當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響

1、當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響         11-05-10 09:34:00     編輯：studa20                  作者：孫文平,李發(fā)勝,侯殿東,劉輝【摘要】  目的 以中藥植物多糖作為抗原,探討其對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的激發(fā)特點(diǎn),為多糖在免疫調(diào)節(jié)功能方面的應(yīng)用提供科

2、學(xué)依據(jù)。方法 取當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子3種中藥植物水溶性多糖為抗原,分別給予小白鼠免疫刺激,采用ELISA法檢測(cè)小鼠血清中的相應(yīng)抗體及交叉抗體。結(jié)果 3種中藥植物類水溶性多糖均能刺激小鼠產(chǎn)生特異性IgG類抗體及非特異性交叉抗體,不同多糖刺激產(chǎn)生非特異抗體范圍不同。結(jié)論 中藥多糖可能是一種泛特異廣譜免疫調(diào)節(jié)劑。 【關(guān)鍵詞】  多糖；當(dāng)歸；白術(shù)；制白附子；免疫調(diào)節(jié)；小鼠      一般認(rèn)為,多糖可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG型抗體,IgG型抗體分子量大,分布局限,實(shí)際免疫作用有限1,而中藥植物多糖是否可以刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG型抗體尚沒(méi)有統(tǒng)一的看法。本實(shí)

3、驗(yàn)用隨機(jī)選擇的當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子3種中藥植物多糖作為抗原,同時(shí)用其他種類的多糖作為對(duì)照,探討其對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的激發(fā)特點(diǎn)。1  材料與方法1.1  動(dòng)物    昆明種小鼠,雌雄兼用,體重(20±2)g,大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2  多糖    當(dāng)歸多糖、白術(shù)多糖、制白附子多糖由大連醫(yī)科大學(xué)臨床免疫教研室制備2,無(wú)菌稱取純化的當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子多糖各4.00 g,用蒸餾水定容至200 mL,4 保存?zhèn)溆谩Ｈ】扇苄缘矸?北京紅星化工廠,批號(hào)20040211)10.00 g,用蒸餾水定容至

4、200 mL,4 保存,為對(duì)照用。    按文獻(xiàn)3方法制備傷寒多糖(將傷寒桿菌診斷菌液80 mL置水浴鍋中煮2 h,離心取上清,即菌體多糖),4 保存,為對(duì)照用。1.3  分組及給藥    取小白鼠280只,隨機(jī)均分成空白對(duì)照組、當(dāng)歸多糖組、白術(shù)多糖組、制白附子多糖組、可溶性淀粉多糖組、傷寒多糖組。小鼠自由飲食。初次免疫：實(shí)驗(yàn)第1日,各實(shí)驗(yàn)組小鼠均于大腿內(nèi)側(cè)腹股溝皮下注射相應(yīng)的抗原,對(duì)照組注射生理鹽水,0.2 mL/只,小鼠自由飲食。加強(qiáng)免疫：實(shí)驗(yàn)第7日同方案加強(qiáng)注射1次,小鼠正常飲食。實(shí)驗(yàn)第14日,小鼠眼球取血,離心分離血

5、清,分裝備檢。1.4  特異性IgG抗體的檢測(cè)    用2%當(dāng)歸、白術(shù)及制白附子多糖、5%可溶性淀粉多糖及120稀釋傷寒多糖,每孔100 L包被酶標(biāo)板。主要步驟如下：將包被板洗滌拍干,各孔加15稀釋的待測(cè)血清100 L,37 孵育30 min,洗滌拍干,各孔加140稀釋的凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)100 L,孵育洗滌拍干,加底物及終止液。采用ELISA方法4檢測(cè)相應(yīng)IgG抗體,以O(shè)D值表示抗體水平。1.5  多糖免疫后小鼠交叉抗體的檢測(cè)1.5.1  免疫血清在各相應(yīng)多糖包被板中交叉抗體檢測(cè) 各組免疫血清5倍稀釋

6、后分別加到當(dāng)歸、白術(shù)、制白附子、可溶性淀粉、傷寒多糖及乙型肝炎病毒表面抗原包被的酶標(biāo)反應(yīng)板中。檢測(cè)多糖免疫后小鼠交叉抗體產(chǎn)生情況。1.5.2  多糖免疫前后小鼠類風(fēng)濕因子檢測(cè) 將各組免疫血清及對(duì)照血清15稀釋后與膠乳試劑(上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司,批號(hào)20040311)作用,檢測(cè)多糖免疫前后小鼠類風(fēng)濕因子產(chǎn)生情況。1.5.3  多糖免疫前后小鼠“血型抗體”檢測(cè) 將各組免疫血清及對(duì)照血清與制備好的人標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞等量混合,觀察凝集反應(yīng)現(xiàn)象,檢測(cè)多糖免疫前后小鼠“血型抗體”的變化。     11-05-10 09:34:0

7、0     編輯：studa202  結(jié)果表1  多糖免疫后各組小鼠產(chǎn)生相應(yīng)抗體的檢測(cè)結(jié)果（略）表2  所有免疫血清在8種抗原中產(chǎn)生的交叉抗體一覽表（略）注：“+”表示有交叉抗體產(chǎn)生,P<0.05；“-”表示沒(méi)有交叉抗體產(chǎn)生3  討論    近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),多糖及糖復(fù)合物在生物體中不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料,更重要的是它存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中,參與生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng),具有多種生物學(xué)功能。到目前為止,已有300多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被提取出來(lái),已發(fā)現(xiàn)有100多種植物來(lái)

8、源的多糖及糖綴合物具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖等多方面的藥理作用。大量的藥理和臨床研究表明,植物多糖類化合物是一種免疫調(diào)節(jié)劑,具有抑制腫瘤生長(zhǎng)、激活免疫細(xì)胞、改善機(jī)體免疫功能等作用5,沒(méi)有細(xì)胞毒性且藥物質(zhì)量通過(guò)化學(xué)手段容易控制,已成為當(dāng)今新藥的發(fā)展方向之一。我們從傳統(tǒng)的中藥植物中精選出當(dāng)歸、白術(shù)及制白附子多糖進(jìn)行免疫學(xué)研究,結(jié)果表明,中藥植物類多糖能明顯刺激小鼠產(chǎn)生IgG類特異性抗體,但各種多糖刺激產(chǎn)生的非特異性抗體不盡相同,各自表現(xiàn)為相對(duì)的獨(dú)立性。當(dāng)歸多糖免疫血清中存在與白術(shù)多糖和制白附子多糖兩種抗原發(fā)生交叉的多糖抗體,說(shuō)明當(dāng)歸多糖抗體是多克隆抗體；白術(shù)多糖免疫血清中存在與當(dāng)歸多糖抗原相對(duì)應(yīng)

9、的抗體；制白附子多糖免疫血清中存在與當(dāng)歸多糖抗原相對(duì)應(yīng)的抗體。類風(fēng)濕因子即抗IgG的抗體的檢測(cè)結(jié)果陰性,提示小鼠經(jīng)多糖免疫前后其血清中均不存在與IgG結(jié)合的抗體；小鼠經(jīng)多糖免疫后,其血清中產(chǎn)生了能與人標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞發(fā)生凝集的抗體物質(zhì),該物質(zhì)能與人的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O三型紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)。    淀粉是高等植物主要的儲(chǔ)存性多糖,可溶性淀粉是淀粉水解后的產(chǎn)物。研究中以其作為“標(biāo)準(zhǔn)”多糖對(duì)照；傷寒桿菌菌體多糖的免疫刺激作用早已被科學(xué)驗(yàn)證,本實(shí)驗(yàn)正是利用其免疫特性對(duì)實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)過(guò)程做以佐證,同時(shí)作為對(duì)照說(shuō)明植物多糖的免疫特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示,3種植物多糖均能刺激機(jī)體產(chǎn)生特

10、異性IgG類抗體,但不同多糖抗原產(chǎn)生的非特異性抗體的范圍不同。其中當(dāng)歸多糖產(chǎn)生的非特異性抗體的范圍最廣,提示當(dāng)歸多糖是一種泛特異廣譜免疫調(diào)節(jié)劑。中藥植物中存在著廣泛的免疫活性多糖,免疫活性多糖作用的強(qiáng)弱,與多糖本身的分子量、溶解度、粘度、劑量、給藥時(shí)間等有關(guān),也受機(jī)體本身的免疫功能狀態(tài)等因素的影響。就本實(shí)驗(yàn)研究的3種植物活性多糖來(lái)說(shuō),它們的化學(xué)組成、性質(zhì)和藥理特性都存在一些差別,因此表現(xiàn)出的免疫調(diào)節(jié)作用不盡相同,但并未發(fā)現(xiàn)其與傷寒多糖相比較而存在的顯著性特點(diǎn)。因此,在各種多糖的作用機(jī)制、構(gòu)效關(guān)系規(guī)律性等方面還有待于進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】  1 陳慰峰.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)M.第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2004.43.2 楊 光,李發(fā)勝,劉 輝.補(bǔ)骨脂多糖對(duì)小鼠激發(fā)態(tài)免疫功能的影響J.中藥材,20