急性白血病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞水平檢測(cè)及臨床意義

1、急性白血病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞水平檢測(cè)及臨床意義           作者：吳朝陽(yáng), 吳雅榮, 王法春, 陳巧云, 季勇慧 錢(qián)震 楊小飛 盛曉靜 張永寧, 錢(qián)軍 【摘要】  目的： 研究急性白血病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平變化及臨床意義。方法： 采用流式細(xì)胞儀對(duì)32例急性白血病患者 (急性髓細(xì)胞性白血病23例、急性淋巴細(xì)胞性白血病9例)及18例正常人外周血T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果： 初治急性白血病組與正常對(duì)照組比較，CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞

2、、CD4+/CD8+比值及NK細(xì)胞下降（P<0.05），CD8+細(xì)胞略升高（P>0.05）。化療后12例取得完全緩解，再次檢測(cè)上述指標(biāo)接近正常對(duì)照組（P>0.05）。初診急性淋巴細(xì)胞性白血病組CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值低于初診急性髓細(xì)胞性白血病組（P<0.05）。結(jié)論： 急性白血病患者細(xì)胞免疫功能明顯異常。與急性髓細(xì)胞性白血病相比，急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞免疫功能更為低下。T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平檢測(cè)在評(píng)價(jià)急性白血病療效及判斷預(yù)后方面具有一定的臨床價(jià)值。 【關(guān)鍵詞】  急性白血病； T細(xì)胞亞群； NK細(xì)胞     Abs

3、tract  Objective: To study the changes of T lymphocyte subsets，NK cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance.Methods： The different level of peripheral blood T lymphocyte subsets, NK cells of 32 acute leukemia patients and 18 normal controls were det

4、ected with flow cytometry. Results： Compared with the normal controls, the number of CD3+ T cell, CD4+T cell, NK cell and CD4+/CD8+ ratio reduced in newly diagnosed acute leukemia group(P<0.05), while those of CD8+ T cell slightly increased(P>0.05).Twelve of 32 patients achieved complete remis

5、sion after chemotherapy.Their level of T lymphocyte subsets，NK cells near those of normal controls（P>0.05）.The number of CD3+ T cell and CD4+/CD8+ ratio in newly diagnosed acute lymphoblastic leukemia group were lower than those in newly diagnosed acute myelogenous leukemia group(P<0.05). Conc

6、lusion： Cellular immune function is significantly abnormal in patients with acute leukemia.Compared with acute myelogenous leukemia, patients with acute lymphoblastic leukemia had more poor cellular immune function.Detection of T lymphocyte subsets，NK cells are clinically value on evaluation of ther

7、apeutic effect and prognosis of acute leukemia.        Key words  acute leukemia; T lymphocyte subsets; NK cell     急性白血?。╝cute leukemia,AL）是造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，其發(fā)生及發(fā)展與機(jī)體免疫紊亂有著密切的關(guān)系。在抗腫瘤免疫效應(yīng)中,細(xì)胞免疫比體液免疫起著更為重要的作用。T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞執(zhí)行細(xì)胞免疫功能，是機(jī)體抗腫瘤免疫的重要活性細(xì)胞。本文采用流

8、式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry,FCM）檢測(cè)急性白血病患者及健康人群外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的水平，并探討其臨床意義。     1  材料和方法     1.1  材  料     32例急性白血?。ˋL）外周血標(biāo)本均來(lái)自我院住院患者。其中男14例，女18例，年齡1572歲,中位年齡41歲；急性髓細(xì)胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)23例，急性淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL

9、)9例。初診患者分別于化療前、完全緩解后采集外周靜脈血2 ml，枸櫞酸鈉抗凝。18例正常對(duì)照外周血標(biāo)本采自健康體檢者。     1.2  方  法     取100 l上述抗凝血分別加入4個(gè)試管中，每管加入抗CD45?PerCP 10 l。各管再依次加入抗CD3-FITC+CD19-PE、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗CD3-FITC+CD8-PE、抗CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 l，避光室溫充分結(jié)合20 min后，每管加入溶血素2 m1,避光放置至透明后1 000 r/min 離心5 mi

10、n，棄去上清液體，加入2 m1 PBS在混合器上使試管底部的細(xì)胞與PBS溶液混勻，1 000 r/min離心5 min，最后加入0.4 ml PBS溶液混勻直接上流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)。     1.3   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理     應(yīng)用SPSS12.0處理數(shù)據(jù)，結(jié)果以±s表示，用t檢驗(yàn)方法比較各組間差異。     2  結(jié)  果     32例急性白血病患者T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的水平變化見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn): 與緩解AL

11、組相比較，初診AL組外周血CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD16+CD56+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CD8+細(xì)胞略升高，但無(wú)顯著差異(P>0.05)。初診AL組與對(duì)照組相比較有類(lèi)似的結(jié)果。而緩解AL組外周血CD3+細(xì)胞，CD4+細(xì)胞,CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及CD16+CD56+細(xì)胞與對(duì)照組相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。初治ALL組與AML組相比較，ALL組CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值低于AML組，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組CD3+細(xì)胞，CD8+及CD16+CD56+細(xì)胞間差異無(wú)統(tǒng)

12、計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。表1  急性白血病患者及正常對(duì)照組外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平        3  討  論     機(jī)體的細(xì)胞免疫異?？墒鼓[瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視，最終發(fā)生腫瘤。CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞在體內(nèi)抗腫瘤免疫中具有重要的作用。     CD4+細(xì)胞能輔助T細(xì)胞、B細(xì)胞活化，后兩者活化釋放的大量細(xì)胞因子能促進(jìn)CD8+T細(xì)胞及吞噬細(xì)胞的活性，并影響B(tài)細(xì)胞抗體的產(chǎn)生，從多方面調(diào)節(jié)和增強(qiáng)抗腫瘤效

13、應(yīng)。CD8+細(xì)胞常在免疫應(yīng)答后期增多，除可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）外，還能識(shí)別可溶性抗原，分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應(yīng)答，對(duì)CD4+細(xì)胞有調(diào)節(jié)性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個(gè)中心環(huán)節(jié)，是機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的重要樞紐，反映了機(jī)體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力1。這種免疫平衡紊亂時(shí)，可引起繼發(fā)性免疫缺陷。本組資料分析了32例不同類(lèi)型急性白血病患者的T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)初治AL患者CD3+、CD4+細(xì)胞以及CD4+ /CD8+比值明顯降低。其他惡性血液病如非霍奇金氏淋巴瘤中有類(lèi)似的變化2，3，在兒童急性白血病中也有類(lèi)似報(bào)道4，5。這些提示白血病患者輔助性T細(xì)胞

14、數(shù)量或功能低下，機(jī)體識(shí)別和殺傷白血病細(xì)胞的能力下降，與白血病的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)系。本組資料還提示，化療后緩解的患者，T淋巴細(xì)胞各亞群抗原表達(dá)接近正常，細(xì)胞免疫功能得到一定程度恢復(fù)。通過(guò)分析我們還發(fā)現(xiàn)，與AML比較，ALL患者CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值降低程度更顯著，提示原發(fā)于淋巴系統(tǒng)腫瘤的細(xì)胞免疫功能更低下。     CD16+CD56+是自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的標(biāo)志物，表達(dá)的量可能與NK細(xì)胞的數(shù)量或功能有關(guān)。NK是重要的天然免疫細(xì)胞, 起源于CD34+造血細(xì)胞，在骨髓微環(huán)境內(nèi)發(fā)育，形成具有免疫活性的成熟型細(xì)胞。它不需預(yù)先致敏,無(wú)MHC限制性,即可自

15、發(fā)地殺傷MHC?1類(lèi)分子缺陷或低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞, 具有廣譜的抗腫瘤、抗感染、免疫調(diào)節(jié)等作用，在機(jī)體免疫監(jiān)視過(guò)程中發(fā)揮重要功能。分析本組資料發(fā)現(xiàn)AL患者化療前CD16+CD56+細(xì)胞明顯降低，與樓瑾6等的研究結(jié)果相似，而化療后完全緩解者CD16+CD56+細(xì)胞又恢復(fù)到正常水平，進(jìn)一步說(shuō)明初發(fā)急性白血病NK細(xì)胞免疫功能明顯受損。     由于初治AL與緩解AL的T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的水平有明顯差異，檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞水平在評(píng)價(jià)AL療效及判斷預(yù)后方面具有一定的臨床價(jià)值。其臨床意義還有待積累更多病例進(jìn)行深入研究。     【參考文獻(xiàn)】      1 Yasutomo K. The cellular and molecular mechanism of CD4/CD8 lineage commitmentJ. J Med Invest, 2002，49(1/2):1-6.2 趙成艷，馬 榮，王忠利，等. 非霍奇金淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義J.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2006,22(2):180-185.3 莊萬(wàn)傳，李秀梅，韓秀華. 惡性血液病患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定及其意義J. 白血病?淋巴瘤，2006，15（6）