側(cè)柏總黃酮的抗炎作用

1、收稿日期:2003-09-08基金項(xiàng)目:廣東省衛(wèi)生廳基金項(xiàng)目(A2002474;湛江市科技攻關(guān)項(xiàng)目(EK0125作者簡介:梁統(tǒng)(1957-,男(漢族,廣東湛江人,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事生化藥理學(xué)方面研究,Tel :(07592388581-1,E -mail :liangt gdmc 1edu 1cn 。文章編號:1006-2858(200404-0301-03側(cè)柏總黃酮的抗炎作用梁統(tǒng)1,覃燕梅2,丁航2,梁念慈2,吳科峰1,劉慧明2(11廣東醫(yī)學(xué)院天然藥物研究與開發(fā)實(shí)驗(yàn)室,廣東湛江524023;21廣東醫(yī)學(xué)院生化教研室,廣東湛江524023摘要:目的研究側(cè)柏總黃酮的抗炎作用。方法以二甲

2、苯致小鼠耳腫脹及角叉菜膠誘發(fā)大鼠足爪腫脹模型分別探討側(cè)柏總黃酮對小鼠耳片腫脹及大鼠足爪腫脹的抑制作用。測定大鼠足爪組織中一氧化氮(NO 及前列腺素E 2(PGE 2的含量。結(jié)果側(cè)柏總黃酮在12155010mg kg -1內(nèi)呈劑量依賴地抑制二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹,2510mg kg -1劑量能顯著抑制大鼠足爪腫脹,其作用強(qiáng)于210mg kg -1的地塞米松。側(cè)柏總黃酮能抑制大鼠炎癥足爪組織NO 及PGE 2的生物合成。結(jié)論側(cè)柏總黃酮具有較強(qiáng)的抗炎作用,其抗炎作用可能與抑制NO 及PGE 2的生物合成或釋放有關(guān)。關(guān)鍵詞:側(cè)柏;總黃酮;前列腺素E 2;一氧化氮中圖分類號:R 332;R 282171

3、文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A側(cè)柏葉為柏科植物側(cè)柏Platycladus orien 2talis (L 1Framco 的干燥嫩枝及葉,為傳統(tǒng)的中藥,具有涼血止血、清肺止咳、祛風(fēng)散腫毒等功能,其所含的主要成分為黃酮類化合物、鞣質(zhì)及揮發(fā)油類等1。最近大量的文獻(xiàn)報(bào)道黃酮類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛等多種作用24,且在本研究組前期的研究中發(fā)現(xiàn)側(cè)柏葉的乙醇提取物對中性白細(xì)胞L TB 4及5-HETE 等炎癥介質(zhì)的生物合成有較強(qiáng)的抑制作用5。為此,作者從側(cè)柏葉中分離出有效成分側(cè)柏總黃酮并探討其抗炎作用。1材料111藥品與試劑角叉菜膠(Sigma 公司,氫化可的松注射液(HC ,揚(yáng)州制藥廠,地塞米松磷酸鈉注射液(Dex ,天

4、津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司,一氧化氮試劑盒(南京建成生物工程研究所。側(cè)柏葉(湛江藥材公司,經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室茍占平碩士鑒定為(Platycladus orientalis (L 1Franco ,其余為分析純試劑。112動物Wistar 大鼠,雄性,200250g ,小鼠,2025g ,雌、雄各半,均由廣東醫(yī)學(xué)院動物飼養(yǎng)中心提供,合格證號分別為:粵檢證字2002A013號和粵檢證字2002A014號。2方法與結(jié)果211側(cè)柏總黃酮的提取制備稱取側(cè)柏葉1kg ,用石油醚提取除去葉綠素等雜質(zhì),用50%(乙醇加熱回流提取,回收乙醇濃縮成浸膏。過聚酰胺柱,用甲醇洗脫,濃縮洗脫液,結(jié)晶得側(cè)柏總黃酮。用蘆丁為參照品

5、測得側(cè)柏總黃酮(TF 含量為93%。212側(cè)柏總黃酮的抗炎作用21211小鼠耳片腫脹法參照文獻(xiàn)2,小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只。分別腹腔注射生理鹽水(NS ,HC 陽性對照藥物及1215、2510、5010mg kg -1TF 3個(gè)劑量。30min 后用二甲苯011mL 均勻涂于小鼠右耳廓致炎,左耳對照,致炎60min 后頸椎脫臼處死動物,沿耳廓基線剪下兩耳,用9mm 直徑的打孔器分別在同一部位打下圓形耳片并稱質(zhì)量,以耳片腫脹度(兩耳片質(zhì)量之差作為炎癥指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示,1215mg kg -1劑量的TF 可顯著抑制二甲苯誘發(fā)小鼠耳片的腫脹,5010mg kg -1劑量的TF 對小鼠耳片

6、腫脹抑制率達(dá)4717%。21212大鼠足爪腫脹法Wistar 大鼠,每組8只,隨機(jī)分為(NS 對照組,地塞米松陽性對照組及受試藥TF 2510、5010mg kg 2個(gè)劑量組。腹腔注射給藥30min 后于大鼠右后足掌心處皮下注射1%(w 角叉菜膠第21卷第4期2004年7月沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)Journal of Shenyang Pharmaceutical UniversityVol 121No 14J ul.2004p 1301 011mL 致炎,分別在致炎前,致炎后1、3、4、5h 用自制毛細(xì)管放大測量裝置測量炎足爪容積,以各大鼠致炎前、后足爪容積的差值為腫脹度。 結(jié)果如圖2所示,2510

7、、5010mg kg -1的劑量能顯著抑制角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足爪腫脹,2510mg kg -1的側(cè)柏總黃酮作用強(qiáng)于210mg kg -1的地塞米松。21213前列腺素E 2(P GE 2含量測定Wistar 大鼠,隨機(jī)分為4組。分別腹腔注射NS ,陽性對照藥物Dex 及2510、5010mg kg -1劑量的TF 。30min 后于大鼠右后足掌心處皮下注射1%(w 角叉菜膠011mL 致炎,5h 后放血處死大鼠,于大鼠右踝關(guān)節(jié)處剪下腳掌,稱重剪碎,分別泡浸于5mLNS 中,振搖,1h 后3000r min -1離心10min ,取上清液-20保存待測生化指標(biāo)。分別取015mL 組織浸泡液,加入

8、015mmol L -1KOH 甲醇液2mL ,在50水浴中異構(gòu)化20min ,用甲醇液稀釋至4mL ,3000r min -1離心10min ,取上清液在278nm 處測A 值。結(jié)果如表1所示,2510、5010mg kg -1劑量的TF 能顯著降低足爪局部炎癥組織中P GE 2含量。T able 1The effect of TF on content of PGE 2in rats (n =8, x ±s Group Dose/(mg kg -1A /g-1Control 01178±01015Dex 21001145±0100933TF 251001159

9、±0101133TF501001146±010143333P <0101vs control21214一氧化氮(NO 含量的測定分別取組織浸泡液,參照一氧化氮試劑盒說明書(硝酸還原酶法測定NO 含量。結(jié)果如表2所示,TF 能顯著降低足爪局部炎癥組織中NO 的生成。T able 2The effect of TF on content of N O in rats (n =8,x ±s Group Dose/(mg kg -1c (NO /(mol g -1Control 1015±117Dex 210616±11633TF 2510518

10、±01833TF5010513±1133333P <0101vs control213統(tǒng)計(jì)方法各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以 x ±s 表示,兩樣本均數(shù)比較采用t 檢驗(yàn)。3討論二甲苯致小鼠耳片腫脹及角叉菜膠誘發(fā)大鼠足爪腫脹是常用的急性炎癥模型。研究結(jié)果表明劑量在12155010mg kg -1側(cè)柏TF 可顯著抑制小鼠耳片腫脹,2510、5010mg kg -1劑量能顯著抑制大鼠足爪腫脹,2510mg kg -1的側(cè)柏總黃酮作用強(qiáng)于210mg kg -1的地塞米松,表明側(cè)柏總黃酮具有較強(qiáng)的抑制急性炎癥作用。前列腺素E 2是炎癥反應(yīng)中一類活性很強(qiáng)的炎癥介質(zhì),ng 水平的P G

11、E 2就能引起炎癥反應(yīng)。P GE 2由環(huán)氧化酶催化花生四烯酸合成,環(huán)氧化酶存在兩種異構(gòu)體,即環(huán)氧化酶21(COX 1及環(huán)氧化酶2(COX 2。COX 1是結(jié)構(gòu)酶,在正常生理情況下具有活性,催化生成的P GE 2具有多種重要生理功能;COX 2是誘導(dǎo)酶,生理狀況下活性很低,當(dāng)受到某些因子刺激后,在炎癥細(xì)胞中高表達(dá),水平急劇增加,進(jìn)而引起炎癥部位203沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)第21卷P GE 2等產(chǎn)物大量增加,促進(jìn)炎癥反應(yīng)及組織損傷。環(huán)氧化酶抑制劑能有效地抑制P GE 2的合成,治療炎癥。研究結(jié)果表明,TF 能顯著降低大鼠足爪局部炎癥組織中P GE 2的含量,提示TF 的抗炎機(jī)制之一可能與抑制炎癥組織中P

12、 GE 2的合成或釋放有關(guān)。NO 是一種非常特殊的小分子,其結(jié)構(gòu)簡單,生物活性強(qiáng),極不穩(wěn)定,生物半衰期約5s 。體內(nèi)NO 的生物合成主要由一氧化氮合酶催化L 2精氨酸氧化產(chǎn)生瓜氨酸并釋放NO 。NO 作為一種神經(jīng)遞質(zhì)及特殊自由基,在炎癥的產(chǎn)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,急性及慢性炎癥的發(fā)生均與NO 釋放增多有關(guān)。一氧化氮合酶抑制劑可抑制角叉菜膠所致大鼠皮膚血清滲出和足跖腫脹,而L 2精氨酸則加重炎性滲出及水腫,在角叉菜膠誘導(dǎo)的炎癥模型中,NO 釋放增多,促進(jìn)血管擴(kuò)張,血管通透性增多,促進(jìn)水腫形成6。研究表明,TF 與Dex 一樣能顯著抑制大鼠足爪局部炎癥組織中NO 的生物合成,提示TF 的抗炎機(jī)

13、制可能與抑制NO 的生物合成有關(guān)。參考文獻(xiàn):1王康,張效林,薛偉明,等.側(cè)柏葉有效成分提取過程研究J .化學(xué)工程,1998,26(3:21-24.2張黎,陳志武,王瑜,等.銀杏葉總黃酮抗炎作用及機(jī)制的探討J .安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,36(5:350-352.3張逸凡,于慶海.淫羊藿總黃酮的抗炎作用J .沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1999,16(2:122-124.4姚余有,江禮生,陳敏珠.黃芪總黃酮對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用及機(jī)理研究J .中成藥,2001,23(9:661-663.5梁統(tǒng),覃燕梅,梁念慈.側(cè)柏葉醇提取物抗炎作用的研究J .中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,32(3:224-226.

14、6周玖瑤,李銳.腎復(fù)康膠囊的抗炎與NO 的關(guān)系研究J .廣東醫(yī)學(xué),2002,12(2:44-47.Anti 2inflammatory effects of total flavonoids isolat 2ed from Platycladus orientalisL IAN G Tong 1,Q IN Yan 2mei 2,DIN G Hang 2,L IAN G Nian 2ci 2,WU Ke 2feng 1,L IU Hui 2ming 2(1.Guangdong L aboratory f or Research and Development of N at ural D rug

15、s ,Guangdong Medical Col 2lege,Zhanjiang 524023,Chi na ;2.Depart ment of B iochem ist ry ,Guangdong Medical College ,Zhanjiang 524023,Chi na Abstract :Objective To investigate the anti 2inflammatory effects of total flavonoids isolated from Platy 2cladus orientalis .Methods The inflammatory models i

16、n mice and swelling of rats hind paws were inducedby dimethylbenzene and by carrageenan respectively.The contents of P GE 2and NO in the hind paws of rats were measured.R esults The total flavonoids isolated from Platycladus orientalis remarkably inhibited the ear edema induced by dimethylbenzene in mice at the dose of 12155010mg kg -1and the swelling ofrats hind paws induced by carrageenan at the dose of 2510,5010mg kg -1.In the inflammatory model of a rat s hind paws induced by carrageenan ,total flavonoids can decrease the contents of P GE 2and NO in the hind p