腫瘤壞死因子與潰瘍性結腸炎

1、腫瘤壞死因子與潰瘍性結腸炎潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis UC）是一種累及結腸膜和粘膜下層病變的慢性非特異性腸道炎性疾病，臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、粘液膿血便，歐美發(fā)達地區(qū)發(fā)病率高，我國的發(fā)病率呈逐年上升。群體流行病學調查和雙生子研究顯示UC發(fā)病與遺傳、免疫和環(huán)境等因素有關。腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor ，TNF）是一種重要的促炎細胞因子，具有廣泛的誘導炎癥和免疫調節(jié)功能。為了探討TNF-基因多態(tài)性與UC的相關性，我們采用序列特異引物PCR方法（SSP-PCR）對57例UC患者及127例健康正常人進行TNF-基因多態(tài)性檢測。1 資料與方法UC患者57

2、例，其中男性42例，女性15例，年齡為2168歲，所有患者都經過臨床、實驗室、腸鏡及組織學檢查,診斷符合2000 年成都全國IBD 學術研討會制定的標準 1，同時以127名漢族健康體檢者為正常對照組。1.2 DNA的提?。喝】鼓?ml, 按蛋白酶K 消化,鹽析法抽提、純化DNA； TNF- 基因的檢測：根據文獻 2 報道的引物序列和方法操作 SPSS 統(tǒng)計軟件包的2卡方檢驗。2 結 果2.1 TNF基因多態(tài)性PCR結果:見圖1、2和3 A B C M圖1 TNF-857 PCR電泳圖譜 A: CC純合型, B: CT雜合型, C: TT純合型, M: Mark A B C M圖2 TNF-

3、863 PCR電泳圖譜 A：CC純合型 B：CA雜合型 C：AA純合型 M: Mark A B C M圖3 TNF-1031 PCR電泳圖譜 A：TT純合型 B：TC雜合型 C：CC純合型 M: Mark 2.2 UC和正常人TNF-基因檢測結果：表1中的UC和正常對照組的TNF-各基因型分布，經2檢驗，分布符合哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)平衡（p），表示所選人群具有代表性；UC和對照組二者之間的TNF-各位點的基因型分布和等位基因頻率的比較，差異無顯著性（p）； 表1：UC和正常人TNF基因型和等位基因頻率的分布 組 別 n-857 Geneotype CC TC TT -8

4、63 Geneotype CC CA AA-1031 Geneotype TT TC CCUC5745 (78.9%)12 (21.1%)0 (0 %)46(80.7%)11(19.3%)0(0.0%)40(70.2%)15(26.3%)2(3.5%)對照組12790(70.9%)35 (27.6%)2 (1.6%)87(68.5%)38(29.9%)2(1.6%)88(69.3)37(29.1%)2(1.6%)2 =1.9 , P =0.387 2 =3.38 , P =0.185 2 =0.766 , P =0.092 -857 allele C T-863 allele C A-1031

5、 allele T CUC102 (89.5%)12(10.5%)103(90.4%)11(9.6%)95 (83.3%)19(16.7%)對照組215(84.6%)39(15.4%)212(83.5%)42(16.5%)213(83.9%)41(16.1%)2 =1.536 P =0.2152 =0.576P =0.4482 = 0.16P =0.9TNF-等位基因比較：表2顯示中國漢族人TNF的-857(C/T),-863(C/A), -1031(T/C) 位點基因多態(tài)性分布同亞洲的日本、韓國人群基本一致,差異無顯著性；-863(C/A), -1031(T/C) 位點基因多態(tài)性分布同歐洲的

6、英國、荷蘭、瑞典人群比較差異也無顯著性,但歐洲人群的TNF857T的等位基因頻率明顯高于亞洲人群,差異有顯著性（P0.05）。表2不同地區(qū)人群TNF- 等位基因頻率比較-857,% C T-863,% C A-1031,% T C本文 127215(84.6%)39(15.4%)212(83.5%)42(16.5%)213(83.9%)41(16.1%)日本 271446(82.3%)96(17.7%)466(86%)76(14%)455(84.%)87(16%)韓國 200344(86%)56(14%)342(85.5%)58(14.5%)324(81.5%)74(18.5%)英國35441

7、0(92.3) *34(7.1)604(85.3)104(14.7)567(80.1)141(19.9)荷蘭222410(92.3%)*34(7.7%)369(83.1)75(16.9)359(80.9)85(19.1)瑞典 254478(94%)*30(6%)422(83%)86(17%)406(80%)102(20.%)* p 0.05 3 討論研究發(fā)現(xiàn)在人6號染色體的某些區(qū)域上存在UC的重要的候選基因（IBD3）6，腫瘤壞死因子基因位于人類第6號染色體的HLA 類基因區(qū)的一段7kb的DNA上, TNF在UC的發(fā)病機制中起著重要的作用,UC患者腸黏膜組織、血清及糞便中有較高水平的TNF表達

8、7；TNF-基因存在多態(tài)性現(xiàn)象，其多態(tài)性位點主要有: 238(GA)，-308(GA)，857(CT), -863(CA)和-1031(TC), TNF基因多態(tài)性的變化與許多疾病中TNF水平增高有密切關系, 它能影響細胞因子的轉錄和宿主免疫反應5, 8，尤其是與MHC連鎖的疾病密切相關, 但是TNF基因多態(tài)性由于不同種族和不同群體的異質性、不同臨床表現(xiàn)、不同研究方法等原因，使得TNF基因多態(tài)性與UC之間相關性研究的結論不很一致。 目前報道較多是TNF-308位點研究結果，墨西哥 9和匈牙利 10分別報道：TNF-308位點與UC存在關聯(lián)，但是墨西哥UC患者的308A基因頻率較對照組增高，匈牙利

9、UC患者的308A基因頻率較對照組減少，國內袁岸龍11沒有發(fā)現(xiàn)二者之間存在關聯(lián)。 TNF-啟動區(qū)的5 側翼的 -857C/T，-863C/A, 1031T/C基因多態(tài)性位點是1998年發(fā)現(xiàn)的三個新的具有功能性效應的多態(tài)性位點3，12，實驗發(fā)現(xiàn)：-857 T，-863A和-1031C 等位基因的轉錄啟動子活性比其相應的常見型基因的活性高是倍3，12;國外近年相繼報道了該三個位點的基因多態(tài)性在一些自身免疫性疾病中作用的研究結果，Van Heel DA 8在歐洲北部的高加索人中發(fā)現(xiàn)857T和與UC存在關聯(lián)，英國的Orchard TR發(fā)現(xiàn)1031C與UC存在關聯(lián)13，而日本Negoro K14僅在是否采用類固醇激素治療的UC患者中,發(fā)現(xiàn)857T等位基因頻率存在差異, 在UC患者總體和對照組之間沒有發(fā)現(xiàn)差異。 迄今國內涉及TNF啟動區(qū)的5側翼的857C/T，-863(C/A), 1031(T/C)基因多態(tài)性相關資料的報道較少,本文資料顯示：-857，-863和-1031三個位點基因多態(tài)性與UC之間沒有存在直接關聯(lián)，提示TNF-857，-863和-1031位點可能不是中國人患UC的主要易感位點基因,TNF基因與UC之間的相互關系，是否涉及其它位點基因的共同參與以及與UC的不同表型是否相關