菌真菌：真菌：病毒：病毒：HBVHBV、H

23、CVHCVn血流感染常見(jiàn)疾病血流感染常見(jiàn)疾病細(xì)菌：菌血癥、敗血癥、膿毒血癥細(xì)菌：菌血癥、敗血癥、膿毒血癥真菌：真菌血癥真菌：真菌血癥病毒：病毒血癥病毒：病毒血癥( (二二) )血流感染的病原學(xué)檢查血流感染的病原學(xué)檢查1. 1. 血液標(biāo)本采集與運(yùn)送血液標(biāo)本采集與運(yùn)送n采血時(shí)間：寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前采血時(shí)間：寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前0.50.51hr1hr 24小時(shí)內(nèi)采集小時(shí)內(nèi)采集23次次n采血量：成人采血量：成人5 510ml10ml，嬰兒和兒童為，嬰兒和兒童為1 12ml2mln運(yùn)送：血液置于含抗凝集聚茴香腦磺酸鈉無(wú)菌瓶中送檢運(yùn)送：血液置于含抗凝集聚茴香腦磺酸鈉無(wú)菌瓶中送檢血液標(biāo)本的采集方法血

24、液標(biāo)本的采集方法2 2、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（1 1）檢驗(yàn)程序）檢驗(yàn)程序bloodaerobic culture anaerobic culture Bacteria growthBacteria growthProcedure for bacterial detection in bloodProcedure for bacterial detection in bloodDirect microscopic examinationCulture(BA) colony characteristicsstain of smear and microscopic examinationBioc

25、hemical testSerological indentificationantibiotic susceptibility testDirect microscopic examinationCulture(BA) anaerobic culturereportFirst reportEndotoxin detection（2 2）臨床意義）臨床意義陽(yáng)性陽(yáng)性確診血流感染確診血流感染陰性：培養(yǎng)陰性：培養(yǎng)7 7天，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)天，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)注意區(qū)分致病菌和污染菌注意區(qū)分致病菌和污染菌2 2、真菌學(xué)檢驗(yàn)（1 1）檢驗(yàn)程序）檢驗(yàn)程序bloodaerobic culture Bacteria g

26、rowthProcedure for fungal detection in bloodProcedure for fungal detection in bloodDirect microscopic examinationCulture(Sabouraud agaror CHROM agar) colony characteristicsstain of smear and microscopic examinationBiochemical testSerological indentificationantibiotic susceptibility testPNA-FISH PCRr

27、eportFirst reportSerological detection（2 2）臨床意義）臨床意義初報(bào)：增菌培養(yǎng)初報(bào)：增菌培養(yǎng)真菌孢子真菌孢子終報(bào)：分離培養(yǎng)鑒定終報(bào)：分離培養(yǎng)鑒定菌株菌株協(xié)助診斷：協(xié)助診斷：-D-1,3-D-1,3葡聚糖（葡聚糖（BDG BDG ） 半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（GMGM）二、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染二、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（一）引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見(jiàn)微生物（一）引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病與常見(jiàn)疾病n常見(jiàn)微生物常見(jiàn)微生物 腦膜炎奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、肺腦膜炎奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌炎鏈球菌

28、、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌 新生隱球菌、假絲酵母菌新生隱球菌、假絲酵母菌 乙型腦炎病毒，單純皰疹病毒乙型腦炎病毒，單純皰疹病毒n中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見(jiàn)疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見(jiàn)疾病 腦膜炎腦膜炎 、腦炎、腦膿腫、腦炎、腦膿腫（二）中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的病原學(xué)檢查（二）中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的病原學(xué)檢查 1. 1. 標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與運(yùn)送 腦脊液腦脊液 臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml2-3ml，置于無(wú)菌容器中，置于無(wú)菌容器中 腦脊液應(yīng)立即保溫送檢或床邊接種，不能暫時(shí)保存于腦脊液應(yīng)立即保溫送檢或床邊接種，不能暫時(shí)保存于 冰箱中冰箱中2. 細(xì)菌學(xué)、真菌學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌學(xué)、真菌學(xué)

29、檢驗(yàn)（1 1）檢驗(yàn)程序）檢驗(yàn)程序CSFBacteria culture Procedure for bacterial and fungal detection in CSFGram stainSabouraud agarcolony characteristicsstain of smear and microscopic examinationBiochemical testantibiotic susceptibility testreportFirst reportMake smears(centrifuge)Acid-fast stainInk stainfungal culture

30、 BA, CA, MAC,L-J（2 2）臨床意義）臨床意義正常腦脊液：無(wú)菌正常腦脊液：無(wú)菌直接涂片檢查直接涂片檢查 ：初報(bào)：初報(bào) G G染色、抗酸染色、墨汁負(fù)染色染色、抗酸染色、墨汁負(fù)染色n分離培養(yǎng)鑒定：分離培養(yǎng)鑒定：（+ +）確診）確診 協(xié)助診斷3 3、病毒學(xué)檢查：、病毒學(xué)檢查： 抗原抗體抗原抗體 核酸核酸三、呼吸系統(tǒng)感染三、呼吸系統(tǒng)感染（一）引起呼吸系統(tǒng)感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾?。ㄒ唬┮鸷粑到y(tǒng)感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病 上呼吸道感染：上呼吸道感染： 病毒性感染（主）病毒性感染（主）: :鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒、流感和副流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒、流感和副流感病毒、 呼吸道合胞病

31、毒、埃可病毒、柯薩奇病毒呼吸道合胞病毒、?？刹《尽⒖滤_奇病毒 細(xì)菌性感染（細(xì)菌性感染（2020）：白喉棒狀桿菌、百日咳鮑特菌）：白喉棒狀桿菌、百日咳鮑特菌 乙型溶血性鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌乙型溶血性鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌 肺部感染：肺部感染： 肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、 銅綠假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、假絲酵母菌、肺炎衣原體、銅綠假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、假絲酵母菌、肺炎衣原體、 流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒（二）呼吸系統(tǒng)感染的病原學(xué)檢查（

32、二）呼吸系統(tǒng)感染的病原學(xué)檢查 1. 1. 標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與運(yùn)送呼吸道標(biāo)本呼吸道標(biāo)本n類(lèi)型：鼻咽拭子、痰和經(jīng)氣管采集的標(biāo)本類(lèi)型：鼻咽拭子、痰和經(jīng)氣管采集的標(biāo)本n上呼吸道存在正常菌群，在采集標(biāo)本與結(jié)上呼吸道存在正常菌群，在采集標(biāo)本與結(jié)果分析時(shí)應(yīng)予考慮果分析時(shí)應(yīng)予考慮2. 細(xì)菌學(xué)、真菌學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌學(xué)、真菌學(xué)檢驗(yàn)（1 1）檢驗(yàn)程序）檢驗(yàn)程序Sputum,bronchal lavage,transtracheal aspirateSpecimen processingProcedure for bacterial and fungal detection in sputum,bronchal

33、lavage,transtracheal aspiratecolony characteristicsstain of smear and microscopic examinationBiochemical testSerological indentificationantibiotic susceptibility testreportFirst reportEye observationBA, CA, MAC,L-J, Sabouraud agarstain of smear and microscopic examination（2）臨床意義）臨床意義肉眼觀察痰性狀：鐵銹色痰肉眼觀察

34、痰性狀：鐵銹色痰 - 肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌直接涂片鏡檢：抗酸桿菌直接涂片鏡檢：抗酸桿菌- 結(jié)核結(jié)核分離培養(yǎng)鑒定：確診分離培養(yǎng)鑒定：確診3、病毒學(xué)檢驗(yàn)：、病毒學(xué)檢驗(yàn)：分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)免疫學(xué)檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)分子技術(shù)分子技術(shù)四、胃腸道感染四、胃腸道感染（一）引起胃腸道感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾?。ㄒ唬┮鹞改c道感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病 胃腸炎、腸炎、結(jié)腸炎：胃腸炎、腸炎、結(jié)腸炎： 霍亂、傷寒、菌痢霍亂、傷寒、菌痢 侵襲性：侵襲性：沙門(mén)菌、志賀菌、彎曲菌、致病大腸埃希菌、沙門(mén)菌、志賀菌、彎曲菌、致病大腸埃希菌、 耶爾森菌、副溶血弧菌耶爾森菌、副溶血弧菌 毒素性：霍亂弧菌、致病大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌毒素性

35、：霍亂弧菌、致病大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、 產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難芽胞梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難芽胞梭菌 病毒：輪狀病毒病毒：輪狀病毒 真菌：真菌：白色假絲酵母菌、曲霉菌白色假絲酵母菌、曲霉菌二）胃腸道感染的病原學(xué)檢查二）胃腸道感染的病原學(xué)檢查 1. 1. 標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與運(yùn)送 糞便標(biāo)本糞便標(biāo)本n自然排便，挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢；自然排便，挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢； 液體糞便則取絮狀物，一般取液體糞便則取絮狀物，一般取1 13ml 3ml n排便困難者，采用直腸拭子采集排便困難者，采用直腸拭子采集n傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢3 3次次2 2、細(xì)菌學(xué)

36、檢驗(yàn)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（1 1）檢驗(yàn)程序）檢驗(yàn)程序Stool,rectal swab,food and wateranaerobic culturemicroaerobic culture Enrichment broths,SF broth,GN brothProcedure for bacterial detection in stool,rectal swab,food and waterProcedure for bacterial detection in stool,rectal swab,food and waterWet mountsDirect microscopic examin

37、ationcolony characteristicsstain of smear and microscopic examinationBiochemical testSerological indentificationantibiotic susceptibility testreportFirst reportIsolation culture Selective medium(MAC,SS,TCBS)（2 2）臨床意義）臨床意義直接涂片：一般不做直接涂片：一般不做 除外：疑為霍亂弧菌、彎曲菌感染以及腸結(jié)核、偽膜性腸炎除外：疑為霍亂弧菌、彎曲菌感染以及腸結(jié)核、偽膜性腸炎胃粘膜活檢標(biāo)本：胃粘膜活檢標(biāo)本： 幽門(mén)螺桿菌幽門(mén)螺桿菌分離培養(yǎng)鑒定：分離培養(yǎng)鑒定：直接涂片革蘭染色菌群調(diào)查直接涂片革蘭染色菌群調(diào)查 ：抗生素相關(guān)腹瀉：抗生素相關(guān)腹瀉細(xì)菌毒素檢測(cè)細(xì)菌毒素檢測(cè)病毒學(xué)檢查：病毒學(xué)檢查：五、泌尿系統(tǒng)感染五、泌尿系統(tǒng)感染（一）引起泌尿系統(tǒng)感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病（一）引起泌尿系統(tǒng)感染常見(jiàn)微生物與常見(jiàn)疾病n上尿路感染（輸尿管炎、腎盂腎炎）上尿路感染（輸尿管炎、腎盂腎炎）n下尿路感染（膀胱炎、尿道炎）下尿路感染（膀胱炎、尿道炎）n大腸埃希菌、變形桿菌、腸球菌、凝固酶陰性大腸埃希菌、變形桿菌、腸球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、