四逆散、歸脾湯與溫膽湯對(duì)慢性應(yīng)激肝郁模型大鼠行為學(xué)的影響

1、四逆散、歸脾湯與溫膽湯對(duì)慢性應(yīng)激肝郁模型大鼠行為學(xué)的影響         【摘要】 【目的】觀察疏肝方四逆散、養(yǎng)血健脾方歸脾湯和理氣化痰方溫膽湯對(duì)慢性應(yīng)激肝郁模型大鼠行為學(xué)的影響，以進(jìn)一步探討該模型的中醫(yī)證候性質(zhì)。【方法】選用SD大鼠40只，按10g/L蔗糖水?dāng)z取率分層隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、模型組、四逆散組（劑量為56g·kg-1        【摘要】  【目的】觀察疏肝方四逆散、養(yǎng)血健脾方歸脾湯和理氣化痰方

2、溫膽湯對(duì)慢性應(yīng)激肝郁模型大鼠行為學(xué)的影響，以進(jìn)一步探討該模型的中醫(yī)證候性質(zhì)?！痉椒ā窟x用SD大鼠40只，按10g/L蔗糖水?dāng)z取率分層隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、模型組、四逆散組（劑量為56g·kg-1·d-1）、歸脾湯組（劑量為196g·kg-1·d-1）、溫膽湯組（劑量為805g·kg-1·d-1）；采用慢性應(yīng)激刺激方法復(fù)制肝郁證模型，觀察各組大鼠體質(zhì)量、血清皮質(zhì)酮含量、10g/L蔗糖水?dāng)z取率和強(qiáng)迫游泳中靜止時(shí)間。【結(jié)果】模型組大鼠血清皮質(zhì)酮含量升高、蔗糖水?dāng)z取率降低、強(qiáng)迫游泳中靜止時(shí)間延長(zhǎng),與正常對(duì)照組比較差異均有顯著性意義（P0

3、05或P001）；四逆散組可降低血清皮質(zhì)酮含量、升高蔗糖水?dāng)z取率，縮短強(qiáng)迫游泳中靜止時(shí)間，與模型組比較差異均有顯著性意義（P005或P001）；歸脾湯組、溫膽湯組各檢測(cè)指標(biāo)均無(wú)顯著性改變（P005），各組大鼠體質(zhì)量增加量比較均無(wú)顯著性差異（P005）。【結(jié)論】本研究的慢性應(yīng)激大鼠模型屬肝郁證模型，與心脾兩虛及痰熱內(nèi)擾證無(wú)關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  慢性應(yīng)激/中藥療法；肝郁證/中藥療法；四逆散/治療應(yīng)用；歸脾湯/治療應(yīng)用；溫膽湯/治療應(yīng)用；疾病模型，動(dòng)物；大鼠Abstract:  ObjectiveTo observe the effects of Sini Powder (SP)，

4、Guipi Decoction (GD) and Wendan Decoction (WD)，which have the actions of soothing liver，nourishing blood and strengthening spleen，and regulating Qi and resolving phlegm respectively，on the behavior of rat models with liverQi stagnation induced by chronic stress，and to explore the essence of traditio

5、nal Chinese medical syndrome of this model.MethodsForty male SpragueDawley rats were exposed to an unpredictable sequence of mild stressors for 21 days while being treated by SP (56 g·kg-1·d-1)，GD (196 g·kg-1·d-1) or WD (805 g·kg-1·d-1).According to the intake rate of 1

6、0g/L sucrose solution，the rats were divided into normal control group，model group，SP group，GD group and WD group by stratified randomization.Body weight，standing time during forced swimming test and intake rate of 10g/L sucrose solution were investigated during the whole procedure.Serum corticostero

7、ne content was detected by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA).Results In the model group，serum corticosterone content was increased，intake rate of sucrose solution was reduced，and standing time during forced swimming test was prolonged (P005 or P001 compared with those in the normal control gr

8、oup).SP counteracted the above changes in the mode group (P<005 or P<001)，but GD and WD had no effect on the above indexes (P>005).The difference of body weight increase was insignificant between the 5 groups (P005).Conclusion The rat model of liverQi stagnation can be induced by chronic st

9、ress，which is different from the syndromes of deficiency of both heart and spleen and the interior disturbance of phlegmheat.Key words:  CHRONIC STRESS/TCD therapy;STAGNATION OF LIVERQI/TCD therapy;SINI POWDER /therapeutic use;GUIPI DECOCTION/therapeutic use;WENDAN DECOCTION/therapeutic use;DIS

10、EASE MODELS，ANIMAL;RATS證候是中醫(yī)學(xué)現(xiàn)代研究的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題之一。由于影響證候的因素復(fù)雜、范圍廣泛以及倫理學(xué)等方面因素的制約，使證候發(fā)生發(fā)展機(jī)理的研究很難深入，建立證候動(dòng)物模型是擺脫這一困境的重要途徑。肝郁證是臨床常見(jiàn)的基礎(chǔ)性證候，已有用CCl4注射、艾葉注射或夾尾急性激怒法、模具限制法等多種制作肝郁證動(dòng)物模型的報(bào)道1，但這些造模方法均因有種種缺陷，近年已很少應(yīng)用。為了更好地模擬臨床肝郁證，我們采用慢性應(yīng)激的方法初步建立了肝郁證大鼠模型2，并從臨床發(fā)病學(xué)特點(diǎn)、核心癥狀和3種治法代表方劑的治療效應(yīng)等方面，分析了該模型的合理性，初步認(rèn)為其證候性質(zhì)屬肝郁且與脾虛無(wú)關(guān)3-4。在上述

11、工作的基礎(chǔ)上，本研究擬比較疏肝方四逆散、養(yǎng)血健脾方歸脾湯和理氣化痰方溫膽湯對(duì)該模型大鼠的行為學(xué)效應(yīng)，以進(jìn)一步探討該模型的中醫(yī)證候性質(zhì)?，F(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法11藥物、試劑及儀器按照方劑學(xué)5確定方劑的組成，其中四逆散（傷寒論）：柴胡6g，枳實(shí)6g，生白芍6g，炙甘草6g；歸脾湯（濟(jì)生方）：白術(shù)9g，茯苓9g，黃芪12g，龍眼肉12g，炒酸棗仁12g，人參6g，木香6g，炙甘草3g，當(dāng)歸9g，遠(yuǎn)志6g；溫膽湯（三因極一病證方論）：半夏6g，竹茹6g，枳實(shí)6g，橘皮9g，炙甘草3g，茯苓45g。以上各方用飲用水將中藥免煎顆粒（首創(chuàng)大地藥業(yè)有限公司）按成人（以60kg計(jì)）1日用量的14倍配制成懸濁液

12、，其中四逆散濃度為056g/mL，歸脾湯濃度為196g/mL，溫膽湯濃度為0805g/mL。蔗糖（C12H22O11，分子量為34229）購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司；皮質(zhì)酮酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定試劑盒（批號(hào)：24110603）購(gòu)自美國(guó)R&D公司。HY2調(diào)速多用振蕩器購(gòu)自江蘇金壇金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠。12動(dòng)物、分組及給藥雄性SD大鼠40只（SPF級(jí)），體質(zhì)量190210g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）20020003；正常光照條件，自由攝取食水，馴養(yǎng)1周并進(jìn)行10g/L蔗糖水?dāng)z取訓(xùn)練。禁水24h后，于第2天清晨89時(shí)測(cè)定1h的10g/L蔗糖水?dāng)z取量，計(jì)算攝

13、取率，隨后采用區(qū)組隨機(jī)設(shè)計(jì)的方法，按10g/L蔗糖水?dāng)z取率劃分區(qū)組，再按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，每組8只。正常對(duì)照組群養(yǎng)，每天灌胃飲用水10mL/kg；慢性應(yīng)激模型組（簡(jiǎn)稱模型組）孤養(yǎng)，每天灌胃飲用水10mL/kg，并按程序施加造模刺激；慢性應(yīng)激加四逆散組（簡(jiǎn)稱四逆散組）每天灌胃劑量為56g/kg的四逆散懸濁液，并按程序施加造模刺激；慢性應(yīng)激加歸脾湯組（簡(jiǎn)稱歸脾湯組）：每天灌胃劑量為196g/kg的歸脾湯懸濁液，并按程序施加造模刺激；慢性應(yīng)激加溫膽湯組（簡(jiǎn)稱溫膽湯組）：每天灌胃劑量為805g/kg的溫膽湯懸濁液，并按程序施加造模刺激。普通飼料與飲用水在允許時(shí)可自由攝取。各組處理時(shí)間均為21d

14、，每3d測(cè)定1次大鼠體質(zhì)量，以調(diào)整灌胃藥量。13造模方法2刺激方法包括：夾尾1min，水平振蕩160次/min共30min，4冰水游泳5min，禁水24h，禁食24h，晝夜顛倒24h，45熱環(huán)境5min。上述刺激每天1種，每種刺激各3次，隨機(jī)安排，使動(dòng)物不能預(yù)知次日的刺激。14血清皮質(zhì)酮測(cè)定于末次刺激后次日，斷頭取血，4放置3h后，4離心15min（4000g），分離血清，-40保存?zhèn)錅y(cè)。檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。15蔗糖水?dāng)z取率測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)6的方法操作。在正式實(shí)驗(yàn)前，先對(duì)大鼠進(jìn)行蔗糖水?dāng)z取訓(xùn)練，即先用10g/L蔗糖水和飲用水同時(shí)喂養(yǎng)48h，然后斷水24h，于次日清晨89時(shí)再次同時(shí)給予大鼠自

15、由飲用10g/L蔗糖水和飲用水共1h，分別記錄攝取量，根據(jù)下列公式計(jì)算蔗糖水?dāng)z取率（p攝?。?，并在實(shí)驗(yàn)的第7、14、21天各重復(fù)測(cè)量1次。p攝取=V蔗糖水（V蔗糖水+V飲用水）×100%16強(qiáng)迫游泳中靜止時(shí)間測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)7的方法進(jìn)行。于末次應(yīng)激24h后，先進(jìn)行適應(yīng)性強(qiáng)迫游泳15min，即將大鼠放入內(nèi)徑20cm、高60cm的圓形透明玻璃缸中，缸中加溫度（25±1）的溫水，深約25cm，使大鼠在水中不能以后爪支撐身體、前爪攀附于缸壁，取出后用毛巾擦干放回籠中。每缸水僅使用1只大鼠。24h后再同樣將大鼠放入水中，累計(jì)記錄5min內(nèi)大鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)的時(shí)間。每只大鼠僅進(jìn)行1次實(shí)驗(yàn)，由兩人同時(shí)觀察記錄，取平均值作為各大鼠強(qiáng)迫游泳靜止時(shí)間的數(shù)據(jù)。17統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS130